Rapide et raffiné CD11b Isolation magnétique de primaire microglies avec pureté améliorée et polyvalence

Souvarish Sarkar; Emir Malovic; Brandon Plante; Gary Zenitsky; Huajun Jin; Vellareddy Anantharam; Arthi Kanthasamy; Anumantha G. Kanthasamy

doi:10.3791/55364

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Article de méthode

Rapide et raffiné CD11b Isolation magnétique de primaire microglies avec pureté améliorée et polyvalence

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DOI :

10.3791/55364

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13 avril 2017

Souvarish Sarkar^*¹ , Emir Malovic^*¹ , Brandon Plante¹ , Gary Zenitsky¹ , Huajun Jin¹ , Vellareddy Anantharam¹ , Arthi Kanthasamy¹ , Anumantha G. Kanthasamy¹

¹Biomedical Sciences & Iowa Center for Advanced Neurotoxicology, Iowa State University

^* These authors contributed equally

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour isoler microglies de souriceaux post - natal (jour 1) pour l' expérimentation in vitro. Cette méthode d'isolement improvisée génère à la fois un rendement et une pureté élevés, un avantage significatif par rapport aux méthodes de remplacement qui permet une expérimentation à large gamme pour les besoins de l'élucidation de la biologie de la microglie.

Résumé

Les microglies sont les répondeurs principaux aux insultes du système nerveux central; Cependant, il reste encore beaucoup de leur rôle dans la régulation neuro-inflammation. Microglies sont des cellules mésodermiques qui fonctionnent de manière similaire aux macrophages dans le stress inflammatoire arpentage. Le classique (M1-type) et alternatif (M2 type) activations de macrophages ont également été étendues à microglie dans le but de mieux comprendre l'interaction sous-jacente de ces phénotypes ont dans des conditions neuro-inflammatoires telles que la maladie de Parkinson, d'Alzheimer et la maladie de Huntington. Dans l' expérimentation in vitro en utilisant la microglie primaire offre des résultats rapides et fiables qui peuvent être étendues à l'environnement in vivo. Bien que ce soit un net avantage sur l' expérimentation in vivo, l' isolement microglies tout en obtenant des rendements adéquats de pureté optimale a été un défi. Les méthodes courantes actuellement utilisées souffrent soit de faible récupération, de faible pureté, ou les deux. Ici, nous demontrer un perfectionnement du procédé de séparation magnétique CD11b sans colonne qui permet d'obtenir une récupération élevée de cellules et de pureté améliorée dans la moitié de la quantité de temps. Nous vous proposons cette méthode optimisée comme un modèle très utile d'isolement microglie primaire aux fins de l'étude et la neuro-inflammation neurodégénérescence.

Introduction

Les microglies sont macrophages résidents Myb indépendants d'origine mésodermique, qui se différencient à partir de c-kit + / CD45- érythromyéloïde progéniteurs dans les îlots sanguins de la vésicule ombilicale ^{^1,} ^2. Une fois embryologique microglie ont colonisé le système nerveux central (SNC), leur transition d'une amoeboid à une forme ramifiée ^3. Ces microglies adultes sont classés comme Surveillant puisque leurs ramifications dynamiques sonde le parenchyme cérébral sain pour les insultes potentiels ^4. Bien que les microglies ne contribuent à environ ....