Infection expérimentale avec<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; En tant que modèle pour l&#39;étude de l&#39;hôte Réponses Interféron-y

Jeeyoon Jennifer Ahn; Thirumahal Selvanantham; Monan Angela Zhang; Thierry Mallevaey; Shannon E. Dunn

doi:10.3791/54554

Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.

Article de méthode

Infection expérimentale avec

12.9K vues

⸱

DOI :

10.3791/54554

⸱

16 novembre 2016

Jeeyoon Jennifer Ahn^*¹ , Thirumahal Selvanantham^*¹ , Monan Angela Zhang^*¹ , Thierry Mallevaey¹ , Shannon E. Dunn¹^,²^,³

¹Department of Immunology, University of Toronto, ²Toronto General Research Institute, University Health Network, ³Women's College Research Institute

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit comment inoculer des souris C57BL / 6J avec la souche EGD de Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) et de mesurer l' interféron-γ (IFN-γ) Réponses par tueuses naturelles (NK), T (NKT) des cellules tueuses naturelles, et adaptative des lymphocytes T post-infection. Ce protocole décrit également la façon de mener des études de survie chez les souris après l' infection avec une DL ₅₀ dose modifiée de l'agent pathogène.

Résumé

L. monocytogenes est une bactérie Gram-positif qui est une cause de maladies d' origine alimentaire chez les humains. L'infection expérimentale de souris avec cet agent pathogène a été très informatif sur le rôle des cellules du système immunitaire innée et adaptative et des cytokines spécifiques de l'immunité de l'hôte contre les pathogènes intracellulaires. La production d'IFN-γ par des cellules innées lors de l' infection par L. monocytogenes sublétale est importante pour l' activation des macrophages et le contrôle précoce de l'agent pathogène ^1-3. En outre, la production d' IFN-γ par les lymphocytes mémoire adaptative est importante pour amorcer l'activation des cellules innée à ⁴ réinfection. Le L. monocytogenes modèle d'infection sert ainsi un excellent outil pour examiner si de nouvelles thérapies qui sont conçus pour augmenter la production d' IFN-γ ont un impact sur les réponses de l' IFN-γ in vivo et ont des effets biologiques productifs tels que l' augmentation de la clairance bactérienne ou l' amélioration de la survie de la souris deinfection. Décrite ici est un protocole de base pour la façon de mener les infections intra - péritonéales de souris C57BL / 6J avec la souche EGD de L. monocytogenes et de mesurer la production d' IFN-γ par les cellules NK, les cellules NKT et les lymphocytes adaptatifs par cytométrie en flux. En outre, les procédures sont décrites: (1) croître et de préparer les bactéries pour l'inoculation (2), mesurer la charge bactérienne dans la rate et le foie, et (3) mesure la survie des animaux de points d'extrémité. Des données représentatives sont également fournis pour illustrer la façon dont ce modèle d'infection peut être utilisée pour tester l'effet d'agents spécifiques sur les réponses d' IFN-y pour L. monocytogenes et la survie des souris de cette infection.

Introduction

IFN-γ est une cytokine qui est essentielle pour la médiation de l' immunité contre les agents pathogènes intracellulaires et pour contrôler la croissance des tumeurs ^5. L'importance de cette cytokine dans la résistance bactérienne est évidente dans l'observation que les humains avec des mutations dans la voie de signalisation de l' IFN-γ sont très sensibles à l' infection par des mycobactéries et salmonella ^6. De même, des souris déficientes en soit l' IFN-γ ou les défauts d'exposition du récepteur de l' IFN-γ dans la résistance aux mycobactéries ^7-9 et d' autres agents pathogènes intracellulaires ,....