This protocol describes simultaneous measurement of electroretinogram and visual evoked potentials in anesthetized rats.
The electroretinogram (ERG) and visual evoked potential (VEP) are commonly used to assess the integrity of the visual pathway. The ERG measures the electrical responses of the retina to light stimulation, while the VEP measures the corresponding functional integrity of the visual pathways from the retina to the primary visual cortex following the same light event. The ERG waveform can be broken down into components that reflect responses from different retinal neuronal and glial cell classes. The early components of the VEP waveform represent the integrity of the optic nerve and higher cortical centers. These recordings can be conducted in isolation or together, depending on the application. The methodology described in this paper allows simultaneous assessment of retinal and cortical visual evoked electrophysiology from both eyes and both hemispheres. This is a useful way to more comprehensively assess retinal function and the upstream effects that changes in retinal function can have on visual evoked cortical function.
Mätning av elektroretinogram (ERG) och visuellt framkallat potential (VEP) ger användbara kvantitativa bedömningar av integriteten av den visuella vägen. ERG mäter de elektriska svaren hos näthinnan för ljus stimulering, medan VEP mäter den motsvarande funktionella integriteten hos de visuella vägar från näthinnan till den primära syncentrum följa samma ljushändelse. Detta manuskript beskriver ett protokoll för registrering och analys av ERG och VEP svar på en vanligt förekommande laboratoriemodell, råttan.
ERG ger ett index på den funktionella integriteten hos ett antal nyckel retinala cellklasser genom att kvantifiera näthinnan brutto elektriska svar på en ljusblixt. En samordnad serie av joniska flöden initieras av ljus tillslag och hävning, producerar detekterbara förändringar i spänning som kan mätas med hjälp av ytelektroder placerade utanför ögat. Den resulterande vågformen representerar kombinationen av en serier av väldefinierade komponenter, som skiljer sig i amplitud, timing och frekvens. En avsevärd mängd forskning har visat att dessa komponenter är relativt väl bevarade över många ryggradsdjur retinae och att komponenterna kan separeras från varandra. Genom att omdömesgillt välja stimulus (flash stimulans, bakgrund, interstimulus intervall) villkor och välja särdragen i den sammansatta vågformen för att analysera en kan vara säker på att återvända ett mått på en specifik grupp av retinala celler 1,2. Dessa egenskaper ligger bakom verktyget och därmed den utbredda tillämpningar av ERG som en icke-invasiv mätning av näthinnan funktion. Detta manuskript fokuserar på metoder för att mäta ERG och analysera dess funktioner för att returnera information om några av de stora cellklasser i näthinnan, nämligen fotoreceptorer (PIII komponent), bipolära celler (PII komponent) och retinala ganglionceller (den positiva scotopic tröskel svar eller PSTR).
<p class= "Jove_content"> Den VEP tillhandahåller en analys av det kortikala svar på ljus; första härrör från näthinnan och därefter kommuniceras seriellt via synnerven, optisk kanalen, talamus (laterala knäkroppen, LGN) och optisk strålning till området V1 av hjärnbarken 3. Hos gnagare majoriteten (90-95%) av optiska nervfibrer från varje öga decussate 4 och innerverar den kontralaterala mitten av hjärnan. Till skillnad från ERG, är det ännu inte möjligt att tillskriva olika komponenter i VEP till specifika cellklasser, 5 ändrar således någonstans längs den visuella vägen kan påverka VEP-vågformen. Icke desto mindre är VEP ett användbart icke-invasiv mätning av visuell prestanda och visuell väg integritet. VEP, när den används tillsammans med ERG, kan ge en mer fullständig bedömning av det visuella systemet (dvs näthinnan / visuella vägen).ERG och VEP inspelningar kan utföras enskilt eller i kombination, beroende på tillämpkatjon. Den metod som beskrivs i detta dokument tillåter samtidig bedömning av retinal och kortikal visuellt framkallat elektro från båda ögonen och båda halvkloten i sövda råttor. Detta är ett bra sätt att mer omfattande bedömning retinal funktion och uppströms effekter som förändringar i näthinnans funktion kan ha på visuellt framkallat kortikala funktion.
ERG och VEP är objektiva mått på synfunktionen från näthinnan och cortex, respektive. Fördelen med samtidig inspelning är att en mer heltäckande bild av hela visuella vägen ges. Specifikt kan den kompletterande information från sin samtidig bedömning ge en tydligare avgränsning av skadestället i den visuella vägen (t.ex. för störningar med överlappande ERG ännu distinkt VEP manifestationer 18, när optisk neuropati kan samexistera med primär cerebral atrofi 19, 20, eller…
The authors have nothing to disclose.
Funding for this project was provided by the National Health and Medical Research Council (NHMRC) 1046203 (BVB, AJV) and Melbourne Neuroscience Institute Fellowship (CTN).
Alligator clip | generic brand | HM3022 | Stainless steel 26 mm clip for connecting VEP screw electrodes to cables |
Bioamplifier | ADInstruments | ML 135 | For amplifying ERG and VEP signals |
Carboxymethylcellulose sodium 1.0% | Allergan | CAS 0009000-11-7 | Viscous fluid for improving signal quality of the active ERG electrode |
Carprofen 0.5% | Pfizer Animal Health Group | CAS 53716-49-7 | Proprietary name: Rimadyl injectable (50 mg/mL). For post-surgery analgesia, diluted to 0.5% (5 mg/mL) in normal saline |
Chlorhexadine 0.5% | Orion Laboratories | 27411, 80085 | For disinfecting surgical instruments |
Circulating water bath | Lauda-Königshoffen | MGW Lauda | For maintaining body temperature of the anesthetized animal during surgery and electrophysiological recordings |
Dental amalgam | DeguDent GmbH | 64020024 | For encasing the electrode-skull assembly to make it more robust |
Dental burr | Storz Instruments, Bausch and Lomb | #E0824A | A miniature drill head of ~0.7mm diameter for making a small hole in the skull over each hemisphere to implant VEP screws |
Drill | Bosch | Dremel 300 series | An automatic drill for trepanning |
Electrode lead | Grass Telefactor | F-E2-30 | Platinum cables for connecting silver wire electrodes to the amplifier |
Faraday Cage | custom-made | Ensures light proof to maintain dark adaptation. Encloses the Ganzfeld setup to improve signal to noise ratio | |
Gauze swabs | Multigate Medical Products Pty Ltd | 57-100B | For drying the surgical incision and exposed skull surface during surgery |
Ganzfeld integrating sphere | Photometric Solutions International | Custom designed light stimulator: 36 mm diameter, 13 cm aperture size | |
Velcro | VELCRO Australia Pty Ltd | VELCRO Brand Reusable Wrap | Hook-and-loop fastener to secure the electrodes and the animal on the recording platform |
Isoflurane 99.9% | Abbott Australasia Pty Ltd | CAS 26675-46-7 | Proprietary Name: Isoflo(TM) Inhalation anaaesthetic. Pharmaceutical-grade inhalation anesthetic mixed with oxygen gas for VEP electrode implant surgery |
Ketamine | Troy Laboratories | Ilium Ketamil | Proprietary name: Ketamil Injection, Brand: Ilium. Pharmaceutical-grade anesthetic for electrophysiological recording |
Luxeon LEDs | Phillips Lighting Co. | For light stimulation twenty 5 watt and one 1 watt LEDs. | |
Micromanipulator | Harvard Apparatus | BS4 50-2625 | Holds the ERG active electrode during recordings |
Needle electrode | Grass Telefactor | F-E2-30 | Subcutaneously inserted in the tail to serve as the ground electrode for both the ERG and VEP |
Phenylephrine 2.5% minims | Bausch and Lomb | CAS 61-76-7 | Instilled with Tropicamide to achieve maximal dilation for ERG recording |
Povidone iodine 10% | Sanofi-Aventis | CAS 25655-41-8 | Proprietory name: Betadine, Antiseptic to prepare the shaved skin for surgery 10%, 500 mL |
Powerlab data acquisition system | ADInstruments | ML 785 | Controls the LEDs |
Proxymetacaine 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 5875-06-9 | For corneal anaesthesia during ERG recordings |
Saline solution | Gelflex | Non-injectable, for electroplating silver wire electrodes | |
Scope Software | ADInstruments | version 3.7.6 | Simultaneously triggers the stimulus via the Powerlab system and collects data |
Silver (fine round wire) | A&E metal | 0.3 mm | Used to make active and inactive ERG electrodes, and the inactive VEP electrode |
Stainless streel screws | MicroFasterners | 0.7 mm shaft diameter, 3 mm in length to be implanted over the primary visual cortex and serve as the active VEP electrodes | |
Stereotaxic frame | David Kopf | Model 900 | A small animal stereotaxic instrument for locating the primary visual cortices according to Paxinos & Watson's 2007 rat brain atlas coordinates |
Surgical blade | Swann-Morton Ltd. | 0206 | For incising the area of skin overlaying the primary visual cortex to implant the VEP electrodes |
Suture | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | 3-0 silk braided suture non-absorbable, for skin retraction during VEP electrode implantation surgery | |
Tobramycine eye ointment 0.3% | Alcon Laboratories | CAS 32986-56-4 | Proprietary name: Tobrex. Prophylactic antibiotic ointment applied around the skin wound after surgery |
Tropicamide 0.5% | Alcon Laboratories | CAS 1508-75-4 | Proprietary name: 0.5% Mydriacyl eye drop, Instilled to achieve mydriasis for ERG recording |
Xylazine | Troy Laboratories | Ilium Xylazil-100 | Pharmaceutical-grade anesthetic for electrophysiological recording |
Pipette tip | Eppendorf Pty Ltd | 0030 073.169 | Eppendorf epTIPS 100 – 5000 mL, for custom-made electrodes |
Microsoft Office Excel | Microsoft | version 2010 | spreadsheet software for data analysis |
Lethabarb Euthanazia Injection | Virbac (Australia) Pty Ltd | LETHA450 | 325 mg/mL pentobarbital sodium for rapid euthanazia |