उठना, स्तन कैंसर मेटास्टेसिस के एक orthotopic माउस मॉडल
Summary
एक orthotopic स्तन कैंसर के प्राथमिक ट्यूमर मॉडल और प्राथमिक ट्यूमर के सर्जिकल हटाने माउस जीवन का विस्तार करने के लिए सहज मेटास्टेसिस उत्पन्न करने के लिए वर्णित हैं। ट्यूमर के विकास और प्रगति पर नजर रखी और luciferase प्रतिदीप्ति इमेजिंग द्वारा मात्रा रहे हैं।
Abstract
मेटास्टेसिस स्तन कैंसर के रोगियों की मृत्यु का प्रमुख कारण है। तंत्र स्तन कैंसर मेटास्टेसिस सहित कैंसर सेल मेटास्टेसिस, अंतर्निहित, काफी हद तक अनजान है और कैंसर अनुसंधान के क्षेत्र में ध्यान केंद्रित है। विभिन्न स्तन कैंसर सहज मेटास्टेसिस माउस मॉडल स्थापित किया गया है। यहाँ, हम एक सरलीकृत प्रक्रिया ओर्थोटोपिक प्रत्यारोपित स्तन कैंसर के प्राथमिक ट्यूमर की स्थापना और सहज मेटास्टेसिस कि मानव स्तन कैंसर मेटास्टेसिस नकल परिणामी को रिपोर्ट करते हैं। bioluminescence लाइव ट्यूमर इमेजिंग के साथ संयुक्त, इस माउस मॉडल ट्यूमर के विकास और प्रगति कैनेटीक्स और निगरानी की मात्रा निर्धारित किया जा करने के लिए अनुमति देता है। इस मॉडल में, 4T1 ल्यूक स्तन कैंसर की कोशिकाओं के एक कम खुराक (1 x 10 4 कोशिकाओं) एक ट्यूबरकुलीन सिरिंज का उपयोग BALB / ग माउस स्तन वसा पैड में इंजेक्ट किया गया था। चूहे luciferin के साथ इंजेक्शन और एक bioluminescent इमेजिंग प्रणाली का उपयोग कर विभिन्न बिंदुओं पर समय imaged थे। प्राथमिक ट्यूमर IACUC अनुमोदित प्रोटोकॉल के रूप में आकार सीमित करने के लिए बढ़ी जब (approximately 30 दिन), चूहों 2% isoflurane और ऑक्सीजन के निरंतर प्रवाह के तहत anesthetized थे। ट्यूमर क्षेत्र में 70% इथेनॉल के साथ निष्फल किया गया था। ट्यूमर के आसपास माउस त्वचा ट्यूमर जो बाँझ कैंची की एक जोड़ी के साथ हटा दिया गया था बेनकाब करने के लिए अलग किया गया। प्राथमिक ट्यूमर को हटाने के एक महीने के लिए 4T-1 ट्यूमर असर चूहों के अस्तित्व फैली हुई है। चूहों फिर बार बार metastatic ट्यूमर दूर अंगों को फैलाने के लिए imaged थे। चिकित्सीय एजेंट इस बिंदु पर ट्यूमर मेटास्टेसिस को दबाने के लिए प्रशासित किया जा सकता है। इस मॉडल को सरल और प्राथमिक साइट और दूर के अंगों को प्रगति कैनेटीक्स में स्तन कैंसर सेल के विकास को बढ़ाता में अभी तक संवेदनशील है, और इस तरह, और vivo में विरोधी मेटास्टेसिस चिकित्सीय और immunotherapeutic एजेंटों के परीक्षण के लिए स्तन कैंसर के विकास और प्रगति के अध्ययन के लिए एक शानदार मॉडल है ।
Introduction
अमेरिकन कैंसर सोसायटी के अनुसार, स्तन कैंसर के सबसे अधिक बार निदान संयुक्त राज्य अमेरिका में महिलाओं में कैंसर का रूप है। हाल ही में विकसित लक्षित चिकित्सा के साथ संयोजन में जल्दी पता लगाने में काफी पिछले दो दशकों में स्तन कैंसर की मृत्यु दर में कमी आई है। हालांकि, अभी भी स्तन कैंसर यूनाइटेड स्टेट्स 1 में महिलाओं में कैंसर से संबंधित मौत का दूसरा प्रमुख कारण है। स्तन कैंसर के रोगियों की मौत के बहुमत ट्यूमर सेल मेटास्टेसिस के कारण हैं। दुर्भाग्य से, अधिकांश स्तन कैंसर के आक्रामक है और अक्सर हड्डी, फेफड़े, जिगर और मस्तिष्क सहित दूर अंगों को लिम्फ नोड के लिए metastasizes और बाद में। 1,2 वर्तमान में metastatic स्तन कैंसर के लिए कोई प्रभावी उपचार नहीं है। इसलिए, कीमोथेरेपी और immunotherapeutic एजेंटों के विकास को दबाने के लिए metastatic स्तन कैंसर बहुत महत्व का है।
विभिन्न स्तन कैंसर सहज मेटास्टेसिस माउस मॉडल ख हैeen स्तन ट्यूमर सेल प्रगति और मेटास्टेसिस और चिकित्सीय एजेंट के विकास के लिए मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया जा करने के लिए अंतर्निहित आणविक तंत्र का अध्ययन करने के लिए विकसित की है। 1,3-5 हालांकि, इन माउस मॉडल की सबसे आनुवंशिक ट्यूमर मॉडल हैं कि, जबकि यंत्रवत के लिए उत्कृष्ट मॉडल अध्ययन, चिकित्सीय एजेंट का परीक्षण, के बाद से मेटास्टेसिस महीने लग जाते हैं इन आनुवंशिक मॉडल में विकसित करने के लिए जिससे विरोधी कैंसर एजेंटों के महंगा लंबे समय तक प्रशासन की आवश्यकता के लिए उपयुक्त नहीं हैं। लाइव चूहों में 6.7 निगरानी ट्यूमर प्रगति भी तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है। इसके विपरीत, एक प्रत्यारोपित स्तन कैंसर मेटास्टेसिस मॉडल अल्पावधि ट्यूमर प्रगति और जीने चूहों में ट्यूमर प्रगति के आसान पर नज़र रखने के फायदे हैं। 4T1 ओर्थोटोपिक स्तन कैंसर सहज मेटास्टेसिस माउस मॉडल इस तरह के एक प्रत्यारोपित ट्यूमर मॉडल। 8 इस मॉडल में है, स्तन ट्यूमर कोशिकाओं प्राथमिक ट्यूमर पिंड की स्थापना के लिए स्तन वसा पैड में प्रत्यारोपित किया जाता है। प्राथमिक ट्यूमरतब शल्य चिकित्सा द्वारा मानव स्तन कैंसर के रोगियों के रूप में हटाया जा सकता है। 4T1 ट्यूमर कोशिकाओं को अत्यधिक आक्रामक हैं। 8,9, 3,10 लगभग सभी ट्यूमर असर चूहों स्तन वसा पैड में ट्यूमर प्रत्यारोपण के बाद 30 दिनों में मेटास्टेसिस का विकास। हालांकि, 4T1 ट्यूमर प्राथमिक साइटों में आक्रामक तरीके से आगे बढ़ने और ट्यूमर के आकार अक्सर सीमा यह है कि ज्यादातर पशु प्रोटोकॉल में अनुमति दी जाती है से अधिक है। इस स्तर पर, मेटास्टेसिस अक्सर micrometastases हैं। इसलिए, यह चिकित्सीय एजेंट के परीक्षण के लिए मेटास्टेसिस प्रगति अनुमति देने के लिए प्राथमिक ट्यूमर को दूर करने के लिए आवश्यक है। यहाँ, हम प्राथमिक ट्यूमर प्रत्यारोपण, प्राथमिक ट्यूमर और 4T1 ट्यूमर के विकास और इन विवो में प्रगति की bioluminescence इमेजिंग आधारित मात्रा का ठहराव के सर्जिकल हटाने के लिए एक सरल और अभी तक संवेदनशील प्रक्रिया की स्थापना की रिपोर्ट।
Protocol
Representative Results
Discussion
स्तन कैंसर मेटास्टेसिस के ट्रांसजेनिक माउस मॉडल से कई प्रकार विकसित किया गया है। 1 ये ट्रांसजेनिक चूहों उच्च ट्यूमर 60 से 100% से लेकर घटना है। (- 100% 14) हालांकि, इन ट्रांसजेनिक चूहों के मेटास्टेसिस घटना ट?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from the National Institute of Health grants CA133085, CA182518 and CA185909 (to KL) and VA Merit Review Award BX001962 (to KL).
Materials
| Ami-X Imaging System | Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ | ||
| IsoTec SurgiVet | Anesthesia Service & Equipment , Inc., Atlanta, GA | ||
| AutoClip Physicians Kit | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427638 | |
| 9 MM AutoClip Applier | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427630 | |
| 9 MM AutoClip Remover | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427637 | |
| 9 MM AutoClip Wound Clip | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427631 | |
| Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Fisher | 8940 | |
| Dissecting Fine-Pointed Forceps | Fisher | 8875 | |
| 1/2 CC 27G1/2 tuberculin syringe | Becton Dickinson and Co. NJ | 305620 | |
| RPMI 1640 medium | Mediatech Inc | 10-040-CV | |
| PBS | Mediatech Inc | 21-040-CV | |
| 70% Ethanol | Ultrapure-usa.com | ||
| Trypsin-EDTA | Mediatech Inc | 25-040-CI |
References
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