Summary

Murine Vollhauttransplantation

Published: January 02, 2017
doi:

Summary

Murine Vollhauttransplantation ist ein gut etabliertes Modell Ablehnung in einer alloimmune Einstellung zu studieren. Hier bieten wir ein Tutorial von jedem Schritt beteiligt bei der Durchführung einer Balb / c -> C57BL / 6 Vollhauttransplantation.

Abstract

Murine Vollhauttransplantation ist ein gut etabliertes in vivo – Modell alloimmune Antwort und Transplantatabstoßung zu studieren. Trotz seiner begrenzten Anwendung auf den Menschen, Hauttransplantation bei Mäusen wurde für Transplantationsforschung weit verbreitet eingesetzt. Das Verfahren ist einfach zu erlernen und durchzuführen, und es erfordert keine empfindliche mikrochirurgischer Techniken noch eine umfassende Ausbildung. Darüber hinaus tritt Ablehnung Transplantat in diesem Modell in einer sehr reproduzierbaren immunologischen Reaktion und leicht durch direkte Inspektion und Palpation überwacht wird. Darüber hinaus können sekundäre Hauttransplantation mit Spender abgestimmt oder von Drittanbietern Hauttransplantationen auf komplexere Transplantationsmodelle als Alternative und unkomplizierte Methode durchgeführt werden spenderspezifischen Toleranz zu beurteilen. Die Komplikationen sind niedrig und sind in der Regel auf die Anästhesie Überdosierung oder Atemnot nach dem Verfahren beschränkt. Transplantatversagen, auf der anderen Seite, tritt häufig als Folge der schlechten Vorbereitung der grachtern, falsche Positionierung im Transplantat-Bett, oder unangemessene Platzierung der Bandage. In diesem Artikel präsentieren wir ein Protokoll für Vollhauttransplantation bei Mäusen und beschreiben die wichtigen Schritte, die für eine erfolgreiche Prozedur.

Introduction

Organtransplantation ist die Behandlung der Wahl für Patienten im Endstadium einer Organversagen, und die Ergebnisse haben sich verbessert bemerkenswert mit den Fortschritten bei chirurgischen Eingriffen und Immunsuppression Protokolle. Allerdings ist die langfristige Immunsuppression mit erheblichen Nebenwirkungen verbunden sind, und die Entwicklung neuer Strategien, die Toleranz bleibt das Ziel der modernen Transplantationsforschung fördern.

Zahlreiche Tiermodelle wurden für die Grundlagenforschung in der Transplantationsmedizin entwickelt, die Mechanismen der Abstoßungsreaktionen zu untersuchen und zur Verhinderung einer Transplantatabstoßung Immunsuppression Ansätze zu testen und 1-3 langfristige Toleranz zu fördern. Mausmodelle sind die tragende Säule der immunologischen Forschung aufgrund der exklusiven, großen Verfügbarkeit von diagnostischen und therapeutischen Antikörpern und gut definierten Inzucht und transgenen Stämme werden. Hauttransplantation ist ein einfaches Verfahren, das keine spezielle mikrochirurgische Fähigkeiten erfordert und kannleicht postoperativ überwacht. Zusammengenommen Maus Hauttransplantation hat in der alloimmune Antwort beteiligt ein hervorragendes Instrument zu studieren viele Aspekte, einschließlich der Antigenabgabe, Zellhandel und Gewebezerstörung bei Transplantatabstoßung 4,5.

Hier zeigen wir den Schritt-für-Schritt-Verfahren für Vollhauttransplantation das Maus-Modell, und wir beschreiben die wichtigen Schritte, die für eine erfolgreiche Verpflanzung der transplantierten Haut.

Protocol

Alle Verfahren wurden in Übereinstimmung mit dem Leitfaden für die Pflege und Verwendung von Labortieren des National Institute of Health (NIH) durchgeführt und wurden von der Johns Hopkins University Animal Care und Use Committee (JHUACUC) zugelassen. Die spezifischen Verfahren wurden im Rahmen der genehmigten ACUC Protokolle MO13M292 und MO13M370 ausgeführt. 1. Spenderhaut-Ernte Anesthetize die Spendermaus mit Isofluran (Induktionsverdampfer bei 4%, Wartung mit einem 1 – 2% …

Representative Results

Die Platzierung der Verband auf der Empfängermaus ist ein wichtiger Schritt des Verfahrens. Die Hauttransplantation ist auf dem Empfängerstamm positioniert, zwischen der Schulter, Hüfte und Wirbelsäule (Abbildung 1). Die Binde wird mit gefalteten Gaze und die Kombination von zwei Kunststoffklebeverbänden hergestellt. Die Empfängermaus wird mit dem Transplantat nach unten über die Gaze auf die Mitte der Binde angeordnet. Verwendung von zwei gekrümmten Mikropinzett…

Discussion

Seit seiner Einführung durch Medawar, zuerst in Studien am Menschen und dann bei Kaninchen und Mäusen hat Hauttransplantation ein unschätzbares Modell für die Untersuchung von allogenen Immunantworten 6,7 gewesen. In diesem Manuskript präsentieren wir ein Modell von großen, nicht-gefäß, Vollhauttransplantation die oberen und unteren Rückenhaut verwendet wird. Verschiedene alternative Methoden, einschließlich der Schwanzhaut oder Ohrhaut der Maus als Transplantatgewebe Quelle, wurde berichtet ,

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Diese Arbeit wurde von NIH Zuschusses R01AI077610 finanziert.

Materials

Straight micro forceps  Sigma F4017
Curved micro forceps  Aesculap BD333R
Curved Stevens tenotomy scissors  Aesculap BC905R
Mayo dissecting  scissors Sigma S3146
Micro needle holder Aesculap BM563R
Sterile gauze Covidien 441218
6-0 Nylon suture  MWI 31849
Plastic Strips Band-Aid Johnson & Johnson Obtained from pharmacy
10 cm Petri dish Fisherbrand FB0875712
PBS Quality Biological 119069131
Buprenorphine DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy
Enrofloxacin Bayer Health Care 186599

References

  1. Furtmuller, G. J., et al. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J Vis Exp. , (2016).
  2. Oh, B., et al. A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice. J Vis Exp. , (2016).
  3. Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , e50753 (2014).
  4. Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts. J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).
  5. Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. Nat Med. 17, 744-749 (2011).
  6. Medawar, P. B. The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council. J Anat. 78, 176-199 (1944).
  7. Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).
  8. Garrod, K. R., Cahalan, M. D. Murine skin transplantation. J Vis Exp. , (2008).
  9. Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice. J Vis Exp. , e51724 (2014).
  10. Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties. J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).
  11. Chen, H. D., Silvers, W. K. Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats. J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).
  12. Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).
  13. Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. A surgical technique for experimental free skin grafting in mice. Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).
  14. McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. Skin allograft rejection. Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).
  15. Lee, C. F., et al. Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism. Cell reports. 13, 760-770 (2015).
  16. Pollizzi, K. N., Powell, J. D. Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses. Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).
  17. Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function. Science. 342, 1242454 (2013).
check_url/fr/55105?article_type=t

Play Video

Citer Cet Article
Cheng, C., Lee, C., Fryer, M., Furtmüller, G. J., Oh, B., Powell, J. D., Brandacher, G. Murine Full-thickness Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (119), e55105, doi:10.3791/55105 (2017).

View Video