तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं (एनएससी) कोशिकाओं जो स्वयं को नवीनीकृत और तीन तंत्रिका प्रजातियों में अंतर कर सकते करने के लिए देखें। यहाँ, हम एक दिया सेल प्रतिरूप की शर्तों के तहत neurosphere गठन और भेदभाव का उपयोग कर जनसंख्या में एनएससी आवृत्ति निर्धारित करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है।
astrocytes, न्यूरॉन्स और oligodendrocytes – तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं (एनएससी) नवीनीकरण नहीं आत्म और तीन प्रमुख तंत्रिका प्रजातियों उत्पन्न करने की क्षमता है। एनएससी और तंत्रिका progenitors (एनपीएस) आमतौर पर neurospheres के रूप में इन विट्रो में सुसंस्कृत हैं। इस प्रोटोकॉल में विस्तार से वर्णन कैसे प्रतिरूप की शर्तों के तहत एक दिया सेल की आबादी में एनएससी आवृत्ति निर्धारित करने के लिए। प्रोटोकॉल एक घनत्व है कि प्रतिरूप neurospheres की पीढ़ी के लिए अनुमति देता है पर कोशिकाओं के बोने के साथ शुरू होता है। neurospheres तो संभाग coverslips को हस्तांतरित और वातानुकूलित माध्यम है, जो neurospheres की भेदभाव की क्षमता को अधिकतम में प्रतिरूप की शर्तों के तहत भेदभाव कर रहे हैं। अंत में, एनएससी आवृत्ति neurosphere गठन और multipotency क्षमताओं के आधार पर गणना की है। इस प्रोटोकॉल के यूटिलिटीज उम्मीदवार एनएससी मार्कर के मूल्यांकन, एनएससी की शुद्धि, और एनपीएस से एनएससी भेद करने की क्षमता शामिल है। इस विधि को प्रदर्शन करने के लिए 13 दिन लगते हैं, जो ज्यादा रोंमौजूदा तरीकों की तुलना में horter एनएससी आवृत्ति गणना करने के लिए।
तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं (एनएससी) केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) कि स्वयं को नवीनीकृत और multipotent हो सकता है की कोशिकाओं रहे हैं। एनएससी पहले भ्रूण अग्रमस्तिष्क के विकास के दौरान निर्दिष्ट और ऐसे पार्श्व निलय के subventricular क्षेत्र (SVZ) और हिप्पोकैम्पस के दांतेदार गाइरस (डीजी) के रूप में विशिष्ट क्षेत्रों में वयस्क मस्तिष्क में जारी रहती है करने के लिए जारी कर रहे हैं। एनएससी लाइनों की संख्या में इस तरह के बैटन रोग 1 के रूप में स्ट्रोक और अन्य मस्तिष्क संबंधी बीमारियों के उपचार के लिए नैदानिक परीक्षण में इस्तेमाल किया जा रहा है।
एनएससी और तंत्रिका progenitors (एनपीएस) चल 3 आयामी अंडाकार आकृति संरचनाओं neurospheres कहा जाता है के रूप में संस्कृति में प्रचारित कर रहे हैं। Neurosphere संस्कृति प्रणाली, 1990 के दशक में रेनॉल्ड्स और वेइस द्वारा विकसित किया गया था जब उन्होंने पाया कि भ्रूण और वयस्क cortical कोशिकाओं epidermal वृद्धि कारक (EGF) और बुनियादी fibroblast वृद्धि कारक (bFGF) 2-4 की उपस्थिति में बांट सकता है। Neurospheres सी के एक विषम मिश्रण से मिलकर बनता हैविकास के विभिन्न चरणों में 5 उपवर्गों के शामिल एल। यह विशेष रूप से एनपीएस की उपस्थिति के कारण एनएससी neurospheres से प्राप्त आंकड़ों का उपयोग करते हुए अध्ययन करने के लिए चुनौती दे रहा है। इसलिए, यह neurospheres से एनएससी को समृद्ध करने के लिए महत्वपूर्ण है। वर्तमान में, चार मुख्य तरीकों इन विट्रो में एनएससी के लिए संतुष्ट करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। सबसे पहले कोशिका की सतह मार्कर का उपयोग है। लुईस-एक्स (लेक्स) और CD133 (भी Prominin1 के रूप में जाना जाता है) सबसे प्रमुख कोशिका की सतह एनएससी मार्करों 6-9 कर रहे हैं। Syndecan -1, पायदान -1 और Integrin-beta1 अन्य सतह प्रोटीन है कि एनएससी 10 के लिए बेहतर कर रहे हैं। दूसरा डाई अपवर्जन है। यह दिखाया गया है कि एक ओर जनसंख्या कोशिकाओं है, जो फ्लोरोसेंट डीएनए बाध्यकारी डाई Hoechst 33342 बाहर पंप करने के लिए अद्वितीय क्षमता है, एनएससी 11 के लिए समृद्ध कर रहे हैं। तीसरा रूपात्मक चयन का इस्तेमाल होता है। यह प्रदर्शन किया गया है कि वृद्धि की सेल आकार और विघटन के साथ कोशिकाओं को उनके समकक्षों की तुलना में अधिक 5,12,13 एनएससी बंदरगाह। चौथा एनएससी सु के अतिरिक्त हैसंस्कृति के माध्यम से rvival कारकों। यह chondroitin सल्फेट proteoglycan की है कि इसके अलावा दिखाया गया है और apolipoprotein ई एनएससी अस्तित्व को बढ़ाता है और इस प्रकार एनएससी आवृत्ति 14,15 बढ़ जाती है। हालांकि प्रतिलेखन कारक सहित कई मार्कर एनएससी 16,17 के साथ संबद्ध किया गया है, इन मार्करों में से कोई भी शुद्धता के लिए एनएससी को समृद्ध करने में सक्षम हैं। निश्चित एनएससी मार्कर की कमी के कारण, यह एनएससी यों और इन विट्रो में एनपीएस से उन्हें अलग करने के लिए एक चुनौती बनी हुई है।
प्रारंभिक अध्ययन एनएससी 7,11,13 यों तो neurosphere गठन परख (एनएफए) का इस्तेमाल किया। इस परख में, अलग कोशिकाओं neurospheres के लिए फार्म सुसंस्कृत हैं और neurospheres की संख्या चढ़ाया चुना गया है हर 100 कोशिकाओं के लिए उत्पन्न। यह मान neurosphere गठन इकाई (NFU) के रूप में करार दिया है। अगर सब neurospheres एनएससी से उठता NFU एनएससी आवृत्ति के बराबर होती है। हालांकि, यह दिखाया गया था कि NFU एनएससी आवृत्ति overestimates के रूप में neurospheres दोनों एन एस द्वारा गठित कर रहे हैंसीएस और जल्दी एनपीएस 5। इस प्रकार, यह पूरी तरह से neurosphere गठन के आधार पर एनएससी गणना करने के लिए गलत है। यह करने के लिए अपनी क्षमता के आधार पर एनएससी यों के लिए संभव हो सकता है, आत्म नवीनीकृत बड़े पैमाने पर पैदा करना और multipotent neurospheres उत्पन्न करते हैं।
एनएससी, जो EGF और bFGF उत्तरदायी हैं, आम तौर पर कम से कम दस मार्ग के लिए जीवित है और इस प्रकार संस्कृति 4,18-20 में व्यापक आत्म नवीकरण क्षमता प्रदर्शित करते हैं। एनपीएस, जो रूप में अच्छी तरह EGF और bFGF उत्तरदायी हैं, यह भी एक कुछ अंश के समय की एक विस्तारित अवधि के लिए, लेकिन नहीं करने के लिए neurospheres उत्पन्न कर सकता है। इसलिए, यह व्यापक रूप से स्वीकार किया गया है कि सदाशयी एनएससी कम से कम दस मार्ग के लिए neurosphere गठन के आधार पर निष्पक्ष सटीकता के साथ समझा जा सकता है। ज्यादातर अध्ययनों में, हालांकि, आत्म नवीकरण आमतौर पर माध्यमिक या तृतीयक neurosphere गठन के आधार पर लंबे समय प्रयोगात्मक दस मार्ग के लिए आवश्यक होने के कारण मापा जाता है। इसलिए, माध्यमिक एनएफए मोटे तौर पर आत्म नवीकरण क्षमता शर्त तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकतासमझना आबादी है, लेकिन सही एनएससी आवृत्ति गणना करने के लिए इस्तेमाल नहीं किया जा सकता है।
एनएससी एनपीएस की तुलना में एक अधिक से अधिक proliferative क्षमता है। एनएससी की यह संपत्ति लुइस एट अल द्वारा इस्तेमाल किया गया था। तंत्रिका कॉलोनी के गठन सेल परख (NCFCA) 21,22 – एनएससी गणन के लिए एक परख विकसित करने के लिए। इस परख में, एकल कक्षों एक कोलेजन युक्त semisolid मैट्रिक्स में 3 सप्ताह के लिए सुसंस्कृत हैं। इन संस्कृति शर्तों के तहत, यह दिखाया गया था कि कोशिकाओं है कि व्यास में 2 मिमी ऊपर neurospheres फार्म tripotent हैं और लंबी अवधि के लिए स्वयं को नवीनीकृत कर सकते हैं। इन कोशिकाओं को एनएससी के रूप में परिभाषित कर रहे हैं। इसलिए, एनएससी को प्रभावी ढंग से एनपीएस से प्रतिष्ठित हैं।
एनएससी astrocytes, oligodendrocytes और न्यूरॉन्स में अंतर करने की क्षमता है। neurospheres के भेदभाव के लिए, विकास के कारकों को हटा रहे हैं और सीरम संस्कृति के माध्यम से जोड़ा जाता है। सभी तीन तंत्रिका प्रजातियों, तो सेल कि कि neurosphere शुरू की एक neurosphere में मनाया जाता है, तो मैंएक एनएससी है। हालांकि, भेदभाव परख कुछ सीमाएँ हैं। सबसे पहले, संस्कृति भेदभाव के लिए इस्तेमाल की स्थिति में सभी तीन तंत्रिका प्रजातियों की पीढ़ी के लिए इष्टतम नहीं हो सकता। वास्तव में, एक एकल neurosphere भेदभाव प्रक्रिया में महत्वपूर्ण कोशिका मृत्यु होती है और ज्यादातर astrocyte पीढ़ी होता है (Tham एम और अहमद एस, अप्रकाशित)। दूसरा, वहाँ clonality का मुद्दा है। एनएससी, गठन और neurospheres के भेदभाव की सटीक गणना के लिए प्रतिरूप की स्थिति है, जहां प्रत्येक neurosphere एक एकल कोशिका से उत्पन्न होती है के तहत किया जाना है। थोक निलंबन संस्कृतियों में, एकत्रीकरण दोनों सेलुलर और neurosphere का स्तर 23-25 पर होता है। इसलिए, यह प्रत्येक neurosphere के लिए कई कोशिकाओं या neurospheres, जो neurosphere गिनती और multipotency के मूल्यांकन पेचीदा से उठता लिए संभव है। हाल ही में सबूत से पता चलता है कि कोशिकाओं के एकत्रीकरण 0.5 कोशिकाओं / μL या नीचे, और कम चढ़ाना घनत्व में नहीं होती है संस्कृति प्लेटों Neu दौरान स्थानांतरित नहीं कर रहे हैं जबrosphere गठन 15। इस प्रकार इस तरह के कम घनत्व में संवर्धन कोशिकाओं clonality सुनिश्चित करेगी।
वर्तमान में, NCFCA सबसे अधिक इस्तेमाल किया एनपीएस से एनएससी भेद और एनएससी आवृत्ति गणना करने के लिए विधि है। NCFCA, हालांकि, तीन सप्ताह की एक अपेक्षाकृत लंबे समय की आवश्यकता है। यहाँ, हम एनएससी की क्षमता multipotent neurospheres के लिए फार्म के आधार पर एनएससी आवृत्ति गणना करने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन है। इस प्रोटोकॉल प्रदर्शन करने के लिए केवल 13 दिन लगते हैं। के रूप में कोलेजन मैट्रिक्स neurospheres के आंदोलन को रोकता है NCFCA clonality सुनिश्चित करता है। संस्कृति इस प्रोटोकॉल में इस्तेमाल की स्थिति भी अनुमति देता है clonality भर में बनाए रखा जा सकता है। उदाहरण के लिए, 50-अच्छी तरह से संभाग coverslips का उपयोग सुनिश्चित करता है कि neurospheres एक-दूसरे से संपर्क के बिना अलग होगा। इसके अलावा, हम वातानुकूलित माध्यम है कि भेदभाव के दौरान neurotrophic कारकों की आपूर्ति neurospheres (चित्रा 1) के भेदभाव क्षमता को अधिकतम करने के लिए उपयोग।
हम ही प्रतिरूप की शर्तों के तहत एनएससी की गणना का वर्णन है। महत्वपूर्ण कदम ताजा एनएससी विकास और भेदभाव माध्यम के उपयोग, और भी कोट करने के लिए हौसले से तैयार पीएलएल / laminin समाधान के उपयोग संभाग coverslips, साथ ही संस्कृति व्यंजन शामिल हैं। इस neurospheres का इष्टतम विकास और भेदभाव की स्थिति सुनिश्चित करता है। अच्छी गुणवत्ता वाले एंटीबॉडी के उपयोग को प्रभावी ढंग से न्यूरॉन्स और glia, साथ ही प्रतिरूप neurospheres है कि अन्य neurospheres के साथ संपर्क में नहीं हैं के चुनिंदा उठा पता लगाने के लिए महत्वपूर्ण हैं। इसके अलावा, यह उठाया neurospheres सुनिश्चित करने के लिए सूख नहीं है महत्वपूर्ण है। यह हर 10 neurospheres उठा के बाद एक अच्छी तरह से भेदभाव माध्यम के 10 μL जोड़ने की सिफारिश की है। यह नमूना प्रति एक 10 सेमी पकवान में एक संभाग coverslip का उपयोग करने के लिए विभिन्न नमूनों से neurospheres के बीच पार बात से बचने के लिए महत्वपूर्ण है। दो coverslips (विभिन्न नमूनों से प्रत्येक युक्त neurospheres) में रखा जाता है तोवही 10 सेमी पकवान, एक coverslip से neurospheres कारक है कि अन्य coverslip में neurospheres की प्रवृत्ति बदल सकता है विशिष्ट प्रजातियों में अंतर करने के लिए जारी हो सकता है। वही 10 सेमी डिश में दो coverslips भी नमूने के बीच मिश्रण में हो सकता है।
घटना NFU या एनएससी आवृत्ति की उम्मीद की तुलना में कम है, यह सुनिश्चित करें कि कम बीतने संख्या neurospheres किया जाता है। यह भी महत्वपूर्ण है कि स्वस्थ कम बीतने neurospheres वातानुकूलित माध्यम पैदा करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं। इसके बाद, यदि neurospheres इस तरह के 96 अच्छी तरह से थाली में के रूप में छोटे व्यास, के साथ कुओं में सुसंस्कृत हैं, तो यह मुश्किल पैंतरेबाज़ी और एक micropipette का उपयोग neurospheres लेने के लिए होगा। इस मामले में, neurospheres एक बड़ा संस्कृति डिश के लिए, इस तरह के एक 6 अच्छी तरह से पकवान के रूप में, पहले उठा लिए स्थानांतरण। उठाया neurospheres से कुछ संस्कृति और immunostaining के दौरान संभाग coverslip से लिफ्ट बंद हो सकती है। संस्कृति के दौरान संभाग coverslip के आंदोलन, और कम गहन धोने कम से कमimmunostaining दौरान हैैं, neurospheres की टुकड़ी से बचने के लिए मदद मिलेगी।
प्रारंभिक अध्ययन केवल एनएफए 7,11,13 का उपयोग मात्रा एनएससी। हालांकि, एनएफए एनएससी आवृत्ति overestimates के रूप में दोनों एनएससी और जल्दी एनपीएस neurospheres 5 उत्पन्न करते हैं। लुइस एट अल। एनएससी NCFCA 21,22 के रूप में जाना यों की एक अन्य विधि विकसित की है। NCFCA एक कोलेजन आधारित मैट्रिक्स में एकल कक्षों संवर्धन करना शामिल है clonality सुनिश्चित करने के लिए है, और यह दिखाया गया था कि व्यास में 2 मिमी ऊपर neurospheres केवल एनएससी से बनते हैं। NCFCA के लिए इसी प्रकार, clonality इस प्रोटोकॉल के दौरान यह सुनिश्चित किया है। इस प्रतिरूप घनत्व में neurospheres पैदा करने और संभाग coverslips में neurospheres फर्क द्वारा हासिल की है। संभाग coverslips के उपयोग के लाभ के एक नंबर प्रदान करता है। संभाग coverslip प्रत्येक नमूना neurosphere अन्य नमूना neurospheres के साथ शारीरिक संपर्क कर रहे है, जिससे भेदभाव के दौरान clonality सुनिश्चित बिना अंतर करने के लिए अनुमति देता है।संभाग coverslip भेदभाव माध्यम नमूना neurospheres लगातार वातानुकूलित करने और अधिकतम भेदभाव सुनिश्चित करने के लिए अनुमति देने के लिए निलंबित कर दिया पर रखा जा सकता है। भेदभाव के दौरान वातानुकूलित मध्यम और सीरम के अभाव में, neurospheres के अस्तित्व कम हो जाती है और neurospheres ज्यादातर astrocytes (Tham एम और अहमद एस, अप्रकाशित) उत्पन्न करते हैं। इसके अलावा, immunostained neurospheres आसानी से समय की लंबी अवधि के लिए भंडारित किया जा सकता है और संभाग coverslips माइक्रोस्कोप गिलास स्लाइड पर सीधे रखा जा सकता है। इसके अतिरिक्त, immunostained neurospheres की इमेजिंग के रूप में एक जल्दी, छोटे अच्छी तरह से संभाग में neurosphere का पता लगाने के लिए एक छवि पर कब्जा है, और अगले अच्छी तरह से करने के लिए पर स्थानांतरित कर सकते हैं आसान बना दिया है।
हम दोनों प्रोटोकॉल इस पांडुलिपि 27 और NCFCA 28 में वर्णित का उपयोग E14.5 माउस neurosphere संस्कृति में एनएससी आवृत्ति निर्धारित किया है। E14.5 माउस neurospheres में एनएससी आवृत्ति दोनों मेरे द्वारा निर्धारितthods तुलना कर रहे हैं। NCFCA एनएससी कि multipotent कर रहे हैं और लंबी अवधि के आत्म नवीकरण क्षमता विश्लेषण करता है। चूंकि हमारे विधि से एनएससी आवृत्ति है कि NCFCA से तुलनीय है, हमारे प्रोटोकॉल से readout एनएससी आवृत्ति overestimate करने के लिए प्रतीत नहीं होता है। NCFCA तीन सप्ताह पूरा होने की आवश्यकता है और मुख्य रूप से सेल चढ़ाना और मध्यम आपूर्ति शामिल है। यहां वर्णित प्रोटोकॉल प्रदर्शन करने के लिए 13 दिन की आवश्यकता है और कदम की एक अलग श्रृंखला, जैसे, neurosphere उठा और immunostaining शामिल है। इस प्रोटोकॉल एक वैकल्पिक तरीका एनएससी गणना करने के लिए के रूप में काम कर सकता है। शोधकर्ताओं ने उनके नमूनों में एनएससी आवृत्ति को सत्यापित करने के लिए दोनों NCFCA और इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर सकते हैं।
इस प्रोटोकॉल की एक सीमा है कि महत्वपूर्ण कदम की एक श्रृंखला के सभी दिन 8. 50-अच्छी तरह से संभाग coverslip करने के लिए वातानुकूलित माध्यम की तैयारी, नमूना neurospheres की NFU का दृढ़ संकल्प, और नमूना neurospheres के हस्तांतरण पर प्रदर्शन किया जा रहा है होने की जरूरत है दा पर प्रदर्शनY 8. एक इन चरणों को पूरा करने के लिए समय ले सकता है। इसके अलावा, यह अभ्यास की आवश्यकता है एक कुशल तरीके से इन चरणों को पूरा करने के लिए।
Neurospheres व्यापक रूप से एनएससी समारोह और व्यवहार का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। हालांकि, neurospheres दोनों एनएससी और एनपीएस से मिलकर बनता है। इसलिए, यह एनएससी जीव विज्ञान का अध्ययन करने के लिए neurospheres से एनएससी संतुष्ट करने के लिए महत्वपूर्ण है। वर्तमान में, कोशिका की सतह मार्कर, डाई बहिष्कार संपत्ति के रूप में अच्छी तरह से सेल आकार और विघटन एनएससी 6,7,9-13,29,30 के लिए संतुष्ट करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। इस प्रोटोकॉल संभावित एनएससी मार्कर द्वारा एनएससी के संवर्धन यों की है, और एक निश्चित एनएससी मार्कर के लिए खोज की सुविधा के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। हाल के अध्ययनों से चार एनएससी आवृत्ति 5,14,15,26 गणना करने के लिए इस प्रोटोकॉल का इस्तेमाल किया है।
The authors have nothing to disclose.
हम इस अनुसंधान के वित्तपोषण के लिए विज्ञान, प्रौद्योगिकी और अनुसंधान (एक * स्टार), सिंगापुर के लिए एजेंसी को धन्यवाद।
15 ml conical centrifuge tubes | BD | 352096 | |
50 ml conical centrifuge tubes | BD | 352070 | |
20 ml sterile syringe | BD | 300141 | |
50 ml sterile syringe | BD | 300144 | |
Fetal bovine serum (FBS) | Biowest | S1810 | |
Mouse anti-Tuj1 IgG2a antibody | Covance | MMS-435P-100 | |
Rabbit anti-GFAP IgG antibody | Dako | Z033401 | |
Hemocytometer | Hausser Scientific | 3100 | |
Microscope fitted to laminar flow hood | Leica | MZ6 | |
Glass slides | Marienfeld-superior | 1000200 | |
Mouse anti-O4 IgM antibody | Merck Millipore | MAB345 | |
Hydromount | National Diagnostics | HS-106 | |
Microscope | Nikon Eclipse | TS100-F | |
Laminar flow hood | NuAire | NU-543 | |
96-well culture dishes | NUNC | 167008 | |
10-cm culture dishes | NUNC | 150350 | |
Paraffin film | Parafilm | PM999 | |
Human epidermal growth factor (EGF) | Peprotech | AF-100-15 | |
Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF) | Peprotech | 100-18B | |
0.2 µm filter | Sartorius Stedim | 16534-K | |
0.45 µm filter | Sartorius Stedim | 16555-K | |
1.0 N Sodium hydroxide (NaOH) | Sigma-Aldrich | S2770 | |
1.0 N Hydrochloric acid (HCl) | Sigma-Aldrich | H9892 | |
Trypan Blue | Sigma-Aldrich | T8154 | |
Poly-L-lysine (PLL) | Sigma-Aldrich | P8920 | |
Paraformaldehyde (PFA) powder | Sigma-Aldrich | P6148 | Toxic |
Bovine serum albumin (BSA) powder | Sigma-Aldrich | A7906 | |
50-well chambered coverslips | Sigma-Aldrich | C7735 | |
Stir plate with heat function | Stuart | UC152 | |
DMEM/F12 medium | Thermo Fisher Scientific | 11320-033 | |
B27 | Thermo Fisher Scientific | 17504044 | |
Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher Scientific | 15140-122 | |
Laminin | Thermo Fisher Scientific | 23017-015 | |
1x phosphate buffered saline without Ca2+ and Mg2+ (DPBS) | Thermo Fisher Scientific | 14190144 | |
Alexa Fluor 488 goat anti-mouse IgM antibody | Thermo Fisher Scientific | A21042 | |
Alexa Fluor 594 goat anti-mouse IgG2a antibody | Thermo Fisher Scientific | A21135 | |
Alexa Fluor 647 goat anti-rabbit IgG antibody | Thermo Fisher Scientific | A31573 | |
4’,6’-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride (DAPI) | Thermo Fisher Scientific | D3571 | |
Cell culture centrifuge | Thermo Fisher Scientific | RT1 75002383 | |
Pasteur pipettes | Thermo Fisher Scientific | 10006021 | |
CO2 incubator | |||
Ventilated fume hood | |||
Aspirator | |||
Confocal microscope | |||
Micropipettes | |||
Micropipette tips | |||
Plastic pipettes | |||
Multichannel pipettes | |||
Glass beaker | |||
Sterile forceps | |||
pH meter |