Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli
Summary
Ortotopik meme kanseri primer tümör modeli ve primer tümörün cerrahi olarak çıkarılması açıklanan spontan metastaz oluşturmak için fare ömrünü uzatmak için. tümör büyümesi ve ilerlemesi izlenir ve lusiferaz floresan görüntüleme ile ölçülür.
Abstract
Metastatik meme kanseri hastalarının ölüm birincil nedenidir. Meme kanseri metastazı dahil kanser hücre metastazı, altta yatan mekanizma, büyük ölçüde bilinmemektedir ve kanser araştırmalarında bir odak noktasıdır. Çeşitli meme kanseri spontan metastaz fare modelleri kurulmuştur. Burada, ortotopik nakledilen meme kanseri primer tümörün kurmak ve insan meme kanseri metastazı taklit spontan metastaz ve sonuç için basitleştirilmiş bir prosedür rapor. biyolüminesans canlı tümör görüntüleme ile birlikte bu fare modeli tümör büyümesi ve ilerlemesi kinetikleri izlenmesi ve sayısal sağlar. Bu modelde, 4T1-Luc göğüs kanseri hücrelerinin bir düşük doz (1 x 10 4 hücre), bir tüberkülin şırıngası kullanılarak Balb / C fare meme yağ tabanına enjekte edilmiştir. Fareler lusiferin ile enjekte edilmiş ve bir biyolojik olarak ışık veren görüntüleme sistemi kullanılarak, çeşitli zaman noktalarında görüntülenmiştir. primer tümörler yakl (IACUC onaylı protokol gibi boyutu sınırı büyüdüğündeoximately 30 gün), farenin% 2 izofluran ve oksijen sürekli bir akışı altında anestezi uygulanmıştır. tümör alanı% 70 etanol ile sterilize edildi. Tümörün etrafında fare deri steril bir makasla ile çıkarıldı tümörü açığa çıkarıldı. Primer tümör uzaklaştırılması bir ay 4T-1, tümör taşıyan farelerin hayatta kalma uzanır. fareler daha sonra tekrar tekrar uzak organlara yayılma metastatik tümör için görüntülendi. Terapötik ajanlar, bu noktada, tümör metastazı bastırmak için uygulanabilir. Bu model, primer bölgesi uzaktaki organlara ilerlemesi kinetiği meme kanseri hücre büyümesini miktarının basit ve henüz duyarlıdır ve bu nedenle, in vivo olarak anti-metastaz terapötik ve immünoterapötik maddeler test etmek için, meme kanserinin oluşumu ve ilerlemesinin incelenmesi için mükemmel bir modeldir .
Introduction
Amerikan Kanser Derneği'ne göre, meme kanseri ABD'de kadınlarda kanser en sık tanı şeklidir. Son zamanlarda geliştirilen hedefe yönelik tedavilerin birlikte erken teşhis önemli ölçüde son yirmi yılda meme kanseri ölümlerini azalttı. Bununla birlikte, meme kanseri hala Amerika Birleşik Devletleri'nde 1 kadınlarda kansere bağlı ölümlerin ikinci önde gelen nedenidir. meme kanseri hastalarının ölümlerin büyük çoğunluğu tümör hücresi metastazı kaynaklanmaktadır. Ne yazık ki, çoğu meme kanseri invaziv ve sık sık kemik, akciğer, karaciğer ve beyin de dahil olmak üzere uzak organlara, sonradan lenf nodu metastaz ve. 1,2 anda metastatik meme kanseri için etkili bir tedavi yoktur. Bu nedenle, kemoterapötik ve immünoterapötik maddelerin geliştirilmesi metastatik meme kanseri büyük önem taşımaktadır bastırmak için.
Çeşitli meme kanseri spontan metastaz fare modelleri b vareen meme tümör hücresi ilerlemesini ve metastazını ve terapötik maddelerin geliştirilmesi için model olarak kullanılmak üzere altında yatan moleküler mekanizmaları incelemek için geliştirilmiştir. 1,3-5 Bununla birlikte, bu fare modellerinin en genetik tümör modelleri olduğu iken mekanik mükemmel modeller çalışmaları, metastaz bu genetik modeller geliştirmek için ay sürer çünkü bu şekilde anti-kanser ajanlar pahalı uzun vadeli olarak uygulanmasını gerektiren, terapötik maddeler test edilmesi için uygun değildir. canlı farelerde 6,7 izlenmesi tümör ilerlemesi aynı zamanda teknik olarak zordur. Buna karşılık, bir nakledilen meme kanseri metastaz modeli, kısa süreli, tümör ilerlemesi ve canlı farelerde tümör ilerlemesi kolayca izlemenin avantajı vardır. 4T1 ortotopik meme kanseri spontan metastaz fare modeli böyle bir nakledilen tümör modeli. 8 Bu modelde ise, göğüs tümör hücreleri primer tümör nodülleri kurmak için meme yağ yastığı nakledilmektedir. primer tümörDaha sonra cerrahi insan göğüs kanseri hastalarında olduğu gibi uzaklaştırılabilir. 4T1 tümör hücreleri son derece invaziv. 8,9, 3,10 Hemen hemen tüm tümör taşıyan fareler meme yağ pedine tümör nakli sonrası 30 gün içinde metastaz gelişir. Ancak, 4T1 tümörler birincil sitelerde agresif büyüyecek ve tümör boyutları genellikle en hayvan protokolleri izin verilen sınırları aşan. Bu aşamada, metastazlar genellikle mikrometastazlar vardır. Nedenle, terapötik maddeler test etmek için metastaz gelişimini sağlamak için birincil tümörlerin kaldırmak için gereklidir. Burada, primer tümör nakli, primer tümörün ve in vivo 4T1 tümör büyümesi ve ilerlemesi biyoparlaklık görüntüleme bazlı ölçümü cerrahi olarak çıkarılması basit ve henüz hassas prosedür olduğu rapor edilmektedir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Göğüs kanseri metastazı transgenik fare modellerinde bir çok tipi geliştirilmiştir. 1. Bu transgenik fareler, 60 ile% 100 arasında değişen yüksek bir tümör insidansı vardır. (-% 100 14) Bununla birlikte, bu transgenik farelerin metastazı sıklığı, tümör insidansı çok daha düşüktür. Tümör hücreleri, meme kanseri metastazı bu transgenik fare modellerinin çoğunda LN ve akciğerlere metastaz. Metastaz gecikme modelden modele değişir ve 2 ila 8 ay arasında değişmektedir. Meme …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from the National Institute of Health grants CA133085, CA182518 and CA185909 (to KL) and VA Merit Review Award BX001962 (to KL).
Materials
| Ami-X Imaging System | Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ | ||
| IsoTec SurgiVet | Anesthesia Service & Equipment , Inc., Atlanta, GA | ||
| AutoClip Physicians Kit | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427638 | |
| 9 MM AutoClip Applier | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427630 | |
| 9 MM AutoClip Remover | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427637 | |
| 9 MM AutoClip Wound Clip | Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD | 427631 | |
| Sharp-Pointed Dissecting Scissors | Fisher | 8940 | |
| Dissecting Fine-Pointed Forceps | Fisher | 8875 | |
| 1/2 CC 27G1/2 tuberculin syringe | Becton Dickinson and Co. NJ | 305620 | |
| RPMI 1640 medium | Mediatech Inc | 10-040-CV | |
| PBS | Mediatech Inc | 21-040-CV | |
| 70% Ethanol | Ultrapure-usa.com | ||
| Trypsin-EDTA | Mediatech Inc | 25-040-CI |
References
- Fantozzi, A., Christofori, G. Mouse models of breast cancer metastasis. Breast Cancer Res. 8, 212 (2006).
- Weigelt, B., Peterse, J. L., van ‘t Veer, L. J. Breast cancer metastasis: markers and models. Nat Rev Cancer. 5, 591-602 (2005).
- Kocaturk, B., Versteeg, H. H. Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth. J Vis Exp. , (2015).
- Stewart, T. J., Abrams, S. I. How tumours escape mass destruction. Oncogene. 27, 5894-5903 (2008).
- Lopez, J. I., et al. CD44 attenuates metastatic invasion during breast cancer progression. Cancer Res. 65, 6755-6763 (2005).
- Khanna, C., Hunter, K. Modeling metastasis in vivo. Carcinogenesis. 26, 513-523 (2005).
- Cuevas, B. D., Winter-Vann, A. M., Johnson, N. L., Johnson, G. L. MEKK1 controls matrix degradation and tumor cell dissemination during metastasis of polyoma middle-T driven mammary cancer. Oncogene. 25, 4998-5010 (2006).
- Danna, E. A., et al. Surgical removal of primary tumor reverses tumor-induced immunosuppression despite the presence of metastatic disease. Cancer Res. 64, 2205-2211 (2004).
- Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer. BMC Cancer. 8, 228 (2008).
- Hu, X., et al. Deregulation of apoptotic factors Bcl-xL and Bax confers apoptotic resistance to myeloid-derived suppressor cells and contributes to their persistence in cancer. J Biol Chem. 288, 19103-19115 (2013).
- Kwan, H., et al. Transgenes expressing the Wnt-1 and int-2 proto-oncogenes cooperate during mammary carcinogenesis in doubly transgenic mice. Mol Cell Biol. 12, 147-154 (1992).
- Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease. Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).
- Almholt, K., et al. Reduced metastasis of transgenic mammary cancer in urokinase-deficient mice. Int J Cancer. 113, 525-532 (2005).
- Gallego, M. I., Bierie, B., Hennighausen, L. Targeted expression of HGF/SF in mouse mammary epithelium leads to metastatic adenosquamous carcinomas through the activation of multiple signal transduction pathways. Oncogene. 22, 8498-8508 (2003).
- Lin, S. C., et al. Somatic mutation of p53 leads to estrogen receptor alpha-positive and -negative mouse mammary tumors with high frequency of metastasis. Cancer Res. 64, 3525-3532 (2004).
- Ridgeway, A. G., McMenamin, J., Leder, P. P53 levels determine outcome during beta-catenin tumor initiation and metastasis in the mammary gland and male germ cells. Oncogene. 25, 3518-3527 (2006).
- Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model. J Vis Exp. , (2010).
