अंत: स्रावी में खलल न डालें यौगिकों (ईडीसी) जलीय पर्यावरण के लिए एक बड़ा जोखिम मुद्रा। नगरपालिका अपशिष्ट जल उपचार संयंत्रों सतह के पानी के estrogenic शक्ति के लिए प्रमुख योगदान कर रहे हैं। इस पत्र में प्रदान की कार्यप्रणाली ईडीसी हटाने के संबंध में प्रभावकारिता और अपशिष्ट जल उपचार प्रक्रियाओं की उपयुक्तता के एक आकलन के लिए अनुमति देता है।
Endocrine Disrupting Compounds pose a substantial risk to the aquatic environment. Ethinylestradiol (EE2) and estrone (E1) have recently been included in a watch list of environmental pollutants under the European Water Framework Directive. Municipal wastewater treatment plants are major contributors to the estrogenic potency of surface waters. Much of the estrogenic potency of wastewater treatment plant (WWTP) effluents can be attributed to the discharge of steroid estrogens including estradiol (E2), EE2 and E1 due to incomplete removal of these substances at the treatment plant. An evaluation of the efficacy of wastewater treatment processes requires the quantitative determination of individual substances most often undertaken using chemical analysis methods. Most frequently used methods include Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GCMS/MS) or Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LCMS/MS) using multiple reaction monitoring (MRM). Although very useful for regulatory purposes, targeted chemical analysis can only provide data on the compounds (and specific metabolites) monitored. Ecotoxicology methods additionally ensure that any by-products produced or unknown estrogenic compounds present are also assessed via measurement of their biological activity. A number of in vitro bioassays including the Yeast Estrogen Screen (YES) are available to measure the estrogenic activity of wastewater samples. Chemical analysis in conjunction with in vivo and in vitro bioassays provides a useful toolbox for assessment of the efficacy and suitability of wastewater treatment processes with respect to estrogenic endocrine disrupting compounds. This paper utilizes a battery of chemical and ecotoxicology tests to assess conventional, advanced and emerging wastewater treatment processes in laboratory and field studies.
वन्य जीवों के प्रजनन स्वास्थ्य पर अंत: स्रावी बाधा पहुँचा यौगिकों के प्रतिकूल प्रभाव के बारे में चिंताओं को यूरोपीय संघ के एक "घड़ी सूची" जल फ्रेमवर्क निर्देशक (WFD) के तहत दो estrogenic पदार्थ (एस्ट्राडियोल और ethinylestradiol) जगह के लिए प्रेरित किया। ईडीसी प्राकृतिक और सिंथेटिक स्टेरॉयड एस्ट्रोजेन, दवाओं, कीटनाशकों, और औद्योगिक रसायनों और वन्य जीवन पर ज्ञात प्रतिकूल प्रभाव के साथ उपभोक्ता उत्पादों के घटक सहित रासायनिक वर्गों की एक किस्म धरना। इन यौगिकों के कुछ संभावित मानव स्वास्थ्य को प्रभावित कर सकता 1।
अनुसंधान दिखाया है कि WWTP से अपशिष्ट मछली के लिए 2 estrogenic कर रहे हैं और एक परिणाम के रूप में कई पानी प्राप्त भी मछली से 3 estrogenic हैं। यह पहला यूनाइटेड किंगडम में राष्ट्रीय सर्वेक्षणों के माध्यम से प्रदर्शित किया गया है कि (एक महिला विशिष्ट जर्दी प्रोटीन अग्रदूत 4) से पता चला वृद्धि हुई vitellogenin सांद्रता जंगली नर मछली का खून और एक उच्च पूर्व मेंसंयोजक इंटरसेक्स की सामान्य रूप से gonochoristic मछली प्रजातियों 5,6 में (पुरुष मछलियों की वृषण में अंडे और / या महिला प्रजनन नलिकाओं के विकास)।
पारंपरिक मलजल उपचार आम तौर पर एक तीन चरण में प्राथमिक और माध्यमिक उपचार है जो दोनों को भंग कर दिया और कार्बनिक पदार्थ निलंबित हटा द्वारा पीछा किया एक प्रारंभिक जांच से मिलकर प्रक्रिया है। व्यक्तिगत ईडीसी के हटाने की प्रभावकारिता पदार्थों के भौतिक गुणों पर और उपचार प्रक्रिया लागू की प्रभावशीलता पर निर्भर है। सोखना और जैविक गिरावट के माध्यम से कई ईडीसी हटाने के लिए महत्वपूर्ण है, लेकिन अधूरी हो सकता है। तृतीयक उपचार, जैसे रेत छानने के रूप में, ईडीसी हटाने 7 बढ़ती उन्नत उपचार जबकि उन्नत ऑक्सीकरण (उदाहरण के लिए ओजोन) का उपयोग करने में प्रभावी हो सकता है या सक्रिय कार्बन पूरी तरह हटाने 7 के पास प्राप्त करने में प्रभावी हो सकता है।
अपशिष्ट उपचार nee के लिए किसी भी नई तकनीक के आकलनडी एस ईडीसी हटाने में प्रस्तावित प्रक्रिया की प्रभावकारिता निर्धारित करने के लिए। ईकोटोकसीकोलौजी परीक्षण के साथ लक्षित रासायनिक विश्लेषण, vivo में इन विट्रो bioassays में उपयोग सहित परीक्षण, के एक बैटरी, इस उद्देश्य के लिए व्यापक डेटा प्रदान करता है। नियामक उद्देश्यों के लिए बहुत उपयोगी है, लक्षित रासायनिक विश्लेषण ही यौगिकों (और विशिष्ट चयापचयों) पर नजर रखी पर डेटा प्रदान कर सकते हैं। Bioassays इसके अतिरिक्त उत्पादों के द्वारा चयापचयों और उपचार उत्पन्न अपशिष्ट परिवर्तन के प्रतिकूल प्रभाव है कि अन्यथा 8,9 नहीं चल पाता होगा की "का पता लगाने" अनुमति देते हैं। इस पत्र रासायनिक और ecotoxicity प्रयोगशाला परीक्षणों की एक बैटरी के उपयोग के कच्चे तेल के estrogenic शक्ति और इलाज सीवेज को हटाने और पानी प्राप्त करने में उन्नत और उभरते अपशिष्ट जल उपचार प्रक्रियाओं के एक नंबर की प्रभावकारिता का आकलन करने का वर्णन है।
अपशिष्ट जल उपचार संयंत्र ईडीसी के साथ सतही जल प्रदूषण का प्रमुख मार्ग हैं। , पारंपरिक उन्नत या उभरते उपचार प्रक्रियाओं का अंत: स्रावी गतिविधि के हटाने की प्रभावकारिता का मूल्यांकन रासायनिक और जैविक assays की एक किस्म का उपयोग की आवश्यकता है। गैर लक्षित और लक्षित विश्लेषण का उपयोग रासायनिक विश्लेषण व्यक्तिगत घटकों के हटाने की प्रभावकारिता पर गुणात्मक या मात्रात्मक डेटा प्रदान करता है और इसलिए अनुमति देता है एक आकलन के पर्यावरण की गुणवत्ता मानकों के खिलाफ किए गए या यौगिकों या यौगिकों के मिश्रण का विश्लेषण के लिए कोई प्रभाव नहीं सांद्रता भविष्यवाणी की जा सके।
उपचार और अपशिष्ट जल में अज्ञात जैविक रूप से सक्रिय घटकों की उपस्थिति निम्नलिखित पदार्थों की अधूरी खनिज से उत्पन्न परिवर्तन उत्पादों की पीढ़ी अकेले रासायनिक परीक्षण की उपयोगिता को सीमित करता है। एक विश्लेषणात्मक रसायनज्ञ के साथ संयोजन में vivo में इन विट्रो bioassays में के संयोजनRY स्क्रीनिंग में उभर रहा अपशिष्ट जल उपचार प्रक्रियाओं से ईडीसी हटाने की प्रभावकारिता निर्धारित करने के लिए एक उपयोगी उपकरण बॉक्स प्रदान करता है। इन परीक्षणों, जब पारंपरिक जल की गुणवत्ता मानकों और अन्य विषाक्तता और सूक्ष्मजीवविज्ञानी अंत अंक के साथ आयोजित वर्तमान और उभरते अपशिष्ट उपचार प्रौद्योगिकियों के एक महत्वपूर्ण मूल्यांकन अनुमति देते हैं।
यह केवल इन विट्रो assays रसायन और अपशिष्ट जल के estrogenic शक्ति निर्धारित करने के लिए ध्यान दें कि खमीर आधारित एस्ट्रोजन स्क्रीन (जैसे, हाँ) महत्वपूर्ण है नहीं कर रहे हैं। स्थिरतापूर्वक ट्रांसफ़ेक्ट स्तनधारी सेल आधारित assays के एक नंबर भी उदाहरण के लिए, ईआर CALUX 27 और मानव स्तन कैंसर की कोशिकाओं या गर्भाशय ग्रीवा ट्यूमर कोशिकाओं के साथ hERα-हेला-9903 28 क्रमशः विकसित किया गया है। यस समान स्तनधारी सेल आधारित assays तुलना की गई है और reproducibility के एक तुलनीय उच्च स्तर पाया गया है, सच सकारात्मक और नकारात्मक सच estrogenic पहचान दरों 29, हालांकिऊ यह कभी कभी थोड़ा कम संवेदनशील 27 माना जाता है। खमीर आधारित संवाददाता assays के एक लाभ यह स्तनधारी सेल संस्कृति के साथ महत्वपूर्ण अनुभव के बिना प्रयोगशालाओं में हाँ अधिक आसानी से अपनाया जा सकता है कि, के रूप में यह कम कठोर जैव नियंत्रण के उपायों और बाँझ तकनीक की आवश्यकता है (हाँ बेंच शीर्ष यदि आवश्यक हो पर किया जा सकता है) । मानव कोशिका आधारित assays भी हाँ में इस्तेमाल मानक इनक्यूबेटर और microplate पाठकों की तुलना में सीओ 2 इन्क्यूबेटरों और luminometers की आवश्यकता होती है। दो खमीर आधारित एस्ट्रोजन संवाददाता assays (हाँ, Saccharomyces cerevisiae और एक-हाँ, Arxula adeninivorans) आईएसओ 19040 के सत्यापन के लिए वर्तमान दौर से गुजर रहे अंतर-प्रयोगशाला ट्रेल्स "पानी की गुणवत्ता – पानी और अपशिष्ट जल के estrogenic क्षमता का निर्धारण" उद्योगों पर प्रकाश डाला इन तकनीकों में रुचि।
वर्णित विधि की सीमाओं की एक संख्या है जो संभावित प्रदूषण को शामिल कर रहे हैंनमूने, नमूना भंडारण और क्षेत्र या प्रयोगशाला वातावरण से या मानव संदूषण (जैसे, plasticizers, surfactants, पर्सनल केयर उत्पादों) से होने वाले estrogenic पदार्थों के साथ विश्लेषण के दौरान नमूनों की। हाँ परख (या अन्य सेल आधारित संवाददाता assays) में संदूषण की इस प्रकार की पृष्ठभूमि तरक्की और परख के उपयोग के प्रभाव होगा। पानी के नमूने या सॉल्वैंट्स प्लास्टिक की बोतलों में संग्रहित आसानी से झूठी सकारात्मक हो सकता है। दोनों के रूप में एलसीएमएस / एमएस और यस परख विशेष आवश्यकता detectable स्तर को एस्ट्रोजेन ध्यान केंद्रित करने की झूठी नकारात्मक चिंता का विषय भी हैं। मैट्रिक्स, एसपीई sorbent और क्षालन विलायक के चुनाव निकासी दक्षता और eluted यौगिकों के प्रकार को प्रभावित कर सकते हैं। स्थिति इस प्रोटोकॉल में वर्णित का उपयोग कर एक नकारात्मक पूर्वाग्रह पैदा कर सकते हैं निकासी के लिए C18 एसपीई कारतूस का प्रयोग, के रूप में अत्यधिक ध्रुवीय और बुनियादी यौगिकों खराब sorbent द्वारा बनाए रखा जाएगा। इसके अलावा, इस प्रोटोकॉल methan से eluted यस eluent के पुनर्गठन की आवश्यकता हैराजभाषा वाष्पीकरण के माध्यम से इथेनॉल के लिए आर्थिक सहायता देने वाले अस्थिर यौगिकों के नुकसान में जिसके परिणामस्वरूप नाइट्रोजन सूखापन के लिए। एक परिणाम के रूप में प्रोटोकॉल का परीक्षण नमूनों की estrogenic गतिविधि को कम करके आंका प्रदान कर सकता है। इन सीमाओं को विशेष रूप से महत्वपूर्ण है जब विचार अज्ञात या अप्रत्याशित यौगिकों के रूप में हाँ परख, याद किया जा सकता है, क्योंकि वे निकाला नहीं किया गया है या वे वाष्पीकरण के कारण खो रहे हैं। इसके अलावा, एलसीएमएस / एमएस तकनीक लेबल आंतरिक मानकों वसूली के लिए सही करने के लिए का उपयोग करता है; इस दृष्टिकोण यस परख के साथ प्रयोग नहीं किया जा सकता है।
अपशिष्ट का विवो परीक्षण के महत्वपूर्ण सीमाओं उच्च लागत और समय में इन विट्रो तरीकों की तुलना में मूल्यांकन के लिए आवश्यक शामिल हैं। वर्तमान में मछली भ्रूण परीक्षण के उपयोग estrogenic गतिविधि का पता लगाने के लिए सीमित है। हालांकि, वहाँ एस्ट्रोजन उत्तरदायी मछली भ्रूण 30 है, जो भविष्य अनुप्रयोगों सकता है चमक ट्रांसजेनिक के उत्पादन के साथ कुछ सफलता मिली है। मूर्ख मनुष्य minnows (इस protoc में इस्तेमाल कियाराजभाषा) एक आम प्रयोगशाला प्रजातियों और पुरुष मछली में VTG प्रेरण estrogenic जोखिम के एक अच्छी तरह से प्रलेखित जैव मार्कर और अपशिष्ट जल प्रवाह estrogenicity 22 या अन्य estrogenic यौगिकों या मिश्रण 31 के एक मात्रात्मक उपाय है कर रहे हैं। अंत: स्रावी में खलल न डालें रसायनों के लिए ओईसीडी परीक्षण के दिशा-निर्देशों VTG सभी तीन प्रजातियों में एस्ट्रोजन जोखिम के एक संवेदनशील बायोमार्कर होने के साथ वयस्क मूर्ख मनुष्य छोटी मछली, जापानी medaka और zebrafish 32,33 का उपयोग कर पुष्टि की है। हालांकि, VTG प्रेरण सीधे प्रजनन हानि और इसलिए अपशिष्ट जल जोखिम की पारिस्थितिकी परिणाम भुगतने के लिए, के रूप में गंभीर रूप से इंटरसेक्स रोच 3 में देखा सहसंबंधी नहीं है। दूसरी ओर, एक प्रकार की मछली ईकोटोकसीकोलौजी अनुसंधान के लिए एक क्लासिक 'प्रयोगशाला' प्रजाति उनके बड़े आकार, लंबे समय पीढ़ी (2-3 वर्ष यौन परिपक्वता तक पहुँचने के लिए), प्रजनन शैली की वजह से नहीं कर रहे हैं; समूह स्पॉन (प्रजनन) एक वर्ष में एक बार होता है, और कठिनाई महिलाओं से पुरुषों (दौरान की तुलना में अन्य की पहचान करने के लिएspawning के मौसम)। बहरहाल, यह सामान्य रूप से gonochoristic प्रजातियों बहुत अच्छी तरह से ब्रिटेन में अध्ययन किया गया है, खोज की है कि estrogenic अपशिष्ट जल अपशिष्ट का नीचे की ओर, पुरुष मछली उनकी Endocrinology को perturbations का प्रदर्शन (जैसे, उनके रक्त में महिला-विशिष्ट vitellogenin की उपस्थिति) और ऊतकविकृतिविज्ञानी (ovotestes के कारण – वृषण और / या महिला प्रजनन नलिकाओं) 5,6 में अंडे का विकास। इसलिए, इन प्रोटोकॉल के भविष्य के आवेदन के रूप में, एक प्रकार की मछली (या इसी तरह की प्रजाति) एक उपयोगी जंगली प्रजातियों प्रहरी को दिखाने के लिए यदि अपशिष्ट जल गुणवत्ता (और कम estrogenicity) के लिए वास्तविक सुधार उन्नत इलाज किया अपशिष्ट प्राप्त नदियों में देखा जाता है हो सकता है। उन्होंने यह भी पायलट पैमाने पर पौधे 7 से तकनीकी रूप से उन्नत अपशिष्ट की निगरानी के लिए पाइप सिस्टम के अंत में नियोजित किया जा सकता है। जब जो प्रजाति विवो अपशिष्ट जल आकलन में में उपयोग करने पर विचार वहाँ अपेक्षाकृत जल्दी और नियंत्रित परीक्षण का उपयोग कर प्रयोगशाला प्रजातियों के बीच एक tradeoff की तुलनालंबे समय तक मैदान पर आधारित है, लेकिन पर्यावरण के अधिक प्रासंगिक, देशी प्रजातियों का उपयोग कर परीक्षण। हालांकि, विवो आकलन में इस तरह के उच्च लागत रहे हैं और केवल निम्नलिखित रासायनिक विश्लेषण का उपयोग कर के आकलन परीक्षण के अंतिम सेट के रूप में और इन विट्रो assays में विचार किया जाना चाहिए।
वर्णित प्रोटोकॉल के भीतर महत्वपूर्ण कदम तैयारी और नमूने और कांच के बने पदार्थ की हैंडलिंग में शामिल हैं (यानी, बोतलें और नमूने उपकरण उपयुक्त सतह सक्रिय सफाई एजेंट के साथ पहले से व्यवहार किया जाना चाहिए) प्लास्टिक और साथ नमूने के संपर्क सीमित सहित पर्यावरण contaminants से नमूने के संक्रमण से बचने के लिए अन्य सामग्री है कि झूठी सकारात्मक उत्पादन कर सकते हैं। यह भी उतना ही महत्वपूर्ण है जब डिजाइनिंग और एक्वेरियम और मछली जोखिम प्रणालियों का निर्माण होता है। आदर्श रूप में एक्वेरियम (आवास स्टॉक और जोखिम के दौरान) कम से कम जोखिम के साथ प्रदूषण को कम सोखना 32 के साथ सामग्री से बनाया जाना चाहिए। स्टेनलेस स्टील के प्रवाह या जल धारण टैंक के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।जबकि एक गिलास निर्माण के टैंक मछली टैंक के लिए पसंद कर रहे हैं (यह भी मछली की आसान अवलोकन प्रदान करता है के रूप में)। कम ग्रेड प्लास्टिक पाइप या ट्यूबिंग का प्रयोग नहीं होना चाहिए अगर 'ठीक से अनुभवी' 32, परमवीर चक्र 34 और ABS इस्तेमाल किया जा सकता है, यानी, उपयोग करने से पहले कम से कम 12 घंटे के लिए कमजोर पड़ने पानी चलाने में किसी भी दूषित पदार्थों को बाहर नमकीन पानी के लिए छोड़ दिया। चिकित्सा ग्रेड सिलिकॉन टयूबिंग टैंक के लिए रसायन और अपशिष्ट जल / कमजोर पड़ने पानी की क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप वितरण के लिए हमारी सुविधा में सफलतापूर्वक नियोजित किया गया है। के रूप में अच्छी तरह से निर्माण में estrogenic संदूषण पर विचार और तैराकी प्रणाली के चलाने के रूप में, यह भी मछली के आहार के बारे में सोचने के लिए महत्वपूर्ण है; कई औचित्य मछली खाद्य पदार्थ मछली के लिए estrogenic होना पाया गया है। इसलिए यह किसी भी खाद्य पदार्थ उन्हें अध्ययन के इन प्रकारों में उपयोग करने से पहले (, जैसे खमीर एस्ट्रोजेन स्क्रीन में, देखें Beresford एट अल। 14) गतिविधि के लिए परीक्षण करने के लिए महत्वपूर्ण है।
समस्या निवारणरासायनिक विश्लेषण या हाँ परख वर्णित एकाधिक यात्रा, प्रयोगशाला सहित यदि गुणवत्ता आश्वासन के नमूने और विलायक कारतूस सकारात्मक नियंत्रण और वास्तविक नमूने के साथ विश्लेषण कर रहे हैं झूठी सकारात्मक और नकारात्मक झूठी परिणाम को खत्म करने के लिए सरल है प्रोटोकॉल की। सकारात्मक (जैसे, EE2) और नकारात्मक (कमजोर पड़ने पानी केवल) नियंत्रण भी हमेशा इन विवो assays में इस्तेमाल किया जाना चाहिए उम्मीद जैविक बायोमार्कर या समापन बिंदु (यानी, VTG या ऊतकविकृतिविज्ञानी) की संवेदनशीलता की पुष्टि के लिए, और अनुमति किसी भी अप्रत्याशित संदूषण का पता लगाया जा सकता है ( जैसे, प्रयोगात्मक सेट अप, आहार, या कमजोर पड़ने के पानी) से। प्रोटोकॉल में किसी भी संशोधन के किसी भी अध्ययन का आयोजन करने से पहले मान्य किया जाना चाहिए।
WWTP अपशिष्ट के माध्यम से वातावरण में प्रवेश estrogenic यौगिकों की सख्त विनियमन के साथ यह है कि और अधिक प्रभावी अपशिष्ट उपचार प्रौद्योगिकियों को विकसित किए जाने की आवश्यकता होगी परिकल्पना है। इस पांडुलिपि में वर्णित परीक्षण की बैटरी को बधाईecotoxicological और रासायनिक मूल्यांकन परीक्षण सामान्य रूप से अपशिष्ट जल उपचार संयंत्र प्रवाह निर्वहन करने के लिए आवेदन किया। इसलिए, परीक्षण, अपशिष्ट जल प्रौद्योगिकी डेवलपर्स, और संयंत्र ऑपरेटरों को सक्षम होना चाहिए के समग्र बैटरी के इस प्रकार के भविष्य के आवेदन सबसे पारिस्थितिकी सुरक्षित दोनों विशिष्ट विनियमित estrogenic रसायनों और समग्र जैविक गतिविधि को दूर करने के लिए सर्वोत्तम तरीकों पर विचार डिजाइन को लागू।
The authors have nothing to disclose.
Projects presented in this paper were funded by Severn Trent Water and Brunel University London. The authors would like to thank Alan Henshaw and John Churchley for providing field and laboratory assistance. T.J.C. thanks the Heinz Endowments for support. M.R.M. thanks the Steinbrenner Institute for a Steinbrenner Doctoral Fellowship and Carnegie Mellon University for a Presidential Fellowship.
Wellwash Versa plate washer | Thermo Scientific | 5165010 | |
Plate reader | Molecular Devices | SpectraMax 340PC | |
Incubator | Memmert | INB 400 | 37oC incubation required for carp assay |
Fisherbrand whirlimixer | Fisher Scientific | 13214789 | |
Icemaker | Scotsman | AF80 | |
12-Channel F1 digital multichannel pipette | Thermo Scientific Finnpipette | 4661070 | |
ELISA kits | Biosense Laboratories | V01018401-096 (Fathead minnow) V01003402-096 (Carp) |
|
Microfuge tubes, 0.5ml | Alpha labs | LW2372 | |
Microfuge tubes, 1.5ml | Alpha labs | LW2375 | |
Sulphuric acid, 95-98% | Sigma-Aldrich | 258105 | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Histology | |||
Tissue processor | Leica Biosystems | TP1020 | |
Wax dispenser | Thermo Scientific Raymond Lamb | E66HC | |
Metal embedding mold | Leica Biosystems | Various | |
Hot plate | Thermo Scientific Shandon | 3120063 | |
Cold plate (EG1150 C) | Leica Biosystems | 14038838037 | |
Heated forceps (EG F) | Leica Biosystems | 14038835824 | |
Microtome | Leica Biosystems | RM2235 | |
Paraffin section floatation bath | Electrothermal | MH8517 | |
Slide drying bench | Electrothermal | MH6616 | |
Stainmate automated stainer | Thermo Scientific Shandon | E103/S10L | |
Cassettes, Histosette II, biopsy | Simport | M493 | |
Paraffin wax | Thermo Scientific Raymond Lamb | W1 | |
Histo-Clear II | National Diagnostics | HS-202 | |
IMS (ethanol mix), IDA99 | Tennants | ID440 | |
Polysine adhesion slides | Thermo Scientific Gerhard Menzel | J2800AMNZ | |
Cover slips, 22x50mm | VWR | 631-0137 | |
Histomount | National Diagnostics | HS-103 | |
Haematoxylin Harris GURR | VWR | 351945S | |
Eosin, 1%, aqueous | Pyramid Inovation | S20007-E | |
Fisherbrand slide boxes | Fisher Scientific | 11701486 | |
Microtome blades, MB35 | Thermo Scientific Shandon | 3050835 | |
Bouin’s solution | Sigma Aldrich | HT10132-1L | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Yeast screen | |||
Flow cabinet | Labcaire Systems Ltd | SC12R | |
Cooled incubator | LMS Cooled Incubator | 303 | |
Incubator | Memmert | INB 400 | |
Shaker | Grant | PSU-10i | |
Fisherbrand whirlimixer | Fisher Scientific | 13214789 | |
Plate shaker | Heidolph Titramax 100 | 544-11200-00 | |
12-Channel F1 digital multichannel pipette | Thermo Scientific Finnpipette | 4661070 | |
12-channel pipette, electronic | Sartorius | 735441 | |
96-well flat-bottom microplates | MP Biomedicals Thermo Scientific Nunc Sarstedt |
76-232-05 260860 82.1581.001 |
We have found that these multiwell plates all produce low backgrounds |
HPLC grade water | Rathburn | RH1020 | |
Absolute ethanol | Hayman Kimia | F200238 | |
Potassium phosphate monobasic anhydrous | Sigma-Aldrich | P-5655 | |
Ammonium sulphate | Sigma-Aldrich | A-2939 | |
Potassium hydroxide, pellets | Sigma-Aldrich | P-1767 | |
Magnesium sulfate, anhydrous | Sigma-Aldrich | M-2643 | |
Iron (III) sulfate | Sigma-Aldrich | 307718 | |
L-Leucine | Sigma-Aldrich | L-8912 | |
L-Histidine | Sigma-Aldrich | H-6034 | |
Adenine | Sigma-Aldrich | A-2786 | |
L-Argenine, hydrochloride | Sigma-Aldrich | A-6969 | |
L-Methionine | Sigma-Aldrich | M-5308 | |
L-Tyrosine | Sigma-Aldrich | T-8566 | |
L-Isoleucine | Sigma-Aldrich | I-7403 | |
L-Lysine, hydrochloride | Sigma-Aldrich | L-8662 | |
L-Phenylalanine | Sigma-Aldrich | P-5482 | |
L-Glutamic acid | Sigma-Aldrich | G-8415 | |
L-Valine | Sigma-Aldrich | V-0513 | |
L-Serine | Sigma-Aldrich | S-4311 | |
Thiamine, hydrochloride | Sigma-Aldrich | T-1270 | |
Pyridoxine | Sigma-Aldrich | P-5669 | |
D-Pantothenic acid, hemicalcium salt | Sigma-Aldrich | P-5155 | |
Inositol | Sigma-Aldrich | I-5125 | |
d-Biotin | Sigma-Aldrich | B-4639 | |
D-(+)-Glucose anhydrous; mixed anomers | Sigma-Aldrich | G-7021 | |
L-Aspartic acid | Sigma-Aldrich | A-4534 | |
L-Threonine | Sigma-Aldrich | T-8441 | |
Copper (II) sulfate, anhydrous | Sigma-Aldrich | C-1297 | |
Chlorophenolred-b-D galactopyranoside (CPRG) | Sigma-Aldrich | 10884308001 | |
Glycerol | Sigma-Aldrich | G-2025 | |
17 β-Estradiol | Sigma-Aldrich | E-8875 | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Steroids | |||
Acetone | Rathburn | ||
Acetonitrile | Rathburn | ||
Ammonia solution | Rathburn | ||
Ethylacetate | Rathburn | ||
Copper(II) nitrate. | Sigma-Aldrich | ||
Acetone | Rathburn | ||
Dichloromethane | Rathburn | ||
2, 4, 16, 16-d4-17b-estradiol | CDN Isotopes | ||
2, 4, 16, 16-d4-estrone | CDN Isotopes | ||
2, 4, 16, 16-d4-17a-ethynyl oestradiol. | CDN Isotopes | ||
17b-estradiol | Sigma-Aldrich | ||
Estrone | Sigma-Aldrich | ||
17a-ethynyl oestradiol. | Sigma-Aldrich | ||
Hexane | Rathburn | ||
Hydrochloric acid | Sigma-Aldrich | ||
Methanol | Sigma-Aldrich | ||
Sodium hydrogen carbonate | Sigma-Aldrich | ||
Sodium hydroxide | Sigma-Aldrich | ||
Styrene divinyl benzene cartridge (Isolute ENV+) solid phase extraction cartridge (200 mg/6 ml) | Biotage | ||
Isolute aminopropyl solid phase extraction cartridge (500 mg/6 ml) | Biotage | ||
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
Fish study | |||
orange-white silicon manifold tubing 0.63 bore pk 6 | watson marlow | 982.0063.000 | |
straight connectors for 0.5/0.8 bore pk 20 | watson marlow | 999.2008.000 | |
pumsil silicon tubing 0.8 bore 15m | watson marlow | 913.A008.016 | |
200 series multi-channel persitaltic pump | watson marlow | 205CA | |
Silicone tubing x15m (dosing tanks) | vwr | SFM1-3250 | |
silicone tubing x 15m (large for inflow/outflow) | vwr | SFM1-5450 | |
2.5L glass winchester pk 4 | Fisher Scienctific | BTF-505-050B | |
magnetic stir bar 51x8mm pk 10 | Fisher Scienctific | FB55595 | |
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate (MS222) | sigma aldrich | E10521-10G | |
17α-Ethynylestradiol | sigma aldrich | E4876-100MG | |
Absolute ethanol | Hayman Kimia | F200238 | |
Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
SPE | |||
1/8 inch PTFE tubes 'straws' colour coded pk4 | sigma aldrich | 57276 | |
disposable liners for manifold | sigma aldrich | 57059 | |
filtration tubes without frits 6ml pk 30 | sigma aldrich | 57242 | |
reservior adaptors pk 12 | sigma aldrich | 57020-U | |
stainless steel weight for manifold pk 4 | sigma aldrich | 57278 | |
male luer plug for manifold pk12 | sigma aldrich | 504351 | |
SPE Vacuum Manifold | sigma aldrich | 57265 | |
stop cocks for extraction mainfold (supelco) pk 12 | waters | WAT054806 | |
Sep-Pak Plus C18 cartridge box 50 | waters | WAT020515 | |
Methanol HPLC grade 2.5L | fisher scientific | M/4056/17 | |
7ml glass vials with lids (58x17mm) pk 399 | fisher scientific | TUL-520-031K | |
Absolute ethanol | Hayman Kimia | F200238 | |
vacuum pump e.g. VP Series Vacuum Pump | Camlab | 1136915 |