coupe de précision de la souris Tranches Lung pour visualiser les cellules vivantes pulmonaire dendritiques

Miranda R. Lyons-Cohen; Seddon Y. Thomas; Donald N. Cook; Hideki Nakano

doi:10.3791/55465

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Article de méthode

coupe de précision de la souris Tranches Lung pour visualiser les cellules vivantes pulmonaire dendritiques

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DOI :

10.3791/55465

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5 avril 2017

Miranda R. Lyons-Cohen¹ , Seddon Y. Thomas¹ , Donald N. Cook¹ , Hideki Nakano¹

¹Immunity, Inflammation, and Disease Laboratory, Division of Intramural Research, National Institute of Environmental Health Sciences, NIH

Dans cet article

Résumé

Nous décrivons un procédé pour générer des tranches de poumon couper avec précision (PCLS) et les immunocoloration pour visualiser la localisation de divers types de cellules immunitaires dans le poumon. Notre protocole peut être étendu pour visualiser l'emplacement et la fonction de différents types de cellules dans une variété de conditions.

Résumé

L'inhalation d'allergènes et d'agents pathogènes provoque plusieurs changements dans une variété de types de cellules immunitaires dans les poumons. La cytométrie en flux est une technique puissante pour l'analyse quantitative des protéines de surface cellulaire sur les cellules immunitaires, mais il ne fournit aucune information sur les schémas de localisation et de migration de ces cellules dans le poumon. De même, les tests de chimiotaxie peuvent être effectués pour étudier le potentiel des cellules à répondre à des facteurs chimiotactiques in vitro, mais ces tests ne se reproduisent pas à l'environnement complexe du poumon intact. Contrairement à ces techniques mentionnées ci-dessus, l'emplacement des types cellulaires individuels dans le poumon peut être visualisé facilement en générant des tranches de poumon coupe de précision (PCLS), leur coloration avec disponibles dans le commerce, des anticorps par fluorescence marqués, et la visualisation des sections par microscopie confocale. PCLS peuvent être utilisés pour les vivre et les tissus pulmonaires fixes, et les tranches peuvent englober des domaines aussi grande qu'une section transversale d'un lobe entier. Nous avons utilisé ce protocole pour visualiser avec succès l'emplacement d'une grande variété de types de cellules dans les poumons, y compris les types distincts de cellules dendritiques, les macrophages, les neutrophiles, les lymphocytes T et les cellules B, ainsi que les cellules structurelles telles que lymphatique, endothéliale et cellules épithéliales. La capacité à visualiser les interactions cellulaires, telles que celles entre les cellules dendritiques et les cellules T, en temps réel, le tissu pulmonaire en trois dimensions, peut révéler comment les cellules se déplacent dans le poumon et interagir avec l'autre à l'état stable et pendant l'inflammation. Ainsi, lorsqu'il est utilisé en combinaison avec d'autres procédures, telles que cytométrie en flux et la PCR quantitative, PCLS peut contribuer à une compréhension globale des événements cellulaires qui sous-tendent les maladies allergiques et inflammatoires du poumon.

Introduction

À la suite de l'inhalation de stimuli pro-inflammatoires tels que lipopolysaccharide (LPS), il y a un mouvement coordonné de cellules immunitaires dans, à l'intérieur et du poumon. Par exemple, les neutrophiles sont rapidement recrutés pour le parenchyme pulmonaire et des voies respiratoires. En outre, certaines cellules présentatrices d'antigène professionnelles appelées cellules dendritiques classiques (CDCS) subissent un motif de migration relativement complexe ^{^1,} ^2. CDCS peuvent être identifiés par cytométrie de flux, basés en partie sur leur affichage du marqueur de surface, CD11c. Sous - ens....