Utilizzando un metodo immunohistochemico integrale per studiare l'innervazione del tratto bipolare in<em> Suncus murinus</em
Summary
Un approccio immunoistochimico a tutto tondo, per visualizzare l'espressione di proteine del neurofilamento nel tratto biliare extraepatico in Suncus murinus. È qui presentato. Questo protocollo può essere utilizzato per analizzare l'innervazione di tutti gli organi viscerali di S. murinus o di altre specie.
Abstract
Questo lavoro descrive dettagliatamente il metodo di colorazione immunohistochemica a tutto campo, utilizzando l'anticorpo proteico neurofilamento per etichettare l'innervazione del tratto biliare in Suncus murinus ( S. murinus ). In primo luogo, il campione è stato disciolto da S. murinus e fissato in 4% di paraformaldeide (PFA). In secondo luogo, sono stati eseguiti un trattamento enzimatico e una potenziale inattivazione endogena della perossidasi. Il campione è stato poi esposto all'anticorpo primario, anticorpo anti-neurofilamento proteico, per 3-6 giorni. Fu quindi incubato con l'anticorpo secondario coniugato con perossidasi di rafano. La reazione a colori è stata rivelata reagendo il campione con un substrato 3,3'-diaminobenzidina (DAB). Questo metodo può essere applicato per analizzare l'innervazione di tutti gli organi viscerali. Inoltre, questo protocollo può anche essere adattato per testare altri anticorpi neuronali, ma l'ottimizzazione degli antibodiDovrebbe essere fatto prima. Questo metodo è stato originariamente introdotto da Kuratani e Tanaka 1 , 2 , 3 .
Introduction
Il muschio della casa, Suncus murinus , appartiene all'ordine Insectivora e alla famiglia Soricidae. Questo piccolo mammifero è distribuito in tutto il Sud-Est asiatico e abita case e aree erbose che si trovano vicino a abitazioni umane o penne di bestiame 4 . Questa specie presenta caratteristiche morfologiche generali più simili agli esseri umani rispetto ad altri animali da laboratorio, come il topo, il topo e il coniglio 5 . In precedenza, l'immunostaining con un marker di neurone periferico per la proteina del neurofilamento di S. murinus (NFP) è stato usato per etichettare i nervi periferici nel pancreas 6 , maggiore papilla duodenale 7 , pylorus 8 , cistifellea 5 e tratto biliare extraepatico 9 .
NFP è un complesso macromolecolare che fa parte del citoscheletro neuronale maturo. Proteina legata al neurofilamentoLe interazioni mediate tra NFP e zigosoma. La funzione enzimatica e la struttura delle proteine di collegamento sono regolate da NFP 10 . Il complesso NFP è costituito da tre polipeptidi: NF-L (70 kDa), NF-M (150-160 kDa) e NF-H (200 kDa). NFP può essere trovato in assoni neuronali sia nel sistema nervoso centrale che nei periferici. È stato dimostrato che l'anticorpo anti-umano del NFP ha etichettato assoni del sistema nervoso centrale e periferico. Le indagini anatomiche ed elettrofisiologiche hanno dimostrato che lo sfintere, la cistifellea e il tratto gastrointestinale prossimale sono collegati 11 , 12 , 13 , 14 . Tuttavia, le caratteristiche morfologiche delle loro connessioni neuronali non sono ancora state definite.
Questo lavoro dimostra l'utilizzo di un metodo di colorazione immunohistochemico a tutto campo per etichettare l'innervazione del S. murinus bilCon un anticorpo NFP.
Protocol
Representative Results
Discussion
Questo lavoro descrive la procedura sperimentale per la visualizzazione dell'innervazione del tratto biliare extraepatico usando un anticorpo contro la proteina del neurofilamento. Questo protocollo è stato adattato dal protocollo descritto da Kuratani e Tanaka 1 , 2 , 3 .
Per questo esperimento, pianificare la timeline per ciascuno degli esperimenti, in quanto l'approccio di colorazione a …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori non hanno alcun riconoscimento.
Materials
| orthoperiodic acid | Wako | 162-00732 | |
| papain | Wako | 164-00172 | |
| bovine serum albumin (BSA) | Wako | 010-15131 | |
| sodium azide | Nacalai Tesque | 312-33 | |
| neurofilament protein (NFP) antibody | Dako | M0762, lot 089, clone: 2F11 | |
| peroxidase-conjugated affinity-purified sheep anti-mouse IgG-HRP | MBL | Code 330 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) | Wako | 349-00903 | |
| imidazole | Sigma | I-0125 |
References
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