Ce manuscrit décrit un protocole détaillé pour induire régénération du muscle squelettique aiguë chez la souris adulte et manipulations ultérieures des muscles, comme la dissection, le gel, la coupe, coloration de routine, et myofibre analyse de surface en coupe transversale.
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Article de méthode
Induction de aiguë Skeletal Muscle Régénération par cardiotoxine Injection
Dans cet article
Résumé
Résumé
Régénération du muscle squelettique est un processus physiologique qui se produit dans les muscles squelettiques adultes en réponse à une lésion ou une maladie. Aiguë régénération du muscle squelettique induite par blessure est un système puissant modèle largement utilisé pour étudier les événements impliqués dans la régénération musculaire, ainsi que les mécanismes et les différents acteurs. En effet, une connaissance détaillée de ce processus est essentiel pour une meilleure compréhension des conditions pathologiques qui conduisent à la dégénérescence des muscles squelettiques, et il aide à identifier de nouvelles stratégies thérapeutiques ciblées. Le présent ouvrage décrit un protocole détaillé et reproductible pour induire régénération du muscle squelettique aiguë chez la souris par une injection intramusculaire unique de cardiotoxine (CTX). CTX appartient à la famille des serpents toxines de venin et provoque myolyse de myofibres, ce qui déclenche finalement les événements de régénération. La dynamique de la régénération du muscle squelettique est évaluée par une analyse histologique de coupes de muscle. Le protocole a égalementillustre les procédures expérimentales pour la dissection, le gel, et en coupant le muscle jambier antérieur, ainsi que l'hématoxyline & éosine routine qui est largement utilisé pour l'analyse morphologique et morphométrique ultérieure.
Introduction
les muscles squelettiques chez les mammifères adultes sont formés par des groupes de fascicules de cellules musculaires multinucléées (les myofibres) qui sont spécialisées pour la contraction. Chaque myofibres est un syncytium allongé, entouré par le sarcolemme (membrane plasmatique) et contenant des myofibrilles qui sont constitués de protéines contractiles régulièrement et de manière répétée organisées (actine et la myosine). Dans la vie adulte et dans des conditions de repos, les muscles squelettiques ont un chiffre d' affaires très faible de leur myonuclei 1; en effet, les noyaux musculaires, qui sont situés à la périphérie de la myofibres, sous le....
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Protocole
Toutes les expériences ont été menées en stricte conformité avec les directives institutionnelles pour la recherche animale et approuvés par le ministère de la santé publique, la santé animale, la nutrition et la sécurité du Ministère italien de la santé des aliments, conformément à la loi sur l'expérimentation animale. procédures de dislocation cervicale peuvent varier d'une institution à la base de IACUC ou de ses exigences équivalentes.
1. cardiotoxine Injection dans le muscle jambier antérieur
- Préparer un 10 uM solution de cardiotoxine (CTX) de travail en diluant la solution cardiotoxine mère dans stérile Phosphate-Buffered Saline (PBS)....
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Résultats
Coloration H & E permet l'évaluation de la morphologie du processus de régénération à des moments spécifiques au cours de la régénération du muscle squelettique. La figure 3 montre l'analyse au cours du temps effectuées sur les muscles TA blessés de souris de type sauvage. Les muscles ont été isolés à 3, 7, 15 et 30 jours après l' injection CTX, comme schématisé sur la figure 3A. Images représentatives de sections transversales H & E-colorées mon.......
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Discussion
Ici, nous décrivons un protocole pour induire une lésion aiguë dans le muscle squelettique (ie, l'injection intramusculaire de CTX). Il est largement utilisé comme un outil puissant pour étudier la dynamique de régénération du muscle squelettique in vivo. L' injection CTX induit la dégénérescence des fibres musculaires, ce qui est provoqué par la dépolarisation du sarcolemme et la contraction des fibres 12 et déclenche la cascade d'événements qui conduit à la régénération muscula.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Nous remercions la Maison des animaux et les installations de microscopie intégrée de l’IGB-CNR. Ce travail a bénéficié d’un financement de recherche du septième programme-cadre de la Communauté européenne dans le cadre du projet ENDOSTEM (Activation of vasculature associated stem cells and muscle stem cells for the repair and maintenance of muscle tissue, grant agreement number 241440), du ministère italien de l’Éducation-Université-Recherche (MIUR-PRIN2 010-2011) à G.M. et S.B. et PON Cluster IRMI à G.M., et la fondation CARIPLO à G.M. et S.B.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Cardiotoxine de ; Naja mossambica mossambica | SIGMA ALDRICH | C9759 | |
| Seringue Pour Insuline BD Micro-Fine+ Aiguille 30 G x 8 mm - Da 0.3 mL | BD | 324826 | |
| Tragacanth Gum | MP BIOMEDICALS,LLC | ||
| 2-Methylbutane (Isopentane) | SIGMA ALDRICH | 78-78-4. | |
| OCT Killik Solution pour cryostat à inclusion | Bio-optique | ; 05-9801 | |
| Lame de microtome plume S35 | Bio-optique | ; 01-S35 | |
| Lame de verre Superfrost Plus | Menzel-Glä ; ser | 09-OPLUS | |
| Dumon #5 Pince à finition miroir ; | 2BIOLOGICAL INSTRUMENTS | 11251-23 | |
| Ciseaux droits Sharp/Sharp | 2BIOLOGICAL INSTRUMENTS | 15024-10 | |
| Ciseaux Noyes Straight | 2BIOLOGICAL INSTRUMENTS | 15012-12 | |
| Ciseaux à iris fins droits Sharp/Sharp 10.5 cm | 2BIOLOGICAL INSTRUMENTS | 14094-11 | |
| Eukitt | Bio-optica | 09-00100 | |
| Lamelle coulissante | BIOSIGMA | VBS651 | |
| Xylène | SIGMA ALDRICH | 214736 | |
| Éthanol 100 % | sigma-Aldrich | 02860-2.5L | |
| Hématoxyline | J.T. BAKER | 3873 | |
| Eosin | SIGMA ALDRICH | HT110116 | |
| Cryostat | LEICA | CM3050 S |
Références
- Morgan, J. E., Partridge, T. A. Muscle satellite cells. Int J Biochem Cell Biol. 35 (8), 1151-1156 (2003).
- Roca, I., Requena, J., Edel, M. J., Alvarez-Palomo, A. B. Myogenic Precursors from iPS Cells for Skeletal Muscle Cell Replacement Therapy. J Clin Med. 4 (2), 243-259 (201....
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Réimpressions et autorisations
