באמצעות שיטת הר שלמה Immunohistochemical ללמוד את שימור של דרכי המרה<em> סונקוס מורן</em
Summary
גישה הר שלמה אימונוהיסטוכימי, כדי לחזות ביטוי חלבון neurofilament במערכת מרה מרהיב סונקוס murinus. מוצג כאן. פרוטוקול זה ניתן להשתמש כדי לנתח את העצבון של כל האיברים הקרביים בס מורינוס או מינים אחרים.
Abstract
עבודה זו מתארת את שיטת הרמוניה של המערכת החיסונית בכללותה, תוך שימוש בנוגדן נוירופילמנט לחלבון כדי לתייג את העצבון של דרכי המרה במעי הגס של סונקוס ( S. Murinus ). ראשית, הדגימה גזור מ מ 'מנוס ו קבוע ב paraformaldehyde 4% (PFA). שנית, טיפול אנזימטי ואקטיביזם peroxidase אנדוגני פוטנציאלי בוצעו. הדגימה נחשפה אז נוגדן ראשוני, נוגדן נוגדנים נוירופילמנט, במשך 3-6 ימים. זה היה מודגרות אז עם נוגדנים משני מצומדות עם חזרת peroxidase. התגובה הצבעונית התגלה על ידי תגובה הדגימה עם המצע של 3,3 '-diaminobenzidine (DAB). שיטה זו יכולה להיות מיושמת כדי לנתח את העצבון של כל האיברים הקרביים. יתר על כן, פרוטוקול זה יכול גם להיות מותאם לבדוק נוגדנים נוירונים אחרים, אבל אופטימיזציה של antibodiEs צריך להיעשות הראשון. שיטה זו הוצגה במקור על ידי Kuratani ו Tanaka 1 , 2 , 3 .
Introduction
הבית מושק זועק , סונקוס murinus , שייך סדר Insectivora ואת Soricidae המשפחה. יונק זעיר זה מופץ ברחבי דרום מזרח אסיה ומתגורר בתים ואזורי עשב הממוקמים ליד היישוב האנושי או עטים בקר 4 . מין זה מציג מאפיינים מורפולוגיים כלליים דומים יותר לבני אדם מאשר לבעלי מעבדה אחרים, כגון עכבר, חולדה ושפן. בעבר, כל ההר immunostaining עם סמן נוירון היקפי עבור חלבון ne Murphus neurofilament (NFP) שימש התווית העצבים ההיקפיים בלבלב 6 , הפודילה המרכזית של התריסריון 7 , pylorus 8 , gallbladder 5 , ו exthepatic דרכי השתן 9 .
NFP הוא קומפלקס macromolecular כי הוא חלק cytoskeleton העצבית בוגרת. נוירופילמנט הקשורות חלבוןאינטראקציה בין NFP לבין הזיגוזום. הן פונקציה האנזים ואת המבנה של חלבונים מקשר מוסדרים על ידי NFP 10 . מתחם NFP מורכב משלושה פוליפפטידים: NF-L (70 kDa), NF-M (150-160 kDa) ו- NF-H (200 kDa). NFP ניתן למצוא אקסונים נוירונים הן במערכת העצבים המרכזית והפריפריה. נוגדן NFP אנטי אנושי הוכח לתווית אקסונים של מערכת העצבים המרכזית והפריפלית. מחקרים אנטומיים ואלקטרופיזיולוגיים הוכיחו כי הסוגר, כיס המרה, ודרכי העיכול הפרוקסימלי מחוברים 11 , 12 , 13 , 14 . עם זאת, התכונות המורפולוגיות של חיבורים העצבית שלהם עדיין לא הוגדרו.
עבודה זו מדגימה את השימוש של שיטת הר שלמה immunohistochemical מכתים את התווית של העצבנות של ס מורינוס bilIary עם נוגדנים NFP.
Protocol
Representative Results
Discussion
עבודה זו מתארת את הליך הניסוי להדמיה של העצבון של דרכי המרה המרגיעה באמצעות נוגדנים נגד חלבון neurofilament. פרוטוקול זה הותאם מן הפרוטוקול המתואר על ידי Kuratani ו Tanaka 1 , 2 , 3 .
עבור ניסו…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
למחברים אין תודות.
Materials
| orthoperiodic acid | Wako | 162-00732 | |
| papain | Wako | 164-00172 | |
| bovine serum albumin (BSA) | Wako | 010-15131 | |
| sodium azide | Nacalai Tesque | 312-33 | |
| neurofilament protein (NFP) antibody | Dako | M0762, lot 089, clone: 2F11 | |
| peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP | MBL | Code 330 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) | Wako | 349-00903 | |
| imidazole | Sigma | I-0125 |
References
- Kuratani, S., Tanaka, S., Ishikawa, Y., Zukeran, C. Early development of the hypoglossal nerve in the chick embryo as observed by the whole-mount nerve staining method. Am. J. Anat. 182 (2), 155-168 (1988).
- Kuratani, S., Tanaka, S. Peripheral development of the avian vagus nerve with special reference to the morphological innervation of heart and lung. Anat. Embryol. (Berl). 182 (5), 435-445 (1990).
- Kuratani, S., Tanaka, S. Peripheral development of avian trigeminal nerves. Am. J. Anat. 187 (1), 65-80 (1990).
- Yi, S. Q., et al. House musk shrew, Suncus murinus: a novel and natural obesity-resistant animal model. Obes. Metab. 6, 22-28 (2010).
- Yi, S. Q., et al. Surgical anatomy of innervation of the gallbladder in humans and Suncus murinus with special reference to morphological understanding of gallstone formation after gastrectomy. World J. Gastroenterol. 13 (14), 2066-2071 (2007).
- Yi, S. Q., et al. Anatomical study of the pancreas in the house musk shrew, Suncus murinus, with special reference to the blood supply and innervation. Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell Evol. Biol. 273 (1), 630-635 (2003).
- Yi, S. Q., et al. Surgical anatomy of the innervation of the major duodenal papilla in humans and Suncus murinus, from the perspective of preserving innervation in organ-saving procedures. Pancreas. 30 (3), 211-217 (2005).
- Yi, S. Q., et al. Surgical anatomy of the innervation of the pylorus in humans and Suncus murinus, in relation to the surgical technique for pylorus-preserving pancreatoduodenectomy. World J. Gastroenterol. 12 (14), 2209-2216 (2006).
- Yi, S. Q., Ren, K., Kinoshita, M., Takano, N., Itoh, M., Ozaki, N. Innervation of Extrahepatic Biliary Tract, With Special Reference to the Direct Bidirectional Neural Connections of the Gall Bladder, Sphincter of Oddi and Duodenum in Suncus murinus, in Whole-Mount Immunohistochemical Study. Anat. Histol. Embryol. 45 (3), 184-188 (2016).
- Wang, H., et al. Neurofilament proteins in axonal regeneration and neurodegenerative diseases. Neural Regen. Res. 7 (8), 620-626 (2012).
- Wyatt, A. P. The relationship of the sphincter of Oddi to the stomach, duodenum and gall-bladder. J. Physiol. 193 (2), 225-243 (1967).
- Mawe, G. M., Kennedy, A. L. Duodenal neurons provide nicotinic fast synaptic input to sphincter of Oddi neurons in guinea pig. Am. J. Physiol. 277, G226-G234 (1999).
- Seo, J. H., Cho, S. S., Lee, I. S., Lee, H. S. Anatomical and neuropeptidergic properties of the duodenal neurons projecting to the gallbladder in the golden hamster. Arch. Histol. Cytol. 65 (4), 317-321 (2002).
- Padbury, R. T., Furness, J. B., Baker, R. A., Toouli, J., Messenger, J. P. Projections of nerve cells from the duodenum to the sphincter of Oddi and gallbladder of the Australian possum. Gastroenterology. 104 (1), 130-136 (1993).
- White, J. J., Reeber, S. L., Hawkes, R., Sillitoe, R. V. Wholemount immunohistochemistry for revealing complex brain topography. J. Vis. Exp. (62), e4042 (2012).
