Microscopie intravitale et thrombus induction dans le lobe de l'oreille d'une souris sans poils

Summary

Le modèle de l' oreille de la souris sans poils ^SKH1-Hr permet la microscopie à fluorescence intravitale de la microcirculation et phototoxique induction de thrombus sans préparation chirurgicale préalable dans le lit microvasculaire examiné. Par conséquent, l'oreille de la souris sans poil est un excellent modèle in vivo pour étudier les interactions complexes pendant la formation de thrombus microvasculaire, l' évolution de thrombus et thrombolyse.

Abstract

complications thrombotiques des maladies vasculaires sont une des principales causes de morbidité et de mortalité dans les pays industrialisés. En raison des interactions complexes entre les composants sanguins cellulaires et non cellulaires pendant la formation de thrombus, des études fiables de la physiologie et physiopathologie de la thrombose ne peut être effectuée in vivo. Par conséquent, cet article présente un modèle de l' oreille chez les souris sans poil et se concentre sur l'analyse in vivo de la microcirculation, la formation de thrombus et de l' évolution de thrombus. En utilisant la microscopie à fluorescence intravitale et l'application par voie intraveineuse (iv) des colorants fluorescents respectifs, une analyse répétitive de la microcirculation dans l'oreillette peut facilement être réalisé sans la nécessité d'une préparation chirurgicale. En outre, ce modèle peut être adapté pour des études in vivo de différentes questions, y compris la cicatrisation des plaies, des lésions de reperfusion, ou angiogenèse. En résumé, l'oreille des souris sans poils est un modèle idéal pour la viv eno Etude de la microcirculation cutanée dans des conditions physiologiques ou physiopathologiques et pour l'évaluation de sa réaction à différents traitements systémiques ou topiques.

Introduction

Le but de l'article est de décrire la technique de microscopie intravitale appliquée à l'auricule de la souris sans poils pour l'observation directe et l'analyse de la microcirculation, la formation de thrombus et de l'évolution de thrombus. Avec un taux d'incidence de 1 sur 1000, la thrombose veineuse est encore une cause fréquente de morbidité. Bien que le diagnostic, les stratégies de prévention et les thérapies ont été développées ces dernières années, un tiers de la thrombose veineuse se manifeste par une embolie pulmonaire ^1. La thrombose artérielle joue un rôle essentiel dans les maladies cardio-vasculaires, qui ....

Protocol

Toutes les expériences in vivo (7221.3-1-006 / 15) ont été menées conformément à la législation allemande sur la protection des animaux et le NIH Guide pour les soins et l' utilisation des animaux de laboratoire (Institut des ressources animales de laboratoire, Conseil national de recherches).

1. Tenue générale des animaux

1. Effectuez les expériences avec des souris mâles ^hr SKH1-HR de 4 à 6 semaines. Utiliser des animaux d'un poids compris entre 20 et 25 g.
2. Gardez les animaux dans un établissement exempt d' agents pathogènes et dans des conditions normalisées de 24 à 26 ° C et environ 60....

Results

Effets du traitement cannabinoïdes sur thrombogenèse

Lors de l' injection de 0,05 ml de FITC-dextran, l' induction phototoxique de thrombus conduit à une lésion endothéliale et la formation d'un bouchon de plaquettes pariétal (figures 2 et 3). Dans la présente étude, l' induction d' un thrombus après l'injection ip de cannabinoïdes (5 mg / kg de poids corporel) ou le véhicule a donné lieu à une o.......

Discussion

Il y a plusieurs étapes critiques pour l'induction de thrombus réussie dans le lobe de l' oreille de souris ^SKH1-Hr. Pour le dépannage, les étapes respectives du protocole sont indiqués entre parenthèses.

conditions d'examen sont idéales chez les jeunes animaux à l'âge de 4 - 6 semaines et avec une faible kératinisation de l'épiderme. Chez les animaux plus âgés, la qualité de la visualisation des vaisseaux est pire et moins comparables en raison de la distance .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Les souris SKH-1/hr	Charles River	477	peuvent être achetés auprès d’autres vendeurs  ;
alimentaire de laboratoire standard	Spezialdiaeten	V1594-0  ;	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
opération stéréomicroscope	Leica  ;	M651/M655 ;	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
microscope intravital	Zeiss	Axiotech Vario 100  ;	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
objectif (20X/0,95)  ;	Zeiss	20x/0,50 W ; Plan-NEOFLUAR  ;	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
objectif (63X/0,95)	Zeiss	63x/0,95 W ; ACHROPLAN  ;	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
caméra CCD noir et blanc  ;	Pieper  ;	FK 6990 IQ-S  ;	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
Graveur DVD	Panasonic	DMR-EX99V  ;	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
chlorure de sodium	Braun	5/12612055/1011	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
Kétamine 10 %	Bela pharm	F3901-6	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
Xylazine 2 %	Bayer	6293841.00.00	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
FITC-dextran 5 %	Sigma  ;	46945-100MG-F	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
dexapanthénol 5 % pommade oculaire	Bayer	6029009.00.00	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
formaldéhyde 4 %	Sigma	HT501128-4L	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
DMSO	Sigma	472301	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs.
lamelles de protection 5 x 5 x 1 mm	Menzel	L4339	peuvent être achetés auprès d’autres vendeurs  ;
Les bandes adhésives	Leukosilk	4683400	peuvent être achetées auprès d’autres vendeurs  ;
centrifugeuse	Beckman Coulter	CLGS 15	peut être achetée auprès d’autres fournisseurs  ;
L’analyseur d’hématologie	Sysmex	KX-21 A6980	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs.
Le tube de sang EDTA	Sarstedt	201,341	peut être acheté auprès d’autres vendeurs.
cotons-tiges	Sanyo	604-A-1	peuvent être achetés auprès d’autres vendeurs  ;
lumière infrarouge	Beurer	5/13855	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
synringe à usage unique	Braun  ;	2020-08	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
seringue à insuline	Braun	9161502	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
Les aiguilles hypodermiques jetables	Braun	465 7640	peuvent être achetées auprès d’autres vendeurs  ;
de bout en bout	Sarstedt	19 447	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
plaque chauffante	Klaus Effenberg	OP-T 185/03	peut être achetée auprès d’autres vendeurs  ;
ciseaux 14,5 cm	Aesculap	BC259R	peuvent être achetés auprès d’autres vendeurs  ;
porte-aiguille	Aesculap	BM081R	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
micropince	Aesculap	BD331R	peut être acheté auprès d’autres fournisseurs  ;
Les microciseaux	Aesculap	OC496R	peuvent être achetés auprès d’autres vendeurs  ;
scalpel 21	Dahlhausen	11.000.00.511	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
Prolene 7-0	Ethicon	XNEH7470	peut être acheté auprès d’autres vendeurs.
Prolene 6-0	Ethicon	XN8706. P33	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
électrocautérisation	Servoprax	H40140	peut être acheté auprès d’autres vendeurs  ;
Coussin			Chauffage intégré, 0,5  ; plan en cm de haut