Dissectie van de alvleesklier muis voor histologisch analyse en metabole profilering
Summary
Dit video artikel vindt u een uitgebreide demonstratie van de procedures die nodig zijn om met succes de alvleesklier van een muis door dissectie voor histologisch analyse en metabole profilering.
Abstract
We hebben onderzocht de alvleesklier specifieke transcriptiefactor, 1a cre-recombinase; Lox-stop-lox-Kristen rat Sarcoom, glycine aan asparaginezuur op de 12 codon (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) stam muis als een model van menselijke pancreatic kanker. Het doel van onze lopende onderzoeken is het identificeren van de roman metabole biomarkers van pancreatic kanker progressie. Wij hebben uitgevoerd metabole profilering van urine, ontlasting, bloed, en alvleesklier weefsel extracten, evenals histologische analyses van de alvleesklier om de progressie van kanker te regisseren. De alvleesklier muis is niet een welomschreven solide orgel als bij de mens, maar is veeleer een diffuus gedistribueerde weke delen, dat is niet gemakkelijk geïdentificeerd door personen onbekend met interne anatomie van de muis of door personen die weinig of geen ervaring uitvoeren hebben muis orgel dissecties. Het doel van dit artikel is bedoeld als een gedetailleerde stapsgewijze visuele demonstratie bij beginners in de verwijdering van de alvleesklier muis door dissectie. Dit artikel moet vooral waardevol voor studenten en onderzoekers nieuw onderzoek waarvoor het oogsten van de alvleesklier muis door dissectie voor metabole profilering of histologische analyses.
Introduction
De muis heeft ontpopt als een belangrijke diermodel voor menselijke pancreatic kanker1,2. In de Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + muismodel, de Kristen rat Sarcoom (K-Ras) oncogen is geactiveerd uitsluitend in de alvleesklier, resulterend in de inleiding van voorstadia laesies in de alvleesklier, bekend als de alvleesklier geest neoplasias (PanINs), dat de vooruitgang aan alvleesklier ductaal adenocarcinomas, kortweg PDACs3. Deze muis modelsysteem biedt een van de beste beschikbare dierlijke modellen voor menselijke alvleesklierkanker4,5, met het bijkomende voordeel dat de PanINs ontstaan binnen de eerste vijf maanden van het leven en vaak vooruitgang PDAC binnen een Eén jaar4,5, overwegende dat alvleesklierkanker vaakst bij de mens 60-70 jaar oud optreedt.
Extractie van de alvleesklier door dissectie van de Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / + muizen op verschillende leeftijden voorziet in gedetailleerde longitudinale histopathologisch onderzoek van de ontwikkeling van kanker in de alvleesklier, variërend van de vroegste stadia van de PanIN de progressie tot PDAC3,4 , 5. de alvleesklier oogsten op leeftijden variërend van vijf tot vijftien maanden kan ook worden gebruikt om te bereiden weefsel extracten te karakteriseren van mondiale veranderingen in de alvleesklier4 metabolisme die zich tijdens de overgang van gezond naar zieke weefsel voordoen 6,7.
Dit artikel presenteert een complete visuele gids voor de stappen die nodig zijn voor het uitvoeren van een muis alvleesklier extractie en worden richtlijnen gegeven voor de opslag van een alvleesklier voor verdere analyse. Deze handleiding zullen even waardevol zijn voor individuen uitvoeren van onderzoek naar andere alvleesklier ziekten, met inbegrip van type I diabetes, en met name nuttig voor studenten en onderzoekers nieuw voor onderzoek waarbij oogsten moeten van het gebruik van de alvleesklier van de muis dissectie voor metabole profilering of histologische analyses.
Protocol
Representative Results
Discussion
Betekenis ten opzichte van bestaande methoden
Terwijl andere informele video’s van muis dissecties bestaan, deze video artikel levert de eerste professionele kwaliteit, peer reviewed, visuele demonstratie van alle gedetailleerde stappen nodig zijn voor de extractie en het oogsten van de alvleesklier muis door dissectie10 . Met de alvleesklier wordt een hoofdorgel voor metabole activiteit en insuline zorgt productie, dissectie en oogsten van de alvleesklier voor het behoud van d…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MAK erkent steun voor dit werk van de National Institutes of Health / National Cancer Institute verlenen nummer – 1R15CA152985-01A1. Dit project heeft ook ondersteund door de Miami University Undergraduate Research Award Program, de Miami University Doctor-Undergraduate mogelijkheden voor Scholarship Program en de Miami University zomerprogramma geleerden.
Materials
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
References
- Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).
- Jackson-Grusby, L. Modeling cancer in mice. Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).
- Heid, I., et al. Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer. Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).
- Hingorani, S. R., et al. Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse. Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).
- Shi, C., et al. KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin. Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).
- LaConti, J. J., et al. Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma. BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).
- Ludwig, M. R., et al. Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer. Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).
- Taylor, D. K., Mook, D. M. Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. A protocol for islet isolation from mouse pancreas. Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).
- Auer, H., et al. The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein. Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).
- Ma, J., Leung, L. S. Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics. Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).
- Ijichi, H., et al. Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression. Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).
- Abiatari, I., et al. Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer. J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).
- Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data. Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).
- Yadav, D., et al. Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection. Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).
