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Article de méthode

Synthèse de cristaux liquides biocompatibles mousses élastomères comme échafaudages cellulaires pour les cultures de cellules spatiales 3D

9.4K vues

DOI :

10.3791/55452

11 avril 2017

Dans cet article

Résumé

Cette étude présente une méthode pour préparer 3D, biodégradables, des échafaudages de cellules en forme de mousse à base d'élastomères à cristaux liquides biocompatibles de la chaîne latérale (LCES). Des expériences de microscopie confocale montrent que LCES comme mousse permettent la fixation des cellules, la prolifération et l'alignement spontané de myoblastes C2C12s.

Résumé

Nous présentons ici une préparation étape par étape d'un échafaudage cellulaire 3D, biodégradable, comme la mousse. Ces échafaudages ont été préparés par co-polymères séquences de réticulation étoile comportant des unités de cholestérol en tant que groupes latéraux de la chaîne latérale, ce qui entraîne smectique A (SmA) des élastomères à cristaux liquides (LCES). Echafauds comme mousse, préparés en utilisant des modèles métalliques, disposent microcanaux interconnectés, ce qui les rend appropriés comme échafauds de culture cellulaire 3D. Les propriétés combinées de la structure régulière de la mousse métallique et du résultat élastomère dans un échafaudage cellulaire 3D qui favorise non seulement la prolifération cellulaire supérieure par rapport aux films templated poreux classiques, mais aussi une meilleure gestion du transport de masse (c. -à- nutriments, gaz, déchets , etc.). La nature du modèle métallique permet la manipulation aisée des formes en mousse ( par exemple, des rouleaux ou des films) et pour la préparation des échafauds de différentes tailles de pores pour les études de cellules différentes , tout en préservant la interconnected nature poreuse du modèle. Le procédé de gravure ne modifie pas la composition chimique des élastomères, en préservant leur nature biocompatible et biodégradable. Nous montrons que ces LCES smectiques, lorsqu'elles sont cultivées pendant des périodes longues, permettent l'étude des constructions de tissus cliniquement pertinentes et complexes, tout en favorisant la croissance et la prolifération des cellules.

Introduction

Il existe plusieurs exemples de matériaux synthétiques et biologiques biocompatibles destinés à être appliqués dans des études cellulaires et pour la régénération des tissus visant à la fixation des cellules et la prolifération 1, 2, 3, 4, 5. Il y a eu quelques exemples de matériaux biocompatibles, connus comme des élastomères de cristaux liquides (LCES), qui peut répondre à des stimuli externes avec la commande anisotrope moléculaire 6, 7. LCES so....

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Protocole

REMARQUE: Les étapes suivantes pour la préparation de mousse de type LCE 3D en utilisant le copolymère séquencé en étoile 3-bras sont représentés sur la figure 1. Pour la caractérisation par résonance magnétique nucléaire (RMN), les spectres sont enregistrés dans le chloroforme deutéré (CDCI3) à la température ambiante sur un instrument Bruker DMX 400 MHz et interne référencée pics résiduels à 7,26. Transformation de Fourier des spectres infrarouge (FT-IR) sont enregistrés en utilisant un spectromètre 33 Bruker Vector FT-IR en utilisant le mode de réflectance totale atténuée. Pour chaque étape du protocole suivant, il est imp....

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Résultats

Ce rapport indique le procédé de préparation d'un LCE 3D poreux comme un échafaudage pour la culture cellulaire en utilisant une matrice de métal de nickel. Le 3D obtenu LCE démontre un réseau de canaux interconnectés complexe qui permet l' infiltration de cellules facile, ainsi que le transport de masse plus appropriée 27. Il a été constaté que les cellules sont capables de pénétrer entièrement le réseau de canaux interconnectés et sont également en mesur.......

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Discussion

élastomères cristaux liquides ont récemment été étudiés comme échafauds de cellules biocompatibles en raison de leur réactivité stimuli. Ils se sont avérés être des plates-formes idéales comme échafauds cellulaires. Cependant, un facteur important de garder à l'esprit lors de la préparation et la conception d'un nouvel échafaudage LCE est la porosité. L'incorporation de solides lessivables 23 ou de gaz ne se traduit pas toujours dans la porosité homogène ou pores totalement interconne.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n'ont rien à dévoiler.

Remerciements

Les auteurs tiennent à remercier l'Université Kent State (subvention de collaboration de recherche et de soutien à l'Initiative de médecine régénératrice à Kent State - ReMedIKS) pour le soutien financier de ce projet.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyltriethoxysilaneAlfa AesarL16606Agent silanisant
2-bis(4-hydroxy-cyclohexyl)propaneTCIB0928Réactif
2-chlorohexanone  ;Alfa AesarA18613Réactif
2-heptanone  ;Sigma AldrichW254401Solvant
2-propanol  ;Sigma Aldrich278475 Solvant
acide 3-chloroperbenzoïque, m-CPBASigma Aldrich273031 Réactif
4-diméthylaminopyridineAlfa Aesar A13016Réactif
4',6-diamidino-2-phénylindole, DAPI  ;InvitrogenD1306Teinture nucléaire
Acide 5-hexynoïque  ;Alfa AesarB25132-06Réactif
Acide acétiqueVWR36289Solvant
AcétoneSigma Aldrich34850Solvant
Alcool 200 proof ACS Grade  ;VWR71001-866Réactif
BenzèneAlfa AesarAA33290Solvant
&epsilon ;-caprolactone  ;Alfa AesarA10299-0ERéactif
ChloroformeVWRBDH1109Solvant
CholestérolSigma AldrichC8503
Réactif Oxyde de chrome(VI)Sigma Aldrich232653Réactif
Iodure de cuivre(I)Strem Chemicals100211-060Réactif
D,L-Lactide  ;Alfa AesarL09026Réactif
DichlorométhaneSigma Aldrich320269Solvant
Éther diéthylique  ;Emd MilliporeEX0190Solvant
N,N-diméthylformamideSigma Aldrich270547Solvant
Dulbecco' s milieu Eagle modifié, DEME  ;CORNING Cellgo10-013Cell
Media ÉthanolAlfa Aesar33361Solvant
Formaldéhyde  ;SIGMA Life ScienceF8775Sérum bovin
fœtal fixateur, FBS  ;HyCloneSH30071.01Media Component
Papier filtre, grade 415, qualitatif, crêpeVWR28320
Filtration GlycérolSigma AldrichG5516Nœud central (3 bras)
Diisocyanate d’hexaméthylène, HDISigma Aldrich52649Réticulant
Chlorure de fer(III)  ;Alfa Aesar12357Agent de gravure
Alcool isopropyliqueVWRBDH1133Solvant
MéthanolAlfa AesarL13255Solvant
N,N'-dicyclohexylcarbodiimideAldrichD80002Solvant
N,N-diméthylformamideSigma Aldrich270547Solvant
Gabarit en métal nickelAmerican ElementsNi-860Gabarit en mousse
Cellules de neuroblastomes (SH-SY5Y)ATCCCRL-2266Lignée cellulaire
Pénicilline streptomycine  ;Thermo SCIENTIFIC15140122Antibiotiques
Polyéthylène glycol 2000, PEGAlfa AesarB22181Réactif
Azoture de sodium  ;VWR97064-646Réactif
Bicarbonate de sodiumAMRESCO865Sel de séchage
Chlorure de sodiumBDHBDH9286Sel de séchage
Phosphate de sodium dibasique heptahydratéFisher ScientificS-374Sel de séchage
Phosphate de sodium monobasique monohydratéSigma AldrichS9638Sel de séchage
Sulfate de sodiumSigma Aldrich239313Sel de séchage
TétrahydrofuraneAlfa Aesar41819Solvant
Thiosulfate de sodiumAMRESCO393Sel de séchage
Tin(II) 2-éthylhexanoateAldrichS3252Réactif
ToluèneAlfa Aesar22903Solvant
TriéthylamineSigma Aldrich471283Réactif
TrypsineHyCloneSH30042.01Détachement de cellules
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Références

  1. Khor, E., Lim, L. Y. Implantable applications of chitin and chitosan. Biomaterials. 24 (13), 2339-2349 (2003).
  2. Chung, H. J., Park, T. G. Surface engineered and drug releasing pre-fabricated scaffolds for tissue engineering. Adv. Drug Deliv. Rev. 59

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Réimpressions et autorisations

Mots-clés

chafaudage biocompatibleCulture cellulaire 3DMatrice en mousse m talliqueCha ne lat rale de cholest rolPhase smectique Achafaudage semblable une mousseProlif ration cellulaireMicroscopie confocaleTest de compression tactile