ADSC-sheet Transplantation Stricture nach Erweiterte Speiseröhren Endoskopische Submukosa Dissektion zu verhindern

Summary

Diese Studie berichtet über eine erfolgreiche Methode der endoskopischen Fettgewebe abgeleiteten Stromazellen (ADSC) -Blatt Transplantation für Ösophagusstriktur Prävention nach einer ausgedehnten endoskopischer Submukosadissektion (ESD) in einem Schweinemodell.

Abstract

In den vergangenen Jahren hat sich die Zell-Blatt-Konstrukt ein breites Interesse in der regenerativen Medizin vorangetrieben, vor allem für die rekonstruktive Chirurgie. Die Entwicklung von diversifizierten Technologien Fettgewebe abgeleiteten Stromazellen (ADSCs) mit verschiedenen Biomaterialien hat für den Bau von zahlreichen Arten von Tissue-Engineering-Ersatzstoffe, wie Knochen, Knorpel und Fettgewebe aus Nager, Schweine oder menschliches ADSCs geführt kombiniert. Erweiterte Speiseröhren endoskopische Submukosadissektion (ESD) ist verantwortlich für Ösophagusstriktur Bildung. Stricture Prävention bleibt eine Herausforderung, ohne effiziente Behandlungen zur Verfügung. Frühere Studien berichteten über die Wirksamkeit der Schleimhautzellen-Blatt-Transplantation in einem Hundemodell und beim Menschen. ADSCs zugewiesen worden sind entzündungshemmende Eigenschaften, lokale immunmodulierende Effekte, Neovaskularisation Induktion und Differenzierung Fähigkeiten in mesenchymalen und nicht-mesenchymale Linien. Diese ursprüngliche Studie beschreibt die endoskopische transplantation eines ADSC Tissue-Engineering-Konstrukt Ösophagusstriktur in einem Schweinemodell zu verhindern. Das Konstrukt wurde ADSC aufeinander auf einen Papierträger geschichtet Membran aus zwei allogenen ADSC Blätter zusammen. Die ADSCs wurden mit dem PKH67 fluorophormarkiertes zu testbasierte konfokale Laser Endomikroskopie (PCLE) Überwachung ermöglichen. Am Tag der Transplantation, eine 5-cm und Hemi-Umfangs ESD bekannt Ösophagusstriktur zu induzieren, wurde durchgeführt. Die Tiere wurden sofort endoskopisch mit 4 ADSC Konstrukte transplantiert. Die vollständige Haftung der ADSC-Konstrukte wurde nach 10 min der sanften Anwendung erhalten. Die Tiere wurden am Tag getötet 28. Alle Tiere erfolgreich transplantiert wurden. Die Transplantation wurde am Tag 3 mit einem positiven PCLE Auswertung bestätigt. Im Vergleich zu transplantierten Tieren entwickelte Kontrolltieren schwere Strikturen, mit großen Entwicklungs fibrotischen Gewebes, häufigere Verdauungsleiden und verminderte Gewichtszunahme. In unserem Modell die Transplantation von allogenic ADSCs, organisiert in Doppelzellschichten, nach längerer ESD war erfolgreich und stark mit einer niedrigeren Ösophagusstriktur Rate verbunden.

Introduction

Das Management von oberflächlichen Tumoren der Speiseröhre hat sich mit der Entwicklung neuer endoskopischer Techniken verändert. Heutzutage ist die endoskopische Resektion der First-Line-Behandlung. Tatsächlich ist es mit einer geringeren Morbidität und Mortalität als eine Operation mit gleicher onkologischen Ergebnisse ^{1, 2, 3} verbunden. EMR (EMR) und endoskopische Submukosa-Resektion (ESD) sind die am häufigsten verwendeten Techniken. Im Falle eines verlängerten oberflächlicher Tumor ist ESD bevorzugt. Im Vergleich zu EMR ermöglicht ESD en bloc Resektion, unabhängig von der Größe der Läsion und ^{4 formen, 5, 6.} Die Haupt verzögert Komplikation der ESD ist Ösophagusstriktur Bildung, die zwischen einer und zwei Wochen nach der Resektion der Regel auftritt. Jüngste Studien veröffentlicht haben, dass Strikturenbildung gezeigt korreliert dieGröße der Resektion. Die japanische Endoskopische Society empfiehlt die Vermeidung ESD Größen von mehr als ¾ der Speiseröhre Umfang, weil sie mit einer Stenose Entwicklung in mehr als 90% der Fälle und sind für schwere Fütterung Schwierigkeiten und wesentliche Verschlechterung der Lebensqualität verantwortlich verbunden sind.

Die Verhinderung von Ösophagusstriktur bleibt eine Herausforderung. Mechanismen in Strikturenbildung beteiligt sind nur teilweise bekannt. Strikturen Formationen scheint aus der Vereinigung von zwei unterschiedlichen Mechanismen zu führen: ⁷ (1) pro-inflammatorischen Zellrekrutierung und (2) eine übermäßige Fibrose Entwicklung. Mehrere präventive Behandlungen sind vorgeschlagen worden. Allerdings waren die Ergebnisse unbefriedigend, mit wenig Nutzen und schwere Nebenwirkungen ^{8, 9.} Vor kurzem wurde eine japanische Team, Ohki et al. Vorgeschlagen, eine einlagige Zellschicht von autologem Mundschleimhautzellen in die Esoph zu verpflanzenageal Narbe. Transplantation wurde durchgeführt , unmittelbar nach der ESD ^{10, 11.} Sie zeigten die Wirksamkeit dieses innovativen Ansatzes, zunächst in einem Hunde-Modell und dann bei Patienten.

Fettgewebe abgeleiteten Stromazellen (ADSCs) sind in der regenerativen Medizin vielversprechend. Ihre Anwendung in verschiedenen Bereichen hat interessante Ergebnisse gezeigt, insbesondere in den Wundheilungsprozess. ADSC Therapie bietet mehrere Vorteile, da die Zellen leicht isoliert sind und mit entzündungshemmenden Eigenschaften, lokale immunmodulierende Effekte, Neovaskularisation Induktion verbunden sind , und die Differenzierung Fähigkeiten in mesenchymalen und nicht-mesenchymale Linien ^{12, 13, 14.}

In einer früheren Studie zeigte unser Team die Wirksamkeit der Doppel ADSC-Blatt endoskopische Transplantation für Ösophagusstriktur zurückention nach längerer ESD in einem Schweinemodell ^15. In diesem Artikel Technik Berichte von ADSC-Blechkonstruktion und endoskopischer Transplantation vorgestellt.

Protocol

Alle Tiere wurden nach dem Animal Research Ethics Committee (Richtlinien des Französisch Ministerium für Landwirtschaft) behandelt. Das Protokoll erhielt die Zustimmung der lokalen Ethikkommission genehmigten Tier Experimente an der Universität Paris Descartes (Registernummer MESR 2035,02; Medizinische Fakultät Paris Descartes, Paris, Frankreich). 1. ADSC Kultur und Labeling Erhalten bestätigte ADSCs von einer privaten Institution. Kultur allogenen ADSCs bei 37 ° C und 5% CO 2 mit alp…

Representative Results

Die Kultur der ADSCs und das Verfahren die ADSC Blatt zu erhalten , ist in Abbildung 1 dargestellt. Figur 2 zeigt den Aufbau des Transplantats, bestehend aus zwei ADSC Blätter geschichtet übereinander auf ihrer Papierträgermembran. ADSCs wurden zuvor mit dem PKH67 fluorophormarkiertes in vivo Transplantatüberwachung mit PCLE zu ermöglichen. Abbildung 3 zeigt die verschiedenen Schritte des erweiterten Speiseröhren endoskopi…

Discussion

In diesem Schweinemodell war die ADSC-Blatt – Transplantation technisch erfolgreich, und die in vivo PCLE Auswertung für Zelle Verpflanzung Überwachung erlaubt. Klinische, endoskopische, radiologische und histologische Auswertungen zeigten die Wirksamkeit der endoskopischen ADSC Blatt bei Ösophagusstriktur Prävention nach längerer ESD.

Die endoskopische Transplantation eines ADSC Glycerinlösung ein Indigokarmin Farbstoffschicht enthält, ist ein innovativer Ansatz in der regen…

Materials

Transparent endoscopic cap Q180 compatible	Olympus Optical Co
GIF-Q180 gastroscope	Olympus Optical Co
Videoscope System Exera II	Olympus Optical Co
Injection needle 18 G	Olympus Optical Co
Electrosurgery unit ERBE ICC 350	ERBE Technology
Indigo carmin 1%	Life
Endoscopic hybrid knife	Life
Minisonde Z pCLE green probe	Mauna Kea Technology		You must learn how tu use the probe. The manipulation could be difficult
Fetal bovine serum	Sigma Aldrich	12105C
Trypsin	Sigma Aldrich	T146
Alpha minimum essential medium	Thermo Fisher	22561-021
Phosphate-Buffered Salines	Thermo Fisher	10010-023
PKH67 dye kit	Sigma Aldrich	Mini67-KT
12-well temperature responsive cell culture dish	Upcell Thermo Scientific	174900	Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 minutes before seeding cells
Esomeprazole 40 mg	Biogaran
Moprhine sulfate 50 mg/ mL	Lavoisier
Amoxicilline 1 g	Biogaran
Ketamine 250 mg/5 mL	Panpharma
Propofol 10 mg/ mL	Fresenius
Hydrophobic paper	Carrefour