윌리스의 마우스 원을 분리하는 프로토콜
Summary
We describe here a reproducible protocol for isolating the mouse circle of Willis.
Abstract
윌리스 (COW)의 대뇌 동맥 원 (circulus 동맥 뇌종양) 또는 원은 뇌와 주변 구조에 혈액을 공급하는 광학 chiasma 및 시상 하부를 둘러싸는 순환 문합이다. 이는 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA) -associated vasculopathies, 두개 내 죽상 경화증 및 두개 뇌 동맥류 등 여러 질병에 관여하고있다. 자신의 예방을위한 새로운 약물 표적의 식별을 위해 이러한 질병의 기초가되는 분자 메커니즘의 연구는 동물 모델을 필요로한다. 다른 사람들이 여기에 설명 된 CoW.The 방법 임의의 마우스 계통의 소 분리에 적합하며 (유전자, 단백질 생산의 발현을 선별하기위한 상당한 잠재력을 가지고 포함하는 뇌 – 혈관의 분리를 포함하는 반면 이러한 모델 중 일부는, 형질 전환 될 수있다 번역 후 단백질 수정 등 secretome 분석) 마우스 cerebro-의 대형 선박에 대한 연구혈관. 또한 절연 마우스 후각 동맥 위해 개발 기관 욕 시스템을 적용하여, 생체 외 연구에 사용될 수있다.
Introduction
또한 윌리스 (소), Willisor 윌리스 다각형의 루프의 원형으로 알려진 대뇌 동맥 원 (circulus 동맥 뇌종양은)) 먼저 그것은 시신경 chiasma 수 있습니다 시상 하부의 주위에있는 순환 문합 인 1664 년 토마스 윌리스에 의해 설명되었다 뇌와 주변 구조에 혈액을 공급하는 중앙 허브로 간주 될 수있다. 혈액 경동맥 및 척추 동맥을 통해 이러한 구성에 진입하며 내부 중간 및 후방 뇌동맥 통해 원 밖으로 흐른다. 이러한 동맥의 각각은 원호의 양측에 지점을 좌우되었다. 완전한 원을 동맥을 통신하는 기저, 포스트 소통하고, 전방 (그림 1과 그림 2). 유출 동맥 중 어느 하나에 장애가 혈류 위험함으로써 충분한 혈액이 (B)에 공급되도록 보장 경동맥 및 뇌동맥으로부터 원 입력 피 병합하여 최소화비. 이 구조는 내부 경동맥 폐색 심각한 질병에 부수적 혈류의 주요 경로로서 기능한다.
뇌 혈관 질환의 여러 유형의 소에서 자신의 기원을 가지고있다. 가장 일반적으로는 1, 2, 3이 질환으로 인한 혈관 확장에 관류 저하로 이어질 수있다. 대뇌 아밀로이드 혈관 병증 (CAA) -associated vasculopathies, 두개 내 죽상 경화증 및 두개 내 동맥류하고, 뇌내 및 / 또는 지주막 하 출혈 궁극적 허혈성 또는 출혈성 뇌졸중 또는로 변환 기껏해야 일시적 허혈성 발작. 아마도 조영술 결합 뇌 영상을 포함한 진단 절차에서의 최근 발전은 뇌 생검 없이도 가능 임상 이러한 주요 뇌 혈관 질환을 진단 만들었다. 그럼에도 불구하고, 효과적이고 특이 치료 (약물 또는 혈관)이 현재 부족과 새로운 정의 필요하다분자 표적.
인간에서 이들 질환의 예방을위한 신규 약물 표적의 식별은 동물 모델 및 소를 포함하는 뇌 – 혈관을 분리하는 방법이 필요하다. 이러한 모델은 두개 내 동맥 동맥류, CAA 또는 두개 내 동맥 경화증의 동물 모델에서 큰 혈관의 벽에 발생하는 염증을 포함하는 특정 변경에의 증거와 단서를 제공해야한다. 4, 5, 6
우리는 CAA와 같은 알츠하이머 질환에서 혈관 염증의 연구 (AD) 및 관련 질병을 촉진하기 위해 마우스 암소 분리하는 방법을 설립했다. 마우스 암소를 분리하는이 방법은 질병 진행 동안 뇌 염증 유전자 발현의 평가를 위해 개발되었다. 함께 leptomeningeal 및 pial 동맥의 벽 내에서 아밀로이드 베타 침착의 검출과,이 방법은 쉽게 저지 할 만들 수내 염증성 뇌 – 혈관 벽에 유전자 발현 및 Aβ 펩타이드의 축적 사이의 가능한 관계. 지주막 하 공간에 leptomeningeal 및 pial을 포함하는 뇌의 혈관 네트워크는 윌리스의 원을 형성하는 큰 동맥의 확장입니다. 여기서 설명한 방법은 임의의 마우스 계통의 암소를 분리하는 데 사용될 수 있고, 마우스 뇌 – 혈관의 대형 선박의 스크리닝 (예를 들어, 유전자 발현, 단백질 생산 및 번역 후 단백질 변형)의 모든 유형에 이용 될 수있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
우리는 윌리스의 원의 분리 여기를 재현 프로토콜을 설명합니다. 소를 포함하는 가장 일반적인 뇌 혈관 질환은 동맥 혈관의 벽에 영향을 모두 CAA 관련 vasculopathies, 두개 내 동맥 경화 및 두개 내 동맥류이다. 위험 인자로 잘 알려져 있지만, 이들 뇌 질환의 분자 기전은 잘 알려져 있지 남아 그 발생을 예측하기위한 특정한 생물학적 마커는 부족하다. 분자 변화를 거시적 인 관찰을 연결하는 형질 전…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 파리 VI 대학과 피에르 파브르 혁신 기금에 의해 지원되었다.
Materials
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D8537 | |
| Dumont #55 Forceps | Fine Science Tools | 11295-51 | |
| Hardened Fine Iris Scissors | Fine Science Tools | 14090-11 | |
| Scissors – Straight / Sharp / Sharp 16.5 cm | Fine Science Tools | 14002-16 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| Stereoscopic Zoom Microscope | Nikon | SMZ745T | |
| CellBIND Surface 60mm Culture Dish | Corning | #3295 | |
| Peristaltic Pump – MINIPULS 3 | Gilson | M312 | |
| Pentobarbital Sodique | Ceva Santé Animale | FR/V/2770465 3/1992 |
References
- Beckmann, N., et al. Age-dependent cerebrovascular abnormalities and blood flow disturbances in APP23 mice modeling Alzheimer’s disease. J Neurosci. 23 (24), 8453-8459 (2003).
- Sadasivan, C., Fiorella, D. J., Woo, H. H., Lieber, B. B. Physical factors effecting cerebral aneurysm pathophysiology. Ann Biomed Eng. 41 (7), 1347-1365 (2013).
- Ritz, K., Denswil, N., Stam, O., van Lieshout, J., Daemen, M. Cause and mechanisms of intracranial atherosclerosis. Circulation. 130 (16), 1407-1414 (2014).
- Tulamo, R., Frösen, J., Hernesniemi, J., Niemelä, M. Inflammatory changes in the aneurysm wall: a review. J Neurointerv Surg. 2 (2), 120-130 (2009).
- Yamada, M. Cerebral amyloid angiopathy: emerging concepts. J Stroke. 17 (1), 17-30 (2015).
- Oy, B. Intracranial atherosclerotic stroke: specific focus on the metabolic syndrome and inflammation. Curr Atheroscler Rep. 8 (4), 330-336 (2006).
- Lee, H. J., Dietrich, H. H., Han, B. H., Zipfel, G. J. Development of an ex vivo model for the study of cerebrovascular function utilizing isolated mouse olfactory artery. J Korean Neurosurg Soc. 57 (1), 1-5 (2015).
- Hosaka, K., Downes, D. P., Nowicki, K. W., Hoh, B. L. Modified murine intracranial aneurysm model: aneurysm formation and rupture by elastase and hypertension. J Neurointerv Surg. 6 (6), 474-479 (2013).
- Gauthier, S. A., Sahoo, S., Jung, S. S., Levy, E. Murine cerebrovascular cells as a cell culture model for cerebral amyloid angiopathy: isolation of smooth muscle and endothelial cells from mouse brain. Methods Mol Biol. 849, 261-274 (2012).
- Choi, S., Kim, J., Kim, K., Suh, S. Isolation and in vitro culture of vascular endothelial cells from mice. Korean J Physiol Pharmacol. 19 (1), 35-42 (2015).
- Peters, D. G., Kassam, A. B., Yonas, H., O’Hare, E. H., Ferrell, R. E., Brufsky, A. M. Comprehensive transcript analysis in small quantitiesof mRNA by SAGE-Lite. Nucleic Acids Res. 27 (24), (1999).
- Badhwar, A. Stanimirovic, Hamel, & Haqqani The proteome of mouse cerebral arteries. J Cereb Blood Flow Metab. 34 (6), 1033-1046 (2014).
- Castro, L., Brito, M., et al. Striatal neurones have a specific ability to respond to phasic dopamine release. J Physiol. 591 (13), 3197-3214 (2013).
- Hübscher, D., Nikolaev, V. Generation of transgenic mice expressing FRET biosensors. Methods Mol Biol. 1294, 117-129 (2015).
