पर सतहों मानव Norovirus की जांच के लिए स्वाब नमूने विधि
Summary
A macrofoam based sampling methodology was developed and evaluated for the detection and quantification of norovirus on environmental hard surfaces.
Abstract
मानव noroviruses महामारी और दुनिया भर में छिटपुट आंत्रशोथ का एक प्रमुख कारण हैं। क्योंकि सबसे अधिक संक्रमण या तो सीधे व्यक्ति से व्यक्ति के मार्ग के माध्यम से या परोक्ष रूप से पर्यावरण सतहों या भोजन के माध्यम से फैल रहे हैं, दूषित fomites और निर्जीव सतहों नोरोवायरस प्रकोप के दौरान वायरस के प्रसार के लिए महत्वपूर्ण वाहनों रहे हैं।
हम विकसित किया है और एक प्रोटोकॉल का पता लगाने और कठोर सतहों से मानव noroviruses की टाइपिंग के लिए macrofoam swabs का उपयोग कर मूल्यांकन। फाइबर इत्तला दे दी swabs या antistatic पोंछे के साथ तुलना में, macrofoam के फाहे से अप करने के लिए 700 सेमी 2 के शौचालय की सीट सतहों वायरस वसूली (रेंज 1.2-33.6%) अनुमति देते हैं। प्रोटोकॉल के फाहे से वायरस की निकासी और वायरल शाही सेना स्पिन स्तंभों का उपयोग कर के आगे एकाग्रता के लिए कदम भी शामिल है। कुल में, 127 217 झाड़ू नमूने है कि क्रूज जहाजों और लंबे समय तक देखभाल सुविधाओं में सतहों जहां नोरोवायरस आंत्रशोथ किया गया था से एकत्र किया गया था (58.5%)RT-qPCR द्वारा जी आई आई नोरोवायरस के लिए सकारात्मक परीक्षण की सूचना दी। इन 29 (22.8%) का सफलतापूर्वक genotyped किया जा सकता है। अंत में, हम प्रोटोकॉल वायरस का पता लगाने के साथ ही प्रकोप के दौरान पर्यावरण प्रदूषण के स्तर को निर्धारित करने में सहायता कर सकते हैं जब नैदानिक नमूने उपलब्ध नहीं हैं विकसित का उपयोग कर पर्यावरण सतहों पर नोरोवायरस का पता लगाने; यह भी remediation रणनीति के प्रभाव की निगरानी की सुविधा हो सकती है।
Introduction
मानव noroviruses महामारी और छिटपुट तीव्र आंत्रशोथ दुनिया भर में 1, 2, 3 के एक प्रमुख कारण हैं। वायरस बहुत संक्रामक है और ट्रांसमिशन व्यक्ति बातचीत करने के लिए या परोक्ष रूप से दूषित भोजन, पानी या पर्यावरण सतहों के साथ संपर्क के माध्यम से प्रत्यक्ष व्यक्ति के माध्यम से होता है। Noroviruses विस्तारित अवधि के लिए बहाया जा सकता है और लंबे समय तक पर्यावरण सतहों पर वायरस के जीवित रहने की 1, 2, 3 प्रलेखित किया गया है। शिखर बहा दौरान वायरस कणों के अरबों मल के ग्राम प्रति जारी कर रहे हैं, और उल्टी भी संक्रमण 4, 5, 6, 7, 8 पैदा करने के लिए वायरल कणों की एक पर्याप्त संख्या में मौजूद हैं,एफई "> 9, 10। इसके अलावा, निर्जीव सतहों और मानव त्वचा के बीच वायरस के हस्तांतरण आसानी से हो सकता है 2, 11, 12 है। इसलिए, पर्यावरण प्रदूषण की निगरानी प्रकोप जांच में सहायता के लिए और साफ-अप की प्रभावशीलता का आकलन करने में कर सकते हैं और कीटाणुशोधन प्रक्रियाओं।
कई पर्यावरणीय नमूने प्रोटोकॉल रोटावायरस का पता लगाने के लिए वर्णित किया गया है, coliphage MS2, बिल्ली के समान calicivirus (एफ सी वी), और जीवाणुभोजी P22 13, 14, 15, 16। हालांकि, मान्यता की स्थिति में तेजी से सुखाना (<1 घंटा) और छोटे सतह क्षेत्रों सहित इन अध्ययनों में वर्णित (25 x 100 सेमी 2), पर्याप्त रूप से क्षेत्र सेटिंग्स का प्रतिनिधित्व नहीं कर सकता है। इसके अलावा, उम्मीद वातावरण के प्रदूषण का स्तर कमnmental सतहों प्रोटोकॉल है कि बहुत कुछ वायरस कणों का पता लगाने में सक्षम हैं की आवश्यकता होती है।
हम पता लगाने और नोरोवायरस की टाइपिंग के लिए एक macrofoam आधारित सतह नमूने विधि विकसित की है। इस विधि के कई नोरोवायरस प्रकोप के दौरान मान्य किया गया है। प्रोटोकॉल में शामिल हैं 1) कैसे पर्यावरण सतहों से झाड़ू नमूने एकत्र करने के लिए (2) कैसे सबसे अच्छा करने के लिए प्रयोगशाला संग्रह और शिपिंग के दौरान नमूनों की अखंडता को बनाए रखने के लिए, और 3) प्रयोगशाला परीक्षण और नोरोवायरस की टाइपिंग।
Protocol
Representative Results
Discussion
Noroviruses 18 और 10 3 वायरस कणों 20 के बीच एक 50% मानव संक्रामक खुराक है। इसलिए, भले सतहों के निम्न स्तर के प्रदूषण को एक सार्वजनिक स्वास्थ्य जोखिम पैदा कर सकता है। 1) विभिन्न झाड़ू सामग्री, 2) परिवहन के दौर…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors have no acknowledgements.
Materials
| Generic name for kits | ||||
| Macrofoam swab | Premoistened EnviroMax Swab kit | Puritan | 2588060PFUW | |
| RNA Lysis buffer | CDC UNEX buffer | Microbiologics | Cat No MR0501 | |
| RNA extraction spin column | Midi column | Omega Biotek | Cat No R6664-02 | |
| RNA purification spin column | Zymol RNA Clean and Concentrator kit | Zymo Research | Cat No R1016 | |
| Real time RT-PCR kit | AgPath kit One-Step RT-PCR Kit | Life Technologies | Cat No 4387391 | |
| Conventional RT-PCR kit | Qiagen one step RT-PCR kit | Qiagen kit | Cat No 210212 | |
| Gel extraction kit | Qiagen QIAquick gel extraction kit | Qiagen kit | Cat No 28704 or 28706 | |
| Coliphage MS2 | ATCC | Cat No 15597-B1 | ||
| RNA run-off transcripts | Bacteriophage MS2 (ATCC No. 15597-B1) can be cultivated using Escherichia coli (E.coli) Famp (ATCC No. 700891). | |||
| Realtime PCR platform | Applied Biosystems | Model ABI 7500 | GI and GII RNA run off transcripts were quantified spectrophotometrically at A260, diluted in diethyl pyrocarbonate-treated water to 1 × 106 copies/ μl, and stored at −80°C with 1.0 U /μl RNasin (Promega, Madison, WI). | |
| Optical 96-well reaction plate | Thermo Scientific | Cat No 4316813 | ||
| MicroAmp Clear Adhesive Film | Thermo Scientific | Cat No 4306311 |
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