Reprodutível Arterial Desnudamento Lesão por aorta abdominal infrarrenal fixação num modelo murino

Summary

A compreensão dos mecanismos celulares e moleculares da re-endotelização após lesão desnudamento arterial é de suma importância na prevenção de trombose e restenose das artérias. Aqui nós descrevemos um protocolo de lesão desnudamento arterial reprodutível da aorta abdominal infra-renal. O procedimento foi desenvolvido para investigar os mecanismos subjacentes que regulam a regeneração endotelial usando modelos do rato.

Abstract

intervenções vasculares percutâneos uniformemente resultar em lesões denudação arteriais que, posteriormente, levar a trombose e restenose. Estas complicações podem ser atribuídos a deficiências no re-endotelização dentro das margens da ferida. No entanto, os mecanismos celulares e moleculares da re-endotelização continuam a ser definida. Enquanto vários modelos animais para estudar a re-endotelização após desnudação arterial estão disponíveis, alguns são realizadas no rato por causa das limitações cirúrgicos. Isso prejudica a oportunidade de explorar linhas de camundongos transgênicos e investigar a contribuição de genes específicos para o processo de re-endotelização. Aqui, apresentamos um protocolo passo-a-passo para a criação de um modelo murino altamente reprodutível de lesão desnudamento arterial na aorta abdominal infra usando clampeamento vascular externo. coloração imunocitoquímico de aortas feridos para fibrinogênio e β-catenina demonstrar a exposição de uma uma superfície pró-trombóticod fronteira do endotélio intacto, respectivamente. O método aqui apresentado tem as vantagens de velocidade, excelente taxa de sobrevivência global, e facilidade técnica relativa, a criação de uma ferramenta exclusivamente prático para a imposição de lesão desnudação arterial em modelos de ratinho transgénicos. Usando este método, os investigadores podem elucidar os mecanismos de re-endotelização em condições normais ou patológicas.

Introduction

Trombose e restenose são graves complicações precoces e tardias em pacientes que se submetem a intervenções vasculares percutâneos, como a angioplastia com balão endovascular e implante de stent ^1,2. Várias estratégias têm sido empregadas para tratar estas complicações, terapia antiplaquetária dupla particular e stents farmacológicos. No entanto, pouca atenção tem sido colocada sobre a causa subjacente de trombose e restenose, ou seja, a perda de cobertura de célula endotelial (desnudação). lesão desnudamento é uma consequência inevitável de procedimentos de intervenção devido a trauma mecânico à parede do vaso sanguíneo. Este trauma mecânico pode resultar em danos e a remoção da camada protectora do endotélio e a exposição da membrana basal e do músculo liso vascular ao sangue que circula ^3. A perda de células endoteliais nessas áreas cria um ambiente pró-trombóticos e pró-inflamatório que não apenas promove a aderência de plaquetas e trombose subsequente, mas umlso estimula a migração e proliferação de células musculares lisas vasculares, resultando no espessamento da neointima e reestenose ^4. Estas complicações e suas terapias associadas, levar a morbidade significativa, doença isquêmica mais notavelmente recorrentes e eventos hemorrágicos que impactam a saúde humana.

Re-endotelização da lesão desnudada das margens da ferida é de suma importância na prevenção de trombose e reestenose ^5. Os resultados da autópsia e modelos animais têm efetivamente demonstrado taxas reduzidas de trombose com a cobertura de stent struts ^6,7. Os stents farmacológicos, concebido para diminuir as taxas de reestenose pela inibição da proliferação do músculo liso e hiperplasia neointimal, resultar em deficiências significativas no arterial re-endotelização e aumento das taxas de final de trombose ^3. Infelizmente, a compreensão dos mecanismos de re-endotelização tem sido um processo lento, em grande parte limitada pela falta de APmodelos animais propriate ^8.

Vários modelos animais para compreender os papéis das células endoteliais e células de músculo liso vascular após lesão arterial, foram criados ^7,9,10. O modelo de lesão por balão da artéria carótida de rato é o melhor caracterizado e foi utilizado para estudar os efeitos da lesão desnudação no nível bruto, celular e molecular ^11. No entanto, um modelo murino altamente reprodutível de lesão desnudamento arterial com taxas de sobrevivência excelentes está faltando e muito necessário para tirar proveito de múltiplas linhagens transgênicas disponíveis para melhor elucidar a regeneração vascular em várias configurações.

Este manuscrito apresenta um modelo murino de lesão desnudação arterial que é reprodutível e de simples execução. A abordagem mostrou morbidade e mortalidade mínima em várias linhagens transgênicas. Devido ao seu largo número de linhas de ratinhos geneticamente modificados, este modelo pode ser usado paraelucidar os mecanismos moleculares subjacentes à re-endotelização após a lesão desnudamento.

Protocol

NOTA: Este protocolo foi aprovado pelo Comitê de Pesquisa em Animais da Universidade da Califórnia em Los Angeles. 1. Pré-operatório Preparação e Anestesia Certifique-se de observar uma técnica asséptica durante todo o procedimento. Esterilizar todos os suprimentos cirúrgicos, utilizando um autoclave a vapor. Ligue roedor plataforma cirúrgica aquecida antes da indução da anestesia de modo que ele pode aquecer até à temperatura adequada (37 ° C) e coloca-se sob micros…

Representative Results

Oitenta e cinco ratos foram submetidos a técnica cirúrgica de sobrevivência descrita neste relatório para o pinçamento da aorta abdominal infra-renal. A taxa de sobrevida global foi de 85,9%. As complicações operatórias incluídos hemorragia intestinal e grande navio de perfuração, resultando em 5,9% e 3,5% de mortalidade, respectivamente (Tabela 1). Após a recuperação da anestesia, os ratos andar normalmente e não mostram sinais de lesão isquêmica para o…

Discussion

Lesão desnudamento arterial devido a intervenções percutâneas, como a angioplastia com balão e implante de stent vascular, resultar em trombose vascular precoce e tardia e reestenose e contribui para eventos isquêmicos recorrentes ^3,12. Curiosamente, pinçamento vascular cirúrgica também foi implicado como causa de desnudamento arterial, expandindo o escopo do problema para pacientes submetidos a qualquer procedimento vascular, seja percutânea ou aberta ^13. Enquanto prejudicada re-endoteli…

Materials

Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope	Zeiss	495037-9904-000
Rodent Heated Surgical Platform	Protech International	RES4000	Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed
Isoflurane	Henry Schein	50033	4% Induction; 2.5% Maintenance
Isoflurane Vaporizer	Summit Medical Equipment	470062
Stryker T/Pump Warm Water Recirculator	Kent Scientific	TP-700
Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment	Akorn Animal Health	17478-162-35
Carprieve (Carprofen)	Norbrook Laboratories	NDC 55529-131-01
Oster™ A5 Professional Animal Clipper	M.Schneider & Sons Inc.	78005010	Use with animal clipper size 40
Adjustable Wire Retractor	Fine Science Tools	17004-05
Schwartz Micro Serrefines – Sharp Bend	Fine Science Tools	18052-03
Surgical Instruments	Fine Science Tools		sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat
0.5% Marcaine	Hospira	0409-1610-50
5-0 Suture, Vicryl	Fisher Scientific	NC0189890	tapered needle
Vetbond	Fisher Scientific	NC0304169
Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish	Corning	351008
Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit	Dow Corning	3097358-1004
Dissecting pins	Fisher Scientific	NC9681411