양육 먼저 먹이 제브라 피쉬의 전체 및 업데이트 "로티퍼 다종 양식 방법"
Summary
Larval zebrafish are adapted to feed on zooplankton. It is possible to capitalize on this natural feature in the laboratory by growing first feeding fish together in the same system with live saltwater rotifers. This “polyculture” strategy promotes high growth and survival with minimal labor and disturbance to the larvae.
Abstract
The zebrafish (Danio rerio) is a model organism of increasing importance in many fields of science. One of the most demanding technical aspects of culture of this species in the laboratory is rearing first-feeding larvae to the juvenile stage with high rates of growth and survival. The central management challenge of this developmental period revolves around delivering highly nutritious feed items to the fish on a nearly continuous basis without compromising water quality. Because larval zebrafish are well-adapted to feed on small zooplankton in the water column, live prey items such as brachionid rotifers, Artemia, and Paramecium are widely recognized as the feeds of choice, at least until the fish reach the juvenile stage and are able to efficiently feed on processed diets. This protocol describes a method whereby newly hatched zebrafish larvae are cultured together with live saltwater rotifers (Brachionus plicatilis) in the same system. This polyculture approach provides fish with an “on-demand”, nutrient-rich live food source without producing chemical waste at levels that would otherwise limit performance. Importantly, because the system harnesses both the natural high productivity of the rotifers and the behavioral preferences of the fish, the labor involved with maintenance is low. The following protocol details an updated, step-by-step procedure that incorporates rotifer production (scalable to any desired level) for use in a polyculture of zebrafish larvae and rotifers that promotes maximal performance during the first 5 days of exogenous feeding.
Introduction
제브라 피쉬 (다니오 레 리오 (rerio)는), 과학 분야의 증가에 이용 탁월한 실험 동물을 포함하지만 발달 유전학, 독성학, 행동 양식, 재생 생물학, 많은 사람의 장애 1의 모델링에 국한되지 – 5. 종 실험실에서 유지하기가 비교적 용이하지만, 그 배양 6와 연관된 관리 문제가 있습니다. 이 중 가장 눈에 띄는 물고기는 제 1 가스 방광 인플레이션 7 이후에 공급하기 시작 특히, 유생 양육이다. 성장 5 일, 특히 중요한 7 인 – 정상, 통제 된 조건에서이 발달 이벤트는 다음과 같은 3가 5 ~에서 일 이후 수정 (DPF)를 발생합니다. 공급 아이템, diges 적절한 크기이어야 -이 단계 동안 중앙 기술적 어려움 적절히 제 1 급전 유충의 영양 요구를 충족하는 것이다배양 탱크에 과도한 폐기물을 만들지 않고 거의 지속적으로 매력적인, 가능한 tible,,. 역사적으로이 일상 물 교환 8,9과 함께 탱크에 물고기 사료의 수많은 작은 양을 제공하여 일반적으로 달성되었다. 이들 방법은 어느 정도 성공하지만, 그들은, 비효율적 높은 노동 입력을 요구하고, 전용 변수 및 성장과 생존 (10)의 제한 속도를 반환한다.
자연에서, 제브라 피쉬 애벌레는 아마도 물 열 (11)이 풍부 작은 동물성 플랑크톤의 존재에 공급. 이러한 이유로, 그러한 짚신, 피퍼 및 아테 라이브 피드를 포함 larviculture 프로토콜은 전형적으로 7 가장 효율적이다. 2010 년, 최고 및 공동 저자는 외생 공급 (12)의 처음 5 일 동안 바닷물 로티퍼와 함께 정적, 소금기있는 물 속에서 애벌레 제브라 피쉬를 성장 가능하다는 것을 보여 주었다. 활용이 접근,ES 로티퍼 배양의 자연 높은 생산성이 낮은 노동 투입 (12, 13)와 유생의 성장과 생존의 수익률이 매우 높은 요금, 물을 오염하지 않고 충분한, 매우 영양가있는 먹이를 제공합니다. 최근 몇 년 동안, 전 세계 실험실의 증가는이 프로토콜의 변형을 채택하고, 많은 사람들이 지금 보육 시스템 (14)을 지원하기 위해 연속적인 방식으로 로티퍼를 배양한다.
지난 몇 년 동안, 로티퍼 / 제브라 피쉬 다종 양식 및 로티퍼 생산 모두를위한 방법은 정제보다 표준화와 쉽게 확장되고 개선되었습니다. 이 기사는 1에 대한 단계별 지침) 지속적이고 강력한 로티퍼 생산과 2) 외생 공급의 처음 5 일 동안 물고기의 강력한 성장을 지원하는 데 사용되는 로티퍼 / 제브라 피쉬 다종 양식 시스템의 구축을 제공합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
같은 탱크에 로티퍼와 함께 zebrafish의 애벌레를 처음 공급 물고기를 공급하는 연속 로티퍼 배양 시스템의 구축과 유지 보수 및 배양 : 초기 애벌레 제브라 피쉬를 공급하기위한 로티퍼의 다종 양식 방법의 성공적인 구현은 효과적인 두 가지 작업을위한 프로토콜을 필요로한다.
처음 로렌스와 공동 저자 (14)에 의해 설명 된 제브라 피쉬의 실험실 연속 바닷물 로티퍼 ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
관리 및이 프로토콜에 설명 된 대표적인 결과에 대해 생성 된 물고기의 사용은 보스턴 어린이 병원, 프로토콜 # 1 14-05-2673R에서 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 명시된 지침과 전체에 따라 수행되었다.
Materials
| Rotifer Culture Infrastructure | |||
| 100 Liter Culture Vessel | Aquaneering | Custom | Polycarbonate culture vessel, conical bottomed, with drain valve |
| 5 Gallon Culture Bucket Kit | Reed Mariculture | CCS Starter Kit | Small volume culture vessel for small facilities |
| Rigid Clear Tubing 1/2" O.D., 36” | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Rigid clear tubing for air delivery |
| Mesh tube | Pentair Aquatic Ecosystems | RT444X | Mesh tube support for floss filter |
| Rotifer Floss | Reed Mariculture | Rotifer floss 12” x 42” | Particulate waste trap |
| Peristaltic Metering Timer Pump, 5 GPD | Grainger | 38M003 | Metering pump with timer for dosing feed to rotifers |
| Peristaltic Metering Timer Pump, 1-100 mL/h (for smaller-scale culture) | Coral Vue | SKU: IC-LQD-DSR | Metering pump with timer for dosing feed to rotifers |
| Silicone Tubing | Cole Parmer | Tubing for algae delivery to rotifer vessel | |
| Rigid Clear Tubing " O.D.,36” | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Rigid clear tubing for air delivery to algae paste |
| Rigid Clear Tubing O.D., 36” | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Rigid clear tubing for algae delivery |
| Rotifers | |||
| Live Rotifers Brachionus plicatilis Type L | Reed Mariculture | Type L 5 million | Rotifer stock culture for system startup |
| Rotifer Feed | |||
| Sodium hydroxymethylsulfonate | Reed Mariculture | ClorAm-X® 1lb tub | Ammonia reducer for algae feed mix |
| Sodium Bicarbonate | Fisher Scientific | S25533B | pH buffer for algae feed mix |
| Microalgae concentrate | Reed Mariculture | Rotigrow Plus® 1 liter bag | Nutritionally optimized rotifer feed |
| Water Preparation | |||
| Reef Crystals Reef Salt | That Fish Place | 198210 | Salt for making culture water (NOTE: this item is an example only; any contaminant free salt formulations may be used). |
| Refractometer | Pentair Aquatic Ecosystems | SR6 | measuring salinity |
| Rotifer Culture Equipment | |||
| Plankton Collectors 12" Dia, 53 microns | Pentair Aquatic Ecosystems | BBPC20 | Mesh screen for collecting rotifers |
| Scrub Pads | Pentair Aquatic Ecosystems | SCR-58 | Scrub pad for cleaning inside of culturing vessels |
| Scrub Brush | |||
| Bucket | Grainger Supply | 43Y530 | Graduated bucket for mixing culture water |
| Hatching Jar | Pentair Aquatic Ecosystems | J30 | Storage of algae feed mix |
| Lugol’s Solution, Dilute | Fisher Scientific | S99481 | Agent used to immobilize live rotifers for counting |
| Sedgewick-Rafter plankton counting slide with grid | Pentair Aquatic Eco-Systems | M415 | Counting rotifers |
| Miscelleneous | |||
| Tea Strainer | Kitchenworks | 971972 | Used for collecting zebrafish embryos after spawning |
References
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