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Article de méthode

Création d'un biorepository basé sur une clinique

6.4K vues

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DOI :

10.3791/55583

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29 mai 2017

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Dans cet article

Résumé

Les tumeurs cutanées sont souvent éliminées suite à la chirurgie micrographique de Mohs. Un protocole est décrit ici qui permet au personnel de soutien clinique de traiter et de stocker efficacement les échantillons de tumeur cutanée ( p. Ex., Carcinome épidermoïde, carcinome basique et mélanome) pour des applications en laboratoire en aval sans interférer avec les opérations cliniques.

Résumé

L'incidence du cancer de la peau ( p. Ex., Carcinome épidermoïde, carcinome basocellulaire et mélanome) a augmenté au cours des dernières années. On s'attend à ce qu'il y ait une demande parallèle pour les échantillons de tumeurs cutanées pour des études de recherche biomédicales. La disponibilité des tissus, cependant, est limitée en raison du coût de l'établissement d'un biorepository et du manque de protocoles disponibles pour l'obtention d'échantillons cliniques qui n'interfèrent pas avec les opérations cliniques. Un protocole a été établi pour collecter et traiter la tumeur cutanée et les échantillons de sang et de salive associés qui ont un impact minimal sur les procédures cliniques de routine à la date de la chirurgie de Mohs. Les échantillons de tumeurs sont recueillis et traités à partir de patients subissant leur première couche de chirurgie de Mohs pour des tumeurs malignes cutanées éprouvées par biopsie par l'histotechnologiste de Mohs. Le tissu normal adjacent est recueilli au moment de la fermeture chirurgicale. Des échantillons supplémentaires qui peuvent être collectés sont des écouvillons sanguins et buccales. En utilisant des échantillons de tissus qui sont normalement rejetés, un biorepository a été généré qui offre plusieurs avantages clés en étant basé dans la clinique par rapport au paramètre de laboratoire. Ceux-ci incluent une large gamme d'échantillons collectés; Accès aux dossiers de patients identifiés, y compris les rapports de pathologie; Et, pour le donneur typique, accéder à des échantillons supplémentaires lors des visites de suivi.

Introduction

La recherche sur le cancer et les biomarqueurs repose sur une offre d'échantillons de tissus humains de qualité, et une offre limitée a entravé la recherche 1 , 2 . De nombreuses études dermatologiques sont limitées par l'offre insuffisante, la qualité variable et les coûts associés à l'utilisation du tissu humain. Le coût de l'établissement d'une importante biobanche dédiée a été estimé à environ deux millions de dollars 3 , et ces coûts mettent l'utilisation des tissus humains hors de la portée de nombreux chercheurs. En outre, le processus de génération et de....

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Protocole

Toutes les expérimentations sur des échantillons de tissus humains ont été approuvées par l'IRB de l'Ouest (protocole WIRB n ° 20142461). Le critère unique pour la collecte des tissus pour ces procédures est un diagnostic éprouvé par biopsie de SCC. Aucun critère d'exclusion n'a été décrit dans le protocole IRB original, mais les échantillons de patients atteints d'une maladie transmissible transmissible par le sang connue n'ont pas été utilisés. Le consentement éclairé a été obtenu avant la collecte des tissus cutanés, du sang et de la salive. Midwestern Institutional Review Board a approuvé le travail de validation avec des échantillons de b....

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Résultats

La tumeur et l'ANT ont été utilisés avec succès dans l'isolement des protéines et testés par Western Blot. Comme le montre la figure 3 , les marqueurs de carcinomes épidermiques cutanés (Muc1 14 , FHL-1 15 et p40 16 , 17 ) peuvent être détectés dans des échantillons de patients collectés et stockés dans notre biorepository basé sur la clinique.

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Discussion

Pour la connaissance de l'auteur, ce protocole est le premier de son genre qui se concentre sur l'achat clinique d'échantillons de tissus cutanés dans une approche rentable et rapide. Les patients subissant une microchirurgie Mohs sont généralement programmés pendant des blocs de temps spécifiques, et la collecte est limitée à ces périodes. La collecte d'échantillons implique l'effort de l'assistant médical impliqué dans les soins aux patients, l'histotechnologue de Mohs qui traite les échant.......

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Déclarations de divulgation

Les auteurs n'ont rien à dévoiler.

Remerciements

Ce travail a été soutenu par des fonds du Collège de l'Université du Midwestern, Subvention de facilitation de la recherche en sciences de la santé, décerné à EEH, et Midwestern University, Bureau de la recherche et programmes sponsorisés Intramural Grant, décerné à KJL. Un soutien supplémentaire a été fourni par les Laboratoires Affiliés et la Dermatologie Affiliée. Nous remercions Sarah Potekhen, Jamie Barto, Stefani Fawks, Cody Jording, Stacie Schimke, Heather Kissel et Ali Zaidi pour leur assistance technique.

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Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
BD Vacutainer Tubes de prélèvement sanguin en plastique avec K3EDTAThermoFisher Scientific02-685-2B
Microscopie électronique Sciences Lames à double tranchantThermoFisher Scientific50-949-411
Pince à usage général incurvée à pointe moyenneThermoFisher Scientific16-100-110
Tubesde microcentrifugation de qualité supérieureThermoFisher Scientific05-408-138
Lonza Walkersville KGM Kératinocytes MediumThermoFisher ScientificNC9791321
Microscopie électronique Sciences Tissu TEK OCT CompoundThermoFisher Scientific50-363-579
Leica CM1950 CryostatLeica Biosystems14047743909
Lames de microscope givréesThermoFisher Scientific12-550-343
Shandon Rapid-Chrome H& E Kit de coloration de section congeléeThermoFisher Scientific99-900-01
Tubes cryogéniques de stockage à long terme NalgeneThermoFisher Scientific03-337-7X
Falcon 15 mL Tubes à centrifuger coniquesThermoFisher Scientific14-959-53A
Boca Scientific BuccalT-Swabsp ;ThermoFisher ScientificNC9679349
Cell Signaling Technology 10x RIPA BufferThermoFisher Scientific50-195-822
Arrêt Cocktail d’inhibiteurs de protéase et de phosphataseThermoFisher ScientificPI78443
Eppendorf 5424R MicrocentrifugeuseThermoFisher Scientific05-401-203
Mormortier à granulés Homogénéisateursans filThermoFisher Scientific12-141-3
Pilon à granulés sans RNAseThermoFisher Scientific121-141-364
Forma SteriCycle CO2Incubateur ThermoFisher Scientific13-998-089
HyClone Sérum de veau fœtalThermoFisher ScientificSH30071.02
Gibco Advanced DMEM/F-12ThermoFisher Scientific12-634-028
Gibco Pénicilline-StreptomycineThermoFisher Scientific15140148
Gibco 1 MHepes ThermoFisher Scientific15-630-130
Nunc Culture cellulaire 35 mm avec éventThermoFisher Scientific1256591 Clone d’anticorps
monoclonal anti-CFH OX-24AbnovaMAB12583
Anti-p40 (p63 delta) anticorpsAbnovaABX-144A
Anticorps anti MUC-1Santa Cruz Biotechsc-7313
Anti-Escargot + Limace (phospho S246)AbcamAb63568
Chèvre anti-lapin IgG, Alexa Fluor 488InvitrogenA-11034
Alexa Fluor 568 Sondes moléculaires Phallodin  ;A12380
ProLong Gold Montage anti-effacement avecsondes moléculaires DAPI  ;P36941
Microscope Zeiss Axio Imager Z1 avec caméra Axiocam ContrasteZeiss4300009901
Olympus IX51 avec caméra DP72OlympusIX511F3
de phase

Références

  1. Baker, M. Biorepositories: Building better biobanks. Nature. 486, 141-146 (2012).
  2. Ambrosone, C. B., Nesline, M. K., Davis, W. Establishing a cancer center data bank and biorepository for multidisciplinary research. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 15<....

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Réimpressions et autorisations

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