Intramikroskopi og Trombevekten Induksjon i øreflippen av en naken Mouse

Summary

Øret modell av den hårløse SKH1-Hr ^hr mus gjør det mulig for intravital fluorescens mikroskopi av mikrosirkulasjonen og fototoksisk trombe induksjon uten forutgående kirurgisk preparering i den undersøkte mikrovaskulær sengen. Derfor, er en utmerket in vivo modell for å studere de komplekse interaksjoner i løpet av mikrovaskulær trombe-dannelse, trombe evolusjon, og trombolyse øret av den hårløse mus.

Abstract

Trombotiske komplikasjoner av vaskulære sykdommer er en ledende årsak til morbiditet og mortalitet i industrilandene. På grunn av de komplekse interaksjoner mellom cellulære og ikke- cellulære blodkomponenter i løpet av trombedannelse, kan pålitelige undersøkelser av fysiologi og patofysiologi av trombose bare bli utført in vivo. Derfor er denne artikkelen presenterer et øre modell i hårløse mus og fokuserer på in vivo-analyse av mikrosirkulasjonen, trombedannelse, og trombe evolusjon. Ved å bruke intravital fluorescens mikroskopi og intravenøs (iv) anvendelse av de respektive fluorescerende fargestoffer, kan en repeterende analyse av mikrosirkulasjonen i atriet lett utføres, uten behov for kirurgisk preparering. Videre kan denne modellen være tilpasset for in vivo studier av forskjellige problemer, inkludert sårheling, reperfusjonsskade, eller angiogenese. Oppsummert øret av hårløse mus er en ideell modell for i vivo studium av hud mikrosirkulasjon i fysiologiske eller patofysiologiske tilstander og for evaluering av dens reaksjon til forskjellige systemiske eller topiske behandlinger.

Introduction

Formålet med den foreliggende artikkelen er å beskrive teknikken for intravital mikroskopi brukes på atriet av den hårløse mus for direkte observasjon og analyse av mikrosirkulasjonen, trombedannelse, og trombe evolusjon. Med insidens av en i 1000, er venøs trombose fortsatt en vanlig årsak til morbiditet. Selv om diagnostikk, forebyggende strategier og behandlinger har blitt utviklet de siste årene, en tredjedel av venøs trombose manifesterer seg som en lungeemboli ^en. Arteriell trombose spiller en avgjørende rolle i hjerte-og karsykdommer, som er den vanligste dødsårsaken i industrilandene. Arteriell trombose, basert på ruptur av aterosklerotisk plakk er involvert i hjerteinfarkt, mesenteriske infarkter, og apopleksi. Hver operasjon utsetter subendoteliale strukturer til blodkomponenter, endrer dynamikken i blodstrømmen, og immobilizes pasienten. I endoproteseanordninger operasjon av den nedre lem, organ transplantation og klaff kirurgi trombose er hyppige årsaker til komplikasjoner. Mikrovaskulær trombose særlig ofte forårsaker irreversibel skade, på grunn av mangel på kliniske symptomer. Likeledes spiller mikrovaskulær trombose en avgjørende regel i flere sykdommer, inkludert trombotisk trombocytopenisk purpura, sepsis, disseminert intravaskulær koagulasjon, antifosfolipid syndrom, og kronisk venøs insuffisiens, blant andre.

Flere nye medikamenter for terapi og forebyggelse av trombose ble utviklet i de senere år, men antiblodplatemidler og antikoagulasjonsmidler har fortsatt bivirkninger, mangel-antagonister, og har langvarige virkninger. Disse manglene fører til problemer i medisinsk nødhjelp. Således trengs mer forskning for å avdekke de komplekse prosesser som skjer i løpet av trombose, noe som neppe kan simuleres in vitro.

Den hårløse SKH1-Hr ^hr mus ble oppdaget 1926 i en dyrehage i London.På grunn av en defekt gen på kromosom 14, mistet dyr pelsen etter postnatal dag 10. Dette gjør det godt vaskularisert forkammer tilgjengelig for intravital mikroskopi av fartøyene. Den midlere tykkelse av øret er 300 pm. Den består av to lag av dermis, som er atskilt av brusk. På den konvekse ryggsiden av brusk, 3 vaskulære bunter går inn i øreflippen. Apikale vaskulære buer og basale shunter koble de tre bunter. Venylene har diametre mellom 200 um (basal) og 10 um (apikal). Finmaskede kapillærer omgir den tomme hårsekkene ^to. Anatomi av hårløse SKH1-Hr ^hr mus gjør atriet en kraftig og kostnadseffektiv modell for trombose forskning.

Protocol

Alle in vivo eksperimenter (7221.3-1-006 / 15) ble utført i samsvar med den tyske lovgivningen om vern av dyr og NIH Guide for omsorg og bruk av forsøksdyr (Institute of Laboratory Animal Resources, National Research Council). 1. Generelt Føring av dyrene Utføre forsøkene med hann SKH1-Hr hr hunnmus, 4 til 6 uker. Bruke dyr med en vekt på mellom 20 og 25 g. Holde dyr i en patogen-fri anlegget og under standardiserte forhold av 24 til 26 ° C og …

Representative Results

Effekter av cannabinoidtest behandling på trombogenese Ved injeksjon av 0,05 ml av FITC-dekstran, fører fototoksisk trombe induksjon til en endotelial lesjon og dannelsen av en parietal blodplateplugg (figurene 2 og 3). I den foreliggende undersøkelse, trombe induksjon etter IP-injeksjon av cannabinoider (5 mg / kg) eller bærer resulterte i en trombotisk okklusjon kar i alle venyler (…

Discussion

Det er flere kritiske trinn for vellykket trombe induksjon i øreflippen av SKH1-Hr ^hr mus. For feilsøking, blir de respektive trinnene i protokollen angitt i parentes.

Eksamens forholdene er ideelle i unge dyr i en alder av 4 – 6 uker og med lav horndannelse av epidermis. I eldre dyr, er kvaliteten på visualiseringen av fartøyene dårligere og mindre sammenlignbare på grunn av den større avstand mellom hudoverflaten og de aktuelle fartøy (trinn 1.1).

<p class="jove_cont…

Materials

SKH-1/hr mice	Charles River	477	can be purchased from other vendors
standard laboratory food	ssniff Spezialdiaeten	V1594-0	can be purchased from other vendors
operation stereomicroscope	Leica	M651/M655	can be purchased from other vendors
intravital microscope	Zeiss	Axiotech Vario 100	can be purchased from other vendors
objective (20x/0.95)	Zeiss	20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR	can be purchased from other vendors
objective (63x/0.95)	Zeiss	63x/0,95 W; ACHROPLAN	can be purchased from other vendors
black and white CCD-camera	Pieper	FK 6990 IQ-S	can be purchased from other vendors
DVD-recorder	Panasonic	DMR-EX99V	can be purchased from other vendors
sodium chloride	Braun	5/12612055/1011	can be purchased from other vendors
Ketamine 10%	Bela pharm	F3901-6	can be purchased from other vendors
Xylazine 2%	Bayer	6293841.00.00	can be purchased from other vendors
FITC-dextran 5%	Sigma	46945-100MG-F	can be purchased from other vendors
dexapanthenol 5% eye ointment	Bayer	6029009.00.00	can be purchased from other vendors
formaldehyde 4%	Sigma	HT501128-4L	can be purchased from other vendors
DMSO	Sigma	472301	can be purchased from other vendors
coverslips 5 x 5 x 1 mm	Menzel	L4339	can be purchased from other vendors
plasters	Leukosilk	4683400	can be purchased from other vendors
centrifuge	Beckman Coulter	CLGS 15	can be purchased from other vendors
hematology analyzer	Sysmex	KX-21 A6980	can be purchased from other vendors
EDTA-blood tube	Sarstedt	201,341	can be purchased from other vendors
cotton swabs	Sanyo	604-A-1	can be purchased from other vendors
infrared light	Beurer	5/13855	can be purchased from other vendors
single use synringe	Braun	2020-08	can be purchased from other vendors
insulin syringe	Braun	9161502	can be purchased from other vendors
disposable hypodermic needles	Braun	465 7640	can be purchased from other vendors
end-to-end capillary	Sarstedt	19,447	can be purchased from other vendors
heating plate	Klaus Effenberg	OP-T 185/03	can be purchased from other vendors
scissors 14,5 cm	Aesculap	BC259R	can be purchased from other vendors
needle Holder	Aesculap	BM081R	can be purchased from other vendors
microforceps	Aesculap	BD331R	can be purchased from other vendors
microscissors	Aesculap	OC496R	can be purchased from other vendors
scalpel 21	Dahlhausen	11.000.00.511	can be purchased from other vendors
Prolene 7-0	Ethicon	XNEH7470	can be purchased from other vendors
Prolene 6-0	Ethicon	XN8706.P33	can be purchased from other vendors
electrocautery	Servoprax	H40140	can be purchased from other vendors
acrylglass pad			integrated heating, 0,5 cm high plane