개발<em> 메타 리지 움 anisopliae</em> Mycoinsecticide로서의 : 분리에서 현장 성능까지
Summary
여기서는 농업에서 해충 방제를위한 "최적의"곤충 병원성 균류 인 Metarhizium anisopliae 의 분리, 확인, 스크리닝 및 선택을 포함한 효과적인 제균제 개발에 관한 지식 기반 개발과 관련된 여러 단계를보고합니다 .
Abstract
상업용 살균제 개발시 주요 관심사는 화학 살충제에 비해 살균 속도입니다. 따라서 신속히 작용하는 독성이 강한 곤충 병원성 균의 선발을위한 격리 및 스크리닝은 중요한 단계입니다. 접촉으로 작용하는 Metarhizium , Beauveria, Nomurea 와 같은 병원균은 곤충 해충에 의해 섭취되어야하는 Bacillus thuringiensis 또는 핵 다당체 바이러스 (NPV)보다 더 적합합니다. 현재 연구에서 우리는 토양 희석 및 미끼 방법을 사용하여 감염된 곤충으로부터 68 개의 Metarhizium 균주를 분리했다. 분리 균주는 ITS1-5.8S-ITS2 및 26S rDNA 영역의 증폭 및 시퀀싱에 의해 동정되었다. Metarhizium anisopliae 의 가장 독성이있는 균주는 Helicoverpa armigera 의 III-instar 유충에 대한 곤충 생물 검정에서 얻은 중간 치사 농도 (LC 50 )와 시간 (LT 50 )을 기준으로 선정되었습니다 .선정 된 균주에 의한 포자 대량 생산은 벼를 기질로 사용하여 14 일 동안 고체 발효 (SSF)로 수행되었다. 포자는 0.1 % 트윈 -80을 사용하여 포자 포자 된 바이오 매스로부터 추출되었고 포자의 상이한 제제가 제조되었다. 비둘기 완두에서의 H. armigera 감염의 조절을위한 제제의 현장 시험은 무작위 블록 설계에 의해 수행되었다. 기름과 수성 제형 (각각 78.0 %와 70.9 %)으로 얻은 침입 방제 수준은 화학 농약으로 얻은 63.4 %보다 낫습니다.
Introduction
인도에서 1940 년대에 유기 염소 살충제의 도입에서, 살충제의 사용은 작물 해충은 여전히 농업 생산의 수율 손실의 측면에서 매년 루피 2 수십억을 비용으로 많은 배 (1) 증가했다. 합성 농약의 광범위하고 비 현명한 사용은 환경과 인간의 건강 (1)에 대한 지속적인 위협이다. 농약의 무차별적인 사용은 토양의 잔류 물과 자연 해충 포식자의 고갈로 이어진다. 또한 저항 1의 개발로 이어지는, 해충 인구의 유전 적 구성을 변경하기위한 강력한 선택 압력으로 작용한다. 비료와 살충제 같은 높은 투입물을 요구하는 녹색 혁명의 엄청난 이익에도 불구하고, 해충은 주요한 생물학적 제약이 계속되고 있습니다. 인도 및 전세계의 연간 작물 손실 기록에 대한 일반적인 추정치는 120 억 달러EF "각각> 2 USD 2,000 억 3.
화학 살충제가 해충을 방제 할 때 해로운 영향을 미칠 경우 생태 학적으로 건전하고 신뢰할 수 있으며 경제적이며 지속 가능한 대체 방법을 찾아야합니다. 생물학적 방제는 적절한 대안을 제공하며 기생충, 포식자 및 미생물 병원균의 사용을 포함합니다 4 . 예를 들어 곰팡이는 나비목, hymenopterans, coleopterans 및 dipterans를 비롯한 광범위한 해충을 감염시키는 것으로 알려져 있으며, 종종 자연적인 감염증을 초래합니다. 또한, 다른 바이러스 및 박테리아, 곤충 방제 제는 달리, 곤충 병원성 진균의 작용 모드는 접촉자 (5)가된다. 이 곰팡이는 100 종 이상의 이종 그룹으로 구성되어 있으며, 약 750 종이 서로 다른 곤충들 사이에서보고됩니다. 중요한 곰팡이 병원균은 다음과 같습니다 : Metarhizium sp., Beauveria sP., Nomuraea의 rileyi, Lecanicillium의 lecanii 및 Hirsutella 특검팀은., 6 몇 이름을 지정합니다. M. anisopliae (Metchnikoff) Sorokin은 생물학적 방제에서 두 번째로 널리 사용되는 곤충 병원성 균이다. 200 종 이상의 곤충을 공격하는 것으로 알려져 있습니다 7 .
이 연구에서는 M. anisopliae를 이용한 mycopesticide의 지식 기반 개발과 관련된 여러 단계가 제시됩니다. 1) 병원성 곤충 병원체에 대한 원천 ( 즉, 토양 또는 균사체 곤충) 확인, 2) 곤충 병원체 식별 및 선택, 3) 실험실 생물 분석 및 현장에서의 독성 및 유효성 유지 전략 5) 독성 물질 준비를위한 독창적 인 품질 관리 매개 변수의 개발, 6) 생물 조사 및 부가가치.
Protocol
Representative Results
Discussion
1880 년대에, 첫 번째 시도는 스카 랍 비틀 ( Anisoplia austriaca) 과 사탕무 관상어 인 Cleonis punctiventris 21 을 통제하기 위해 Metarhizium 을 사용하려는 첫 시도였다. 이 프로토콜에서 선행 조건 중 하나는 토양 또는 감염된 곤충으로부터 독성 균주를 분리하는 것이 었습니다. 실제로 LC 50 , LT 50 및 ST 50 과 같은 다른 매개 변수는 제품 <sup clas…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자들은 뉴 델리 생명 공학과의 ISCB (Indo-Swiss Collaboration in Biotechnology) 프로그램과 스위스 베른 (Berne)의 스위스 개발 및 협력기구에서 협력자가 기여한 점을 인정합니다. Vandana Ghormade, Pallavi Nahar, Priya Yadav, Shuklangi Kulkarni, Manisha Kapoor, Santosh Chavan, Ravindra Vidhate, Shamala Mane 및 Abhijeet Lande를 포함한 마이코 살충제 개발에 참여한 프로젝트 학생 및 직원의 공헌을 인정합니다. EKP와 SGT는 인도의 대학 보조금위원회와 인도의 과학 산업 연구 협의회 (CSIR)에서 연구 펠로우 십에 감사를 표합니다. MVD는 뉴 델리 명예 과학자 계획 산업 과학 연구위원회 (Council of Industrial and Scientific Research)의지지를 표합니다. 저자들은 ISCB 및 SBIRI 프로그램에 따른 재정적 지원에 대해 인도 뉴 델리의 생물 공학과 (Department of Biotechnology)에 감사드립니다. 우리는 감사하고 있습니다.검토 자에게 제공합니다.
Materials
| Agar | Hi-Media | RM666 | Reagent |
| Ammonium sulphate | Thomas Baker | 11645 | Reagent |
| DNA analyzer | Applied biosystem | ABI prism 3730 | Instrument |
| DNA islation kit | Qiagen | 69104 | Reagent |
| Dodine | Sigma | 45466 | Reagent |
| Gel extraction kit | Qiagen | 28604 | Reagent |
| Glucose | Hi-Media | GRM077 | Reagent |
| Knapsac sparyer | Kaypee | HY-16L (1004) | Instrument |
| Peptone | Hi-Media | RM006-500G | Reagent |
| Polypropylene vials | Laxbro | SV-50 | Plasticware |
| Potato dextrose agar (PDA) | Hi-Media | M096-500G | Reagent |
| Tween-80 | SRL | 28940 | Reagent |
| Ultra low volume sparyer | Matabi | INSECDISK | Instrument |
| Unicorn-bags | Unicorn | UP-140024-SMB | Autoclavalbe bag for SSF |
| Yeast extract | Hi-Media | RM027-500G | Reagent |
| Chromas 2.1 | software |
References
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