Bir Tüysüz fare kulak memesi içinde intravital Mikroskopi ve trombüs İndüksiyon
Summary
Tüysüz SKH1-Hr hr fare kulak modeli incelendiğinde mikrovasküler yatakta önce cerrahi hazırlık yapmadan mikrosirkülasyonun ve fototoksik trombüs indüksiyon Intravital floresan mikroskopisi sağlar. Bu nedenle, tüysüz fare kulak mikrovasküler trombus oluşumu, trombüs evrimi ve tromboliz sırasında karmaşık etkileşimleri incelemek için in vivo model bir mükemmeldir.
Abstract
Vasküler hastalıkların trombotik komplikasyonlar sanayi ülkelerinde morbidite ve mortalite bir önde gelen nedenidir. Nedeniyle trombus oluşumu sırasında hücresel ve hücresel olmayan kan bileşenleri arasındaki karmaşık etkileşimler, fizyoloji ve tromboz patofizyolojisi güvenilir çalışmalar sadece, in vivo olarak gerçekleştirilebilir. Bu nedenle, bu makale tüysüz farelerde bir kulak modeli sunar ve mikrosirkülasyonun, trombüs oluşumu ve trombüs evrim in vivo analiz odaklanmaktadır. İntra vital floresan mikroskobu ve ilgili floresan boyalar intravenöz (iv) uygulama kullanılarak, kulak içinde bir mikrodolaşım tekrar analiz kolayca cerrahi hazırlamaya gerek kalmadan, gerçekleştirilebilir. Bundan başka, bu model, yara iyileşmesi, reperfüzyon hasarı, veya anjiyojenezin de dahil olmak üzere, farklı sorunları in vivo çalışmalar için uyarlanabilir. Özetle, tüysüz farelerin kulak içinde viv için ideal bir modeldirfizyolojik veya patofizyolojik koşullarda ve farklı sistemik veya topikal tedavilere yönelik reaksiyonun değerlendirilmesinde cilt mikro o çalışması.
Introduction
Bu makalenin amacı direkt gözlem ve mikrodolaşımında analizi, trombüs oluşumu ve trombüs evrim için tüysüz fare aurikula uygulanan intravital mikroskopi tekniği tanımlamaktır. 1,000'de 1 olan bir insidans oranı ile, venöz tromboz hala morbiditenin yaygın bir nedenidir. Teşhis, önleme stratejileri ve tedavileri son yıllarda geliştirilmiş olmasına rağmen, venöz tromboz üçte biri bir pulmoner emboli 1 olarak tezahür eder. Arter trombozu sanayi ülkelerinde en yaygın ölüm nedenidir kardiyovasküler hastalıklar, kritik bir rol oynar. aterosklerotik plakların kopması dayalı Arter trombozu kalp krizi, mezenterik enfarktüsü ve felcin katılır. Her ameliyat, kan bileşenlerine subendotelyal yapıları ortaya çıkarır kan akışı dinamiklerini değiştiriyor ve hastayı hareketsiz hale getirir. Alt bacak, organ t endoprostetik cerrahisinderansplantation ve flep cerrahisi tromboz komplikasyonlarının sık nedenleridir. özellikle mikrovasküler tromboz sık olarak klinik semptomların olmaması nedeniyle, geri dönüşü olmayan bir hasara neden olur. Benzer şekilde, mikrovasküler tromboz diğerleri arasında trombotik trombositopenik purpura, sepsis, yayılmış damar içi pıhtılaşma, antifosfolipid sendromu, kronik venöz yetmezliği de dahil olmak üzere çeşitli hastalıklarda önemli bir kural oynar.
terapi ve tromboz önlenmesi için çeşitli yeni ilaçlar son yıllarda geliştirilen, ancak antiplatelet ilaçlar ve antikoagülanlar hala yan etkileri, eksikliği antagonistleri var ve uzun süreli etkileri vardır. Bu eksiklikler, acil tıbbi bakım problemlerine yol açar. Bu nedenle, daha fazla araştırma hiç in vitro taklit edilebilir tromboz, esnasında cereyan eden kompleks işlemleri ortaya çıkarmak için gereklidir.
Tüysüz SKH1-Sa sa fare Londra'da bir hayvanat bahçesinde 1926 keşfedildi.Nedeniyle kromozom 14 üzerinde bir gen hatası nedeniyle, hayvan Bu gemilerin intravital mikroskopi için erişilebilir iyi kanlanan kulak kepçesi yapar doğum sonrası 10. günde sonra kürk kaybeder. kulak ortalama kalınlığı 300 um'dir. Bu kıkırdak ayrılmış dermisin iki katmandan oluşur. kıkırdak dışbükey sırt tarafında, 3 iletim demetleri kulak memesi girin. Apikal vasküler yaylar ve bazal şant üç demetleri bağlayın. venüller 200 um (bazal) ve 10 um (apikal) arasında çaplara sahiptirler. Dar örgülü kılcal boş saç 2 folikülleri çevreler. Tüysüz SKH1-Hr hr fare anatomi kulak kepçesi tromboz araştırma için güçlü ve uygun maliyetli bir model yapar.
Protocol
Representative Results
Discussion
SKH1-Sa sa farelerin kulak memesi başarılı trombüs indüksiyon için pek çok kritik adım vardır. Sorun giderme için, protokolün ilgili adımlar parantez içinde belirtilmiştir.
6 hafta ve epidermis düşük kornifikasyonu ile – Sınav koşulları 4 yaşında genç hayvanlarda idealdir. Büyük hayvanlarda, damarların görüntülenmesi kalitesi nedeniyle cilt yüzeyi ile hedef damarlar (adım 1.1) arasında daha yüksek mesafeye daha kötü ve daha karşılaştırılabil…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar hiçbir onayları var.
Materials
| SKH-1/hr mice | Charles River | 477 | can be purchased from other vendors |
| standard laboratory food | ssniff Spezialdiaeten | V1594-0 | can be purchased from other vendors |
| operation stereomicroscope | Leica | M651/M655 | can be purchased from other vendors |
| intravital microscope | Zeiss | Axiotech Vario 100 | can be purchased from other vendors |
| objective (20x/0.95) | Zeiss | 20x/0,50 W; Plan-NEOFLUAR | can be purchased from other vendors |
| objective (63x/0.95) | Zeiss | 63x/0,95 W; ACHROPLAN | can be purchased from other vendors |
| black and white CCD-camera | Pieper | FK 6990 IQ-S | can be purchased from other vendors |
| DVD-recorder | Panasonic | DMR-EX99V | can be purchased from other vendors |
| sodium chloride | Braun | 5/12612055/1011 | can be purchased from other vendors |
| Ketamine 10% | Bela pharm | F3901-6 | can be purchased from other vendors |
| Xylazine 2% | Bayer | 6293841.00.00 | can be purchased from other vendors |
| FITC-dextran 5% | Sigma | 46945-100MG-F | can be purchased from other vendors |
| dexapanthenol 5% eye ointment | Bayer | 6029009.00.00 | can be purchased from other vendors |
| formaldehyde 4% | Sigma | HT501128-4L | can be purchased from other vendors |
| DMSO | Sigma | 472301 | can be purchased from other vendors |
| coverslips 5 x 5 x 1 mm | Menzel | L4339 | can be purchased from other vendors |
| plasters | Leukosilk | 4683400 | can be purchased from other vendors |
| centrifuge | Beckman Coulter | CLGS 15 | can be purchased from other vendors |
| hematology analyzer | Sysmex | KX-21 A6980 | can be purchased from other vendors |
| EDTA-blood tube | Sarstedt | 201,341 | can be purchased from other vendors |
| cotton swabs | Sanyo | 604-A-1 | can be purchased from other vendors |
| infrared light | Beurer | 5/13855 | can be purchased from other vendors |
| single use synringe | Braun | 2020-08 | can be purchased from other vendors |
| insulin syringe | Braun | 9161502 | can be purchased from other vendors |
| disposable hypodermic needles | Braun | 465 7640 | can be purchased from other vendors |
| end-to-end capillary | Sarstedt | 19,447 | can be purchased from other vendors |
| heating plate | Klaus Effenberg | OP-T 185/03 | can be purchased from other vendors |
| scissors 14,5 cm | Aesculap | BC259R | can be purchased from other vendors |
| needle Holder | Aesculap | BM081R | can be purchased from other vendors |
| microforceps | Aesculap | BD331R | can be purchased from other vendors |
| microscissors | Aesculap | OC496R | can be purchased from other vendors |
| scalpel 21 | Dahlhausen | 11.000.00.511 | can be purchased from other vendors |
| Prolene 7-0 | Ethicon | XNEH7470 | can be purchased from other vendors |
| Prolene 6-0 | Ethicon | XN8706.P33 | can be purchased from other vendors |
| electrocautery | Servoprax | H40140 | can be purchased from other vendors |
| acrylglass pad | integrated heating, 0,5 cm high plane |
References
- White, R. H. The epidemiology of venous thromboembolism. Circulation. 107 (23), I4-I18 (2003).
- Benavides, F., Oberyszyn, T. M., VanBuskirk, A. M., Reeve, V. E., Kusewitt, D. F. The hairless mouse in skin research. J Dermatol Sci. 53 (1), 10-18 (2009).
- Grambow, E., Strüder, D., Klar, E., Hinz, B., Vollmar, B. Differential effects of endogenous, phyto and synthetic cannabinoids on thrombogenesis and platelet activity. Biofactors. , (2016).
- Eriksson, E., Boykin, J. V., Pittman, R. N. Method for in vivo microscopy of the cutaneous microcirculation of the hairless mouse ear. Microvasc Res. 19 (3), 374-379 (1980).
- Barker, J. H., et al. The hairless mouse ear for in vivo studies of skin microcirculation. Plast Reconstr Surg. 83 (6), 948-959 (1989).
- Goertz, O., et al. Evaluation of a novel polihexanide-preserved wound covering gel on dermal wound healing. Eur Surg Res. 44 (1), 23-29 (2010).
- Goertz, O., et al. Determination of microcirculatory changes and angiogenesis in a model of frostbite injury in vivo. J Surg Res. 168 (1), 155-161 (2011).
- Roesken, F., et al. A new model for quantitative in vivo microscopic analysis of thrombus formation and vascular recanalisation: the ear of the hairless (hr/hr) mouse. Thromb Haemost. 78 (5), 1408-1414 (1997).
- Sorg, H., et al. Antithrombin is as effective as heparin and hirudin to prevent formation of microvascular thrombosis in a murine model. Thromb Haemos. 96 (3), 371-377 (2006).
- Sorg, H., et al. Efficacy of antithrombin in the prevention of microvascular thrombosis during endotoxemia: an intravital microscopic study. Thromb Res. 121 (2), 241-248 (2007).
- Kovács, I. B., Sebes, A., Trombitás, K., Csalay, L., Görög, P. Proceedings: Improved technique to produce endothelial injury by laser beam without direct damage of blood cells. Thromb Diath Haemorrh. 34 (1), 331 (1975).
- Laschke, M. W., Vollmar, B., Menger, M. D. The dorsal skinfold chamber: window into the dynamic interaction of biomaterials with their surrounding host tissue. Eur Cell Mat. 20 (22), 147-167 (2011).
- Grambow, E., et al. Effect of the hydrogen sulfide donor GYY4137 on platelet activation and microvascular thrombus formation in mice. Platelets. 25 (3), 166-174 (2014).
- Fiebig, E., Ley, K., Arfors, K. E. Rapid leukocyte accumulation by spontaneous rolling and adhesion in the exteriorized rabbit mesentery. Int J Microcirc Clin Exp. 10 (2), 127-144 (1991).
- Harder, Y., et al. Gender-specific ischemic tissue tolerance in critically perfused skin. Langenbecks. Arch Surg. 395 (1), 33-40 (2010).
- Langer, S., et al. Effect of polyvinylpyrrolidone-iodine liposomal hydrogel on wound microcirculation in SKH1-hr hairless mice. Eur Surg Res. 38 (1), 27-34 (2006).
- Saniabadi, A. R., Umemura, K., Matsumoto, N., Sakuma, S., Nakashima, M. Vessel wall injury and arterial thrombosis induced by a photochemical reaction. Thromb Haemost. 73 (5), 868-872 (1995).
- Herrmann, K. S., et al. Platelet aggregation induced in the hamster cheek pouch by a photochemical process with excited fluorescein isothiocyanate-dextran. Microvasc Res. 26 (2), 238-249 (1983).
- Rumbaut, R. E., Slaff, D. W., Burns, A. R. Microvascular thrombosis models in venules and arterioles in vivo. Microcirculation. 12 (3), 259-274 (2005).
- Lee, W. M., Lee, K. T. Advanced coronary atherosclerosis in swine produced by combination of balloon-catheter injury and cholesterol feeding. Exp Mol Pathol. 23 (3), 491-499 (1975).
- Callahan, A. B., Lutz, B. R., Fulton, G. P., Degelman, J. Smooth muscle and thrombus thresholds to unipolar stimulation of small blood vessels. Angiology. 11, 35-39 (1960).
- Rosen, E. D., et al. Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi. Am J Pathol. 158 (5), 1613-1622 (2001).
- Agero, U., et al. Effect of mutalysin II on vascular recanalization after thrombosis induction in the ear of the hairless mice model. Toxicon. 50 (5), 698-706 (2007).
- Menger, M. D., Rösken, M., Rücker, M., Seiffge, D., Vollmar, B. Antithrombotic and thrombolytic effectiveness of rhirudin in microvessels. Langenbecks Arch Chir. 115 (1), 19-20 (1998).
- Bilheiro, R. P., et al. The thrombolytic action of a proteolytic fraction (P1G10) from Carica candamarcensis. Thromb Res. 131 (4), 175-182 (2013).
- Kram, L., Grambow, E., Mueller-Graf, F., Sorg, H., Vollmar, B. The anti-thrombotic effect of hydrogen sulfide is partly mediated by an upregulation of nitric oxide synthases. Thromb Res. 132 (2), 112-117 (2013).
