Creación de abdominales adherencias en ratones
Summary
Abdominal adhesions that form after surgery are a major cause of pain, infertility, and hospitalization and reoperation for small bowel obstruction. Our surgical procedure for creating abdominal adhesions in mice is a reliable tool to study the mechanisms underlying the formation of adhesions.
Abstract
Abdominal adhesions consist of fibrotic tissue that forms in the peritoneal space in response to an inflammatory insult, typically surgery or intraabdominal infection. The precise mechanisms underlying adhesion formation are poorly understood. Many compounds and physical barriers have been tested for their ability to prevent adhesions after surgery with varying levels of success. The mouse and rat are important models for the study of abdominal adhesions. Several different techniques for the creation of adhesions in the mouse and rat exist in the literature. Here we describe a protocol utilizing abrasion of the cecum with sandpaper and sutures placed in the right abdominal sidewall. The mouse is anesthetized and the abdomen is prepped. A midline laparotomy is created and the cecum is identified. Sandpaper is used to gently abrade the surface of the cecum. Next, several figure-of-eight sutures are placed into the peritoneum of the right abdominal sidewall. The abdominal cavity is irrigated, a small amount of starch is applied, and the incision is closed. We have found that this technique produces the most consistent adhesions with the lowest mortality rate.
Introduction
Las adherencias abdominales son una forma de tejido cicatrizal que se forman en el abdomen, en respuesta a la inflamación, por lo general después de la cirugía o infección intraabdominal. Las adherencias son una causa importante de dolor abdominal crónico y la infertilidad, y son la causa más común de obstrucción del intestino delgado 1. La presencia de adherencias hace que la realización de una segunda operación abdominal más difícil y aumenta la probabilidad de complicaciones 2.
A pesar de años de investigación, los mecanismos que subyacen a la formación de adherencias siguen siendo poco conocidos. Se sabe que una lesión inicial a la superficie peritoneal causa una exudación de líquido rico en fibrina, que forma entonces un coágulo que une las superficies de intestino y la pared abdominal juntos 3. Más tarde, los fibroblastos y otras células migran al espacio de adhesivo y secretan tejido conectivo 4. Largo de meses o años la adhesión madura mediante el desarrollo de los vasos sanguíneos y los nervios <sup> 5.
Existen varios productos comerciales que están diseñados para reducir la formación de adherencias después de la cirugía abdominal (por ejemplo, Seprafilm). Todos estos productos actúan como barreras mecánicas y detener la formación de adherencias al impedir el contacto físico entre asas intestinales y el 6,7 pared abdominal. A pesar de la evidencia de un ensayo controlado que una barrera de adhesión quirúrgica reduce la formación de adherencias 8, muchos cirujanos anecdóticamente se han decepcionado con la eficacia de los productos barrera mecánica.
En la actualidad no existen terapias anti-adherencia a base de drogas, lo que refleja el hecho de que los procesos exactos involucrados en la formación de adherencias son poco conocidos. El desarrollo de una terapia que se dirige específicamente a los agentes celulares o moleculares implicados en la formación de adherencias requerirá una mejor comprensión de los eventos que están implicados en la formación de la adherencia. varios gruposs han identificado las vías moleculares que pueden ser importantes para la formación de adherencias 9-11. Los modelos animales proporcionan un ambiente excelente para el estudio de la formación de adherencias. Muchos estudios se han publicado que describe la creación quirúrgica de adherencia en varios animales, en particular la rata y el ratón 6,12-14. Dada nuestra experiencia con el estudio de la fibrosis en el ratón y la amplia disponibilidad de ratones transgénicos y anticuerpos basado en el ratón, elegimos el ratón como modelo para el estudio de las adherencias. Aquí, se presenta la técnica que hemos desarrollado para crear de forma reproducible y fiable adherencias abdominales en el ratón.
Protocol
Representative Results
Discussion
Los pasos críticos en este procedimiento son: la abrasión a fondo el ciego sin causar perforación, la colocación de suturas en la pared lateral abdominal, y aplicando la cantidad correcta de almidón. Sólo aplique papel de lija para el ciego, o a una pequeña parte específica del intestino. El amplio uso de papel de lija en grandes cantidades de intestino delgado tiende a causar íleo significativa. Tenga cuidado para desgastar el ciego con la fuerza suficiente que la superficie se vuelve áspera, pero no tanto qu…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MDL fue apoyada por el Colegio Americano de Cirujanos (AEC) Beca de Investigación Residente. MSH fue apoyado por el Instituto de Medicina Regenerativa de California (CIRM) la formación Clinical Fellow subvención TG2-01159. MSH, HPL, y MTL fueron apoyados por la Sociedad Americana de Cirujanos Maxilofaciales (ASMS) / Fundación Cirujanos Maxilofaciales (MSF) Premio Beca de investigación. HPL fue apoyado por el NIH subvención R01 GM087609 y un regalo de Ingrid Lai y Bill Shu en honor a Anthony Shu. HPL y MTL fueron apoyados por el Laboratorio Hagey Pediátrica Medicina Regenerativa y la Fundación Oak. MTL fue apoyada por el / Fondo Olivier Gunn.
Materials
| Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" | Fisher Scientific | 14-206-62 | |
| Polylined Sterile Field, 18" x 24" | Busse Hospital Disposables | 696 | Cut a rectangular hole of the appropriate size |
| Isothesia isoflurane | Henry Schein | 050033 | |
| Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
| Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Nair depilatory cream | Church & Dwight Co. | 22339-05 | |
| Buprenex buprenorphine 0.3 mg/mL | Reckitt Benckiser Pharmaceuticals Inc. | NDC 12496-0757-5 | |
| 1 cc insulin syringe, 27G | Becton Dickinson | 329412 | |
| Povidone Iodine Prep Solution | Medline | MDS093944H | |
| Webcol alcohol prep swabs | Covidien | 6818 | |
| General-Purpose Labarotory Labeling tape | VWR | 89097-912 | |
| BioGel PI surgical gloves | Mölnlycke Health Care | ALA42675Z | |
| Micro Forceps with teeth | Roboz | RS-5150 | |
| Fine scissors- sharp | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Straight serrated forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Castro-Viejo needle driver | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| 100 grit 1/4 sheet sandpaper | ACE Hardware | 1010446 | Cut into strips |
| 4-0 silk suture, 30", SH needle | Ethicon | K831 | |
| 7-0 PDS II absorbable monofilament suture, 30", BV-1 needle | Ethicon | Z135 | Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures. |
| Rice starch | MP Biomedicals | 102955 | |
| 0.9% Sodium Chloride Irrigation | Baxter | BHL2F7121 | Warm to 37° C prior to use |
| 10 mL syringe | Becton Dickinson | 309604 | |
| 6-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", RB-1 taper needle | Ethicon | J212H | |
| 6-0 Ethilon nylon monofilament suture, 18", P-3 needle, | Ethicon | 1698G | |
| Tegaderm Transparent Film Dressing Frame Style, 6 cm x 7 cm | 3M | 1624W | Cut in half lengthwise |
References
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