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Article de méthode

Chirurgie Shunt, droite Cathétérisme cardiaque et vasculaire Morphometry dans un modèle de rat pour Flow-induite Hypertension artérielle pulmonaire

16.6K vues

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DOI :

10.3791/55065

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11 février 2017

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Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit une procédure chirurgicale visant à créer un modèle d’hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) induite par le flux chez le rat et les procédures permettant d’analyser les principaux paramètres hémodynamiques et histologiques dans ce modèle.

Résumé

Dans ce protocole, l’HTAP est induite par l’association d’une injection de monocrotaline (TCM) de 60 mg/kg avec une augmentation du débit sanguin pulmonaire à travers un shunt aorto-cave (TCM+Flow). Le shunt est créé en insérant une aiguille de 18-G de l’aorte abdominale dans la veine cave adjacente. Il a été démontré que l’augmentation du débit pulmonaire est un déclencheur essentiel d’une forme sévère d’HTAP avec des phases distinctes de progression de la maladie, caractérisée par une hypertrophie médiale précoce suivie de lésions néo-intimales et de l’occlusion progressive des petits vaisseaux pulmonaires. Pour mesurer l’hémodynamique cardiaque et pulmonaire droite dans ce modèle, le cathétérisme cardiaque droit est effectué en insérant une canule rigide contenant un cathéter flexible à bout sphérique via la veine jugulaire droite dans le ventricule droit. Le cathéter est ensuite avancé dans les artères pulmonaires principales et les artères pulmonaires plus distales. L’histopathologie du système vasculaire pulmonaire est évaluée qualitativement, en notant les vaisseaux pré- et intra-acineux sur le degré de musculation et la présence d’un néointima, et quantitativement, en mesurant l’épaisseur de la paroi, les rapports paroi-lumière et le score d’occlusion.

Introduction

Le but de cette méthode est de créer un modèle reproductible sévère, l'hypertension artérielle pulmonaire induite par l'écoulement chez le rat et de mesurer son principe hémodynamique et le point final histopathologiques.

L'hypertension artérielle pulmonaire (HTAP) est un syndrome clinique qui englobe une augmentation progressive de la résistance vasculaire pulmonaire conduisant à une insuffisance ventriculaire droite et la mort. Dans le spectre de la maladie superordinate des maladies hypertensives pulmonaires (PH), les HAP est la forme la plus grave et qui reste sans traitement 1. L'artériopathie ....

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Protocole

Les procédures impliquant des sujets animaux ont été approuvés par le Comité central néerlandais pour l'expérimentation animale et le soin des animaux Comité à l'Université Medical Center Groningen (NL). Les deux rats Wistar Lewis et ayant un grammage compris entre 180 et 300 g ont été utilisés.

1. Logement et Acclimatation

  1. Après l'arrivée à l'animalerie centrale, les rats des maisons en groupes de 5 par cage. Au cours d'une période d'acclimatation de 7 jours, accoutumer les rats à la manipulation humaine, mais ne pas effectuer toutes les procédures expérimentales.

2. Pré....

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Résultats

Les résultats représentatifs sont présentés dans la figure 4. Les résultats présentés montrent des caractéristiques de MCT + FLOW chez des rats Lewis dans les groupes suivants: contrôle (n = 3), MF8 (n = 5), MF14 (n = 5), MF28 (n = 5), et MF-FVR ( n = 10). Des analyses statistiques ont été réalisées à l'aide d'une ANOVA avec correction de Bonferroni.

60 mg / kg de MCT et l'augmentation pulmonaire c.......

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Discussion

Cette méthode décrit la procédure chirurgicale d'un shunt aorto-caval chez les rats pré-traités avec MCT pour créer HTAP induite par le flux et les techniques pour évaluer l'hémodynamique principe et la fin histopathologiques qui caractérisent les HAP et ce modèle.

Étapes critiques au sein du Protocole et de dépannage

La chirurgie et post-chirurgie. Au cours de la chirurgie de shunt aorto-caval, l'étape la plus critique est la dissection de l'aorte e.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Remerciements

Cette étude a été soutenue par l’Initiative néerlandaise de recherche cardiovasculaire, la Fondation néerlandaise du cœur, la Fédération néerlandaise des centres médicaux universitaires, l’Organisation néerlandaise pour la recherche et le développement en santé et l’Académie royale des sciences des Pays-Bas (CVON nr. 2012-08, PHAEDRA, The Sebald fund, Stichting Hartekind).

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Shunt Surgery
Gants
Duratears Pommade oculaireAlcon10380
Chloride-Hexidine
Cotons-tiges
Colle à tissu histoacryliqueB. Braun Medical1050052
Silkam 5-0 sutures noires non résorbablesB. Braun MedicalF1134027
Safil 4-0 sutures violettes résorbablesB. Braun Medical
18 G aiguilleLuerNN1838R BDpointe pliée à 45 degrés vers l’extérieur
Gaules 10 x 10 cmPaul Hartmann407825
Temgesic BuprénorphineRB Pharmaceuticals5429sous-cutanée injection
Chlorure de sodium 0,9 %
Masque de ventilation Rat
Scalple lame
Biemer pince 18 mm, ouverture 5 mm  ;AgnTho64-562
Tapis
Kocher Clamp
Machine à raser
MicroscopeLeica
Right Heart Cathetérization
Gants chirurgicaux stériles
Pommade pour les yeuxDuratears
Chlorure-Hexidine
Cotons-tiges
Gazes 10 x 10 cmPaul Hartmann407825
Silkam 5-0 sutures noires non résorbablesB. Braun MedicalF1134027
Needle 20 GLuerTip légèrement plié vers l’intérieur
Canule 20 GLuerpour introduire le cathéter, pointe préformée en 20 degrés
Cathéter silastique 15 cm de long0,5 mm boule 2 mm de la pointe
Transducteur de pressionAiltech
Moniteur de chevet Cardiocap/5Datex-Ohmeda
raser
10 mL Seringue
Chlorure de sodium 0,9 %pour le rinçage
Morphologie vasculaire
50 mL Seringue
 % Formaldéhyde
18 G Canule avec tube
Kit de coloration VerhoefSigma-AldrichHT254http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en®ion=US
Scanner de lames numériqueHamamatsuC9600
ImageJ
Elastic (coloration du tissu conjonctif)  ;Abcamab150667http://www.abcam.com/elastic-connective-tissue-stain-ab150667.html
http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(site web).pdf
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Références

  1. Hoeper, M. M., Bogaard, H. J., Condliffe, R., et al. Definitions and diagnosis of pulmonary hypertension. J Am Coll Cardiol. 62, D42-D50 (2013).
  2. Stacher, E., Graham, B. B., Hunt, J. M., et al. Modern age pathology of pulmonary arterial hypertension. Am J Respir Crit ....

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Réimpressions et autorisations

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