Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Procédure pour évaluer l'efficacité de floculants pour l'élimination des particules dispersées dans des extraits de plantes

8.7K vues

⸱

DOI :

10.3791/53940

⸱

9 avril 2016

Dans cet article

Résumé

La procédure de plan d’expériences présentée ici permet d’évaluer différents floculants en fonction de leur capacité à agréger des particules dispersées dans des extraits de plantes, réduisant ainsi la turbidité et les coûts de traitement en aval.

Résumé

Les plantes sont importantes pour l’homme non seulement parce qu’elles fournissent des produits de base tels que des denrées alimentaires, des aliments pour animaux et des matières premières, mais aussi parce qu’elles peuvent être utilisées comme plateformes de fabrication de produits à valeur ajoutée tels que les produits biopharmaceutiques. Dans les deux cas, il peut être nécessaire de clarifier les extraits liquides de plantes pour éliminer les particules. Une clarification optimale réduit les coûts de filtration et de centrifugation en augmentant la capacité et la longévité. Cela peut être réalisé en introduisant des polymères chargés connus sous le nom de floculants, qui réticulent les particules dispersées pour faciliter la séparation solide-liquide. Il n’existe pas de modèles de floculation mécaniste pour des mélanges complexes tels que les extraits de plantes, c’est pourquoi des modèles empiriques sont utilisés à la place. Ici, une procédure de plan d’expériences est décrite qui permet le criblage rapide de différents floculants, optimisant la clarification des extraits de plantes et réduisant considérablement la turbidité. Les modèles prédictifs qui en résultent permettent d’identifier des conditions de processus robustes et des ensembles de polymères aux propriétés complémentaires, par exemple la floculation efficace dans les extraits à conductivités spécifiques. Les résultats présentés pour les extraits de feuilles de tabac peuvent facilement être adaptés à d’autres espèces ou tissus végétaux et faciliteront ainsi le développement de procédés en aval plus rentables pour les produits de base et les produits pharmaceutiques d’origine végétale.

Introduction

Les plantes sont largement utilisées pour produire des produits alimentaires tels que les jus de fruits, mais ils peuvent aussi être développés comme des plates - formes pour la fabrication de plus forte valeur ajoutée des produits biopharmaceutiques 1-3. Dans les deux cas, le traitement en aval (DSP) commence souvent par l'extraction de liquides à partir de tissus tels que les feuilles ou les fruits, suivie par la clarification des extraits chargés de particules de 4,5. Pour la fabrication de produits biopharmaceutiques, les coûts de DSP peuvent représenter jusqu'à 80% des coûts de production globaux 6,7 et cela reflète en pa....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Protocole

1. Élaborer une stratégie expérimentale adéquate

  1. Identifier les paramètres environnementaux et de processus qui sont pertinentes pour la procédure de floculation à établir ou optimisé, à savoir quels facteurs ont le plus d' effet sur ​​la floculation. En règle générale, il existe plusieurs paramètres pour une approche DoE comme récemment décrit 20 est nécessaire en raison de l'absence de modèles mécanistes.
    1. Sélectionnez les paramètres (facteurs) sur la base de données de la littérature, 12 connaissance préalable et de l' expérience avec le système. Les facteurs typiques comprennent un tampon pH, la conduc....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

Floculation de l'extrait de tabac avec différents polymères

Le procédé décrit ci - dessus a été utilisée avec succès pour développer un procédé pour la floculation des extraits de tabac lors de la fabrication d'un anticorps monoclonal (l'anticorps anti - VIH neutralisant 2G12) et une protéine fluorescente (DsRed) (figure 1) 16, et a depuis été transféré à d'autres protéines, y compri.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Discussion

L'aspect le plus important à considérer lors de la mise en place d' un DoE pour caractériser la floculation des particules est que la conception doit en principe être en mesure de détecter et de décrire les effets prévus ou possibles 36,38, par exemple l'influence du pH, le type de polymère et la concentration de polymère 16. Par conséquent, il est important d'évaluer la fraction de l'espace de conception (FDS) avant de commencer les expériences réelles. Fds est la frac.......

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Déclarations de divulgation

L'auteur n'a aucun conflit d'intérêt à divulguer.

Remerciements

Je tiens à remercier le Dr Thomas Rademacher pour avoir fourni les graines de tabac transgéniques et Ibrahim Al Amedi pour la culture des plants de tabac. Je tiens à remercier le Dr Richard M Twyman pour son aide éditoriale et le professeur Rainer Fischer pour les discussions fructueuses. Ce travail a été financé en partie par la subvention avancée du Conseil européen de la recherche ''Future-Pharma'', numéro de proposition 269110, la Fraunhofer-Zukunftsstiftung (Fondation Fraunhofer Future) et les programmes internes Fraunhofer-Gesellschaft sous la subvention n°. Attirer 125-600164.

....

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
2100P Turbidimètre portableHach4650000Turbidimètre
2G12 AnticorpsPolymunAB002Anticorps de référence
Biacore T200GE Healthcare28-9750-01Dispositif SPR
BP-410Furh2632410001Filtre à manches
Catiofast VSHBASF79002360Agent
floculantCentrifugeuse 5415DEppendorf5424 000.410Centrifugeuse
Tube à centrifuger 15 mlLabomedic2017106Tube à
réaction Tube à centrifuger 50 ml AutonomeLabomedic1110504Tube à réaction
ChitosanCarl Roth GmbH5375.1Agent floculant
Design-Expert(R) 8Stat-Ease, Inc.n.a.DoEsoftware
Phosphate disodiqueCarl Roth GmbH  ; 4984.3  ;Composant multimédia
Ferty 2 MegaKammlott5.220072Engrais
Forma -86C CongélateurULT ThermoFisher88400Congélateur
Serren.a.n.a.Pourla culture des plantes
Grodan Cubes de laine de roche 10 x 10 cmGrodan102446Bloc de laine de roche
HEPESCarl Roth GmbH9105.3Composant de média
K700P 60DPall5302305Couche filtrante en profondeur
KS50P 60DPallB12486Couche filtrante en profondeur
MiraclothLabomedic475855-1RToile filtrante
MultiLine Multi 3410 IDSWTWWTW_2020pH-mètre / conductimètre
Osram cool white 36 WOsram4930440Source lumineuse
PhytotronIlka Zelln.a.Pourla culture des plantes
Polymin PBASF79002360Floculant
POLYTRON PT 6100 DKinematica11010110Dispositif d’homogénéisation avec outil à lame personnalisé
Protein ALife technologies10-1006Protéine de liaison aux anticorps
Chlorure de sodiumCarl Roth GmbHP029.2Composant du milieu
Synergy HTBioTekSIAFRTLecteur de plaques de fluorescence
TRISCarl Roth GmbH4855.3Composant multimédia
Tween-20Carl Roth GmbH9127.3Composant multimédia
VelaPad 60PallVP60G03KNH4Boîtier de filtre
Zetasizer Nano ZSMalvernZEN3600DLS mesure de la distribution granulométrique

Références

  1. Godfray, H. C. J., et al. Food Security: The Challenge of Feeding 9 Billion People. Science. 327, 812-818 (2010).
  2. Fischer, R., Schillberg, S., Buyel, J. F., Twyman, R. M. Commercial aspects of pharmaceutical protein production in plants. Curr. Pharm. Des. 19

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Réimpressions et autorisations

Explorer plus d’articles

Efficacité du floculantClarification d'extraits végétauxPlan d'expériencesMesure de la turbiditéCriblage de polymèresProcessus de floculationFiltration en profondeurExtrait de feuille de tabacOptimisation du processusSéparation solide-liquide