Murine Prostate Micro-dissection et Castration chirurgicale
Summary
Ce manuscrit décrit les protocoles de la prostate microdissection et la castration chirurgicale chez la souris de laboratoire. Nous représentons également des résultats représentatifs produits par ces protocoles. Enfin, nous discutons des avantages et de l'utilisation de ces protocoles.
Abstract
Mouse models are used extensively to study prostate cancer and other diseases. The mouse is an excellent model with which to study the prostate and has been used as a surrogate for discoveries in human prostate development and disease. Prostate micro-dissection allows consistent study of lobe-specific prostate anatomy, histology, and cellular characteristics in the absence of contamination of other tissues. Testosterone affects prostate development and disease. Androgen deprivation therapy is a common treatment for prostate cancer patients, but many prostate tumors become castration-resistant. Surgical castration of mouse models allows for the study of castration resistance and other facets of hormonal biology on the prostate. This procedure can be coupled with testosterone reintroduction, or hormonal regeneration of the prostate, a powerful method to study stem cell lineages in the prostate. Together, prostate micro-dissection and surgical castration opens up a multitude of opportunities for robust and consistent research of prostate development and disease. This manuscript describes the protocols for prostate micro-dissection and surgical castration in the laboratory mouse.
Introduction
La prostate est le site le plus commun de cancer chez les hommes aux États-Unis. Près de 220.000 hommes chaque année recevront un diagnostic de cancer de la prostate, et environ 27.000 hommes succomberont à leur maladie 1. Les hommes ont un risque de 1 sur 7 à vie d'un diagnostic de cancer de la prostate aux États – Unis 1. Hyperplasie bénigne de la prostate (HBP), un élargissement noncancerous liée à l' âge de la prostate, est également une condition répandue, affectant plus de 80% des hommes de plus de 80 2. En tant que tel, la prostate est l'objet de nombreuses recherches.
Des modèles de souris ont été largement utilisés pour étudier les maladies de la prostate 3. Dans l' ensemble, la prostate de la souris est un excellent représentant de la glande humaine 4, mais il y a des similitudes et des différences entre la souris et de l' anatomie de la prostate et la physiologie humaine 5. Chez les deux espèces, la prostate est située à la base de la vessie, qui entoure l'urètre. La glande de la prostate humaine est un loêtre divisé en quatre zones: centrale, transition, périphérique, et antérieure fibromusculaire stroma. En revanche, la prostate de la souris est composé de trois lobes couplés à des positions différentes autour de l'urètre: antérieure ventrale et dorso. Au niveau cellulaire, la principale différence est que la cellule de base au rapport cellulaire luminale humain est d' environ 1: 1, mais il est de 1: 4 à 6 souris. Le stroma de souris est également différente chez les souris par rapport à l'homme – les humains ont plus étendu des muscles lisses, tandis que la couche musculaire est beaucoup plus mince dans la prostate murin. L'identification correcte, la dissection et la manipulation de la prostate de la souris sont essentiels à la recherche de la prostate de la souris.
Les niveaux d'hormones influencent fortement le développement et l'homéostase de la glande de la prostate chez les humains et les souris. Alors que l' oestrogène semble jouer un rôle dans le développement de la prostate 7, l'hormone la plus importante de la prostate est la testostérone. La testostérone est essentielle pour glandulaire un développementd 'entretien. Soit après la castration chimique ou physique, environ 90% des cellules luminales de la prostate apoptose des adultes et la glande se rétrécit. Si la testostérone est réintroduit à un individu dans des conditions de castration, la prostate est capable de se régénérer à pleine capacité. La testostérone semble également conduire le cancer de la prostate, ce qui explique pourquoi la thérapie de privation androgénique est une stratégie thérapeutique utilisée. Cependant, de nombreux cancers de la prostate deviennent résistantes à la privation androgénique. En outre, les hommes qui suivent un traitement de privation androgénique pour le traitement du cancer de la prostate subissent des cycles de conditions castrés et régénérées. Chez la souris, la castration chirurgicale, ainsi que la régénération hormonale de la prostate en réintroduisant la testostérone, est un outil important pour étudier la résistance à la castration et les effets du cyclisme de la testostérone sur la prostate.
Dans cet article, nous allons discuter et démontrer les techniques appropriées par lequel Locate et la micro-dissection d'une prostate de souris, ainsi que pour castrer chirurgicalement d'une souris.
Protocol
Representative Results
Discussion
Prostate microdissection permet une expérimentation précise du lobe et l' analyse de la prostate de la souris (figure 1). Dans les modèles de souris génétiquement modifiées, les phénotypes peuvent être vus dans un lobe qu'on ne voit pas dans d'autres. En outre, pour l'analyse histologique, ce protocole assure que la quantité maximale de tissus de la prostate pur peut être sectionné et coloré, sans autres tissus du tractus uro-génital présentes dans la section. Enfin, pour d…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Certains des chiffres dans ce manuscrit ont été généreusement fournies par le laboratoire de Bart O. Williams. Les auteurs sont pris en charge par l'Institut national du cancer accorde U54CA143803, CA163124, CA093900, CA143055 ET.
Materials
| Surgical tools | Roboz | Various | |
| Formaldehyde | Sigma | F8775 | |
| OCT medium | VWR | 25608-930 | Must be placed on dry ice to freeze, and stored at -80C |
| PBS | Life Technologies | 10010 | |
| Isoflurane | Johns Hopkins | Also available from vendors online | |
| Cautery Pen | Medline | ESCT002 | |
| Silk suture | AD Surgical | M-S330R19 | |
| Surgical Wound Clips | Roboz | RS-9265 |
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