गंभीर बीमारी के एक माउस मॉडल में तरल पदार्थ, औषधि और पोषक तत्व प्रशासन के लिए एक केंद्रीय शिरापरक लाइन का प्रयोग करें
Summary
This protocol describes a centrally catheterized mouse model of prolonged critical illness. We combine the cecal ligation and puncture method to induce sepsis with the use of a central venous line for fluids, drugs and nutrient administration to mimic the human clinical setting.
Abstract
यह प्रोटोकॉल लंबे समय तक गंभीर बीमारी का एक केन्द्र catheterized माउस मॉडल का वर्णन है। हम cecal ligation और पंचर विधि तरल पदार्थ, ड्रग्स और पोषक तत्व प्रशासन के लिए एक केंद्रीय शिरापरक लाइन के प्रयोग मानव नैदानिक सेटिंग की नकल करने के साथ पूति प्रेरित करने के लिए गठबंधन। गंभीर रूप से बीमार रोगियों जीवित रहने के लिए गहन चिकित्सा सहायता की आवश्यकता है। रोगियों के बहुमत कुछ दिनों के भीतर ठीक हो करते हैं, रोगियों के एक चौथाई के बारे में लंबे समय तक गहन देखभाल की जरूरत है और कई अंग विफलता गैर हल करने से मरने का उच्च जोखिम में हैं। इसके अलावा, गंभीर बीमारी के लंबे समय तक चरण गहरा मांसपेशियों में कमजोरी, और अंत: स्रावी और चयापचय परिवर्तन, जो के रोगजनन वर्तमान में पूरी तरह से समझे है के द्वारा हॉलमार्क है। क्रिटिकल केयर अनुसंधान के क्षेत्र में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया पशु मॉडल पूति के लिए प्रेरित करने cecal ligation और पंचर मॉडल है। यह एक बहुत ही प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मॉडल, मानव सितंबर समान तीव्र भड़काऊ और रक्तसंचारप्रकरण परिवर्तन के साथ हैसीस, जो गंभीर बीमारी की तीव्र चरण का अध्ययन करने के लिए बनाया गया है। हालांकि, इस मॉडल एक उच्च घातकता को, जो नैदानिक मानव स्थिति से अलग है, और गंभीर बीमारी के लंबे समय तक चरण का अध्ययन करने के विकसित नहीं है द्वारा हॉलमार्क है। इसलिए, हम गले की नस हमें नैदानिक प्रासंगिक सहायक देखभाल प्रशासन के लिए अनुमति देता है में एक केंद्रीय शिरापरक कैथेटर रखकर तकनीक अनुकूलित, बेहतर गंभीर बीमारी के मानव नैदानिक स्थिति नकल करने के लिए। इस माउस मॉडल एक व्यापक शल्य प्रक्रिया और जानवरों की दैनिक गहन देखभाल की आवश्यकता होती है, लेकिन यह गंभीर बीमारी की तीव्र और लंबे समय तक चरण का एक प्रासंगिक मॉडल का परिणाम है।
Introduction
गंभीर बीमारी एक रोग राज्य में जो एक या अधिक अंग प्रणालियों के समारोह इस हद तक कि रोगी, मर जाएगा जब तक कि गहन चिकित्सा सहायता प्रशासित किया जाता है करने के लिए बाधा उत्पन्न कर रहा है। गहन चिकित्सा इकाई (आईसीयू), भिन्न हो सकते हैं आघात, जटिल सर्जरी, जलता है, पूति के लिए रोग तीव्रता से लेकर में प्रवेश के लिए प्रारंभिक कारण जबकि, सभी गंभीर रूप से बीमार रोगियों सेलुलर क्षति, hypoperfusion, हाइपोक्सिया और अन्य लोगों के अलावा अत्यधिक सूजन के कारण होता से ग्रस्त है, जो अंग विफलता की ओर जाता है। अधिकांश रोगियों को उनके तीव्र अपमान जीवित रहने, लेकिन रोगियों का एक महत्वपूर्ण अंश तुरंत ठीक हो और लंबे समय तक गहन देखभाल की जरूरत नहीं है। वे कारण कई अंगों विफलता गैर को हल करने के लिए मौत के उच्च जोखिम में हैं। इसके अलावा, गंभीर बीमारी के लंबे समय तक चरण गहरा मांसपेशियों की कमजोरी और अंत: स्रावी और चयापचय परिवर्तन है, जो के रोगजनन वर्तमान में पूरी तरह से समझे है के द्वारा हॉलमार्क है।
कई rodent मॉडल क्रिटिकल केयर अनुसंधान सेटिंग में इस्तेमाल किया जा रहा है। दो ज्यादातर इस्तेमाल किया मॉडल lipopolysaccharide (LPS) और cecal ligation और पंचर (CLP) के बहिर्जात प्रशासन कर रहे हैं। दोनों मॉडल पूति की तीव्र चरण, एक जीवन के लिए खतरा अंग संक्रमण के लिए एक dysregulated मेजबान प्रतिक्रिया की वजह से रोग के रूप में परिभाषित नकल करने के लिए विकसित की है, और दुनिया भर में आईसीयू 1, 2 में प्रवेश के लिए मुख्य कारणों में से एक रहे हैं। LPS मॉडल कई नुकसान यह केवल क्षणिक साइटोकिन्स की रिहाई और पशु 3 की रक्तसंचारप्रकरण स्थिति को प्रभावित करता है के रूप में है। मनुष्य के विपरीत, मूषक भी विशेष रूप से अन्तर्जीवविष के लिए प्रतिरोधी रहे हैं और अन्तर्जीवविष के 'उच्च खुराक' के उपयोग के लिए आवश्यक है हाइपरटेंशन और मृत्यु दर का उत्पादन करने, इसके द्वारा आगे इस विधि 4, 5 की वैधता को लेकर चिंता बढ़ी। अन्य मॉडल, cecal ligation और पंचर मॉडल (CLP)सेसम के एक हिस्से को एक सुई पंचर के माध्यम से और के माध्यम से के बाद की एक बंधाव की सुविधा है। यह प्रक्रिया रक्त डिब्बे में जीवाणुओं की एक अनुवादन के बाद ऊतकों को नुकसान के साथ एक polymicrobial पेट संक्रमण का कारण बनता है। यह एक प्रणालीगत भड़काऊ प्रतिक्रिया और पूति के विकास को गति प्रदान करेगा। Hyperinflammation, vasodilation, हाइपरटेंशन और वृद्धि की कार्डियक आउटपुट 6, 7: CLP मॉडल बड़े पैमाने पर तीव्र गंभीर बीमारी है कि सेप्सिस की मुख्य विशेषताएं इस reproduces का एक पशु मॉडल के रूप में पहचाना गया है। हालांकि, इस मॉडल गैर को हल करने के लिए कई अंग विफलता, मांसपेशियों बर्बाद कर, और अंत: स्रावी और चयापचय परिवर्तन, जो गंभीर बीमारी के लंबे समय तक चरण के लिए विशिष्ट हैं के अध्ययन की अनुमति नहीं है। इसके अलावा, हाल ही में गंभीर बीमारी के लिए माउस मॉडल की वैधता, पर सवाल उठाया गया है माउस मॉडल से निष्कर्ष हमेशा मानव की स्थापना 8 में अनुवाद नहीं किया जा सकता है के बाद से, 9, 10। एक संभावित व्याख्या हो सकता है कि सहायक देखभाल कि बीमार मानव रोगियों गंभीर को प्रदान की जाती है देखभाल कि गंभीर रूप से बीमार चूहों को प्रदान की जाती है से काफी अलग है।
इसलिए, और अधिक बारीकी से मानव सेटिंग के समान और गंभीर बीमारी के लंबे समय तक चरण की जांच की अनुमति के लिए, हम एक माउस मॉडल कि क्या इतना व्यापक नसों में तरल पदार्थ प्रशासन और एंटीबायोटिक उपचार के रूप में मनुष्य, के लिए दिया के रूप में तीव्र गहन देखभाल की नकल करता विकसित की है, और जो की अनुमति देता है आदेश में इस तरह के पोषण का समर्थन के रूप में गंभीर बीमारी, के लंबे समय तक जीवित रहने के लिए चरण में सहायक देखभाल प्रशासन के लिए। इस प्रयोजन के लिए, हम CLP प्रेरित पूति के माउस मॉडल अनुकूलित, पूति के लिए सुनहरा मानक किया जा रहा है, और एक केंद्रीय शिरापरक लाइन जो तरल पदार्थ, पोषण और दवाओं के प्रशासन के लिए सक्षम बनाता रखा।
Protocol
Representative Results
Discussion
हम cecal ligation और पंचर विधि के संयोजन के तरल पदार्थ, ड्रग्स और पोषक तत्व प्रशासन के लिए एक केंद्रीय शिरापरक लाइन के उपयोग के साथ पूति के लिए प्रेरित करने से गंभीर बीमारी का एक और अधिक नैदानिक प्रासंगिक माउस…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
GVdB, via the University of Leuven (KU Leuven), receives long-term structural research support from the Methusalem Program funded by the Flemish Government (METH08/07) and holds a European Research Council Advanced Grant AdvG-2012-321670 from the Ideas Program of the European Union seventh framework program. SET received a Research Foundation-Flanders (FWO) Research Assistant Fellowship.
Materials
| Buprenorphine | Ecuphar | Vetergesic 0,3mg/ml | |
| C57BL/6 | Janvier labs | C57BL/6JRj | |
| colloids | Fresenius Kabi | Volulyte 6% | |
| crystalloids | Baxter | Plasmalyte a viaflo | |
| Ethilon 3.0 | Ethicon | F3211 | |
| Imipenem | MSD | Tienam 500mg powder for injection fluid | |
| Isoflurane | Eurovet | Iso-vet | |
| Ketamine | Eurovet | Nimatek 100mg/ml | |
| LocTite Super glue3 all plastics | Rectavit | 119818 | |
| Mersilk 3.0 | Ethicon | L192 | |
| Mersilk 5.0 | Ethicon | F682 | |
| Microrenathane .025 O.D." x .012 I.D." | Bioseb | MRE-025 | |
| olimel N7E | Baxter | ||
| PE10 – Polyethylene .011" x .024" | Instech Solomon | BTPE-10 | |
| PE-50 tubing .023"x.038" | Instech Solomon | BTPE-50 | |
| Rodent Swivel 20 G | Bioseb | RS-20G | |
| Ropivacaïne | Astrazenica | Naropin 2mg/ml | |
| Xylazine | VMD | Xylazine hydrochloride 2% |
References
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