דיסקציה של הלבלב העכבר עבור ניתוח היסטולוגית והגדרת פרופיל מטבולי
Summary
המאמר וידאו מספק הפגנה מפורט של ההליכים הנדרשים בהצלחה להסיר בלבלב עכבר על-ידי ניתוח עבור ניתוח היסטולוגית והגדרת פרופיל מטבולי.
Abstract
לנו יש כבר חוקרת את הלבלב גורם שעתוק ספציפיים, 1a cre-recombinase; לקס-עצור-סלומון-קריסטן עכברוש סרקומה, גליצין כדי חומצה אספרטית-codon 12 (Ptf1acre / +; LSL-KrasG12D / +) העכבר זן כמודל של סרטן הלבלב אנושי. מטרת המחקר הנוכחי שלנו הוא לזהות סמנים מטבוליים חדשניים של התקדמות סרטן הלבלב. ערכנו פרופיל מטבולי של שתן, צואה, דם, ואת תמציות רקמת הלבלב, כמו גם ניתוחים היסטולוגית של הלבלב לביים את התקדמות סרטן. הלבלב העכבר אינו איבר מוצק מוגדר היטב כמו בבני אדם, אך מעדיף רקמה רכה diffusely מבוזרת לא בקלות המזוהה על-ידי אנשים מכירים את האנטומיה הפנימית העכבר או על ידי יחידים שיש להם מעט או ללא ניסיון ביצוע העכבר איברים והניתוחים. מטרת מאמר זה היא לספק מפורטת step-wise ויזואלית הפגנה מדריך טירונים להסרת הלבלב העכבר על ידי ניתוח. מאמר זה צריך להיות יקר במיוחד סטודנטים, חוקרים חדשים למחקר הדורש קציר בלבלב עכבר על-ידי ניתוח פרופיל מטבולי או ניתוחים היסטולוגית.
Introduction
העכבר התפתחה חשוב במודל חיה של סרטן הלבלב האנושי1,2. ב- Ptf1acre / +; LSL-קראסG12D / + דגם העכבר, קריסטן עכברוש סרקומה (K-Ras) אונקוגן מופעל באופן בלעדי הלבלב, וכתוצאה מכך חניכה של נגעים טרום סרטניים בלבלב, המכונה הלבלב neoplasias intraepithelial הנרתיק (PanINs), לזה ההתקדמות כדי אדנוקרצינומות ductal הלבלב, נפוץ המכונה PDACs3. מערכת מודל זה העכבר מספק אחד מהדגמים הכי זמין בבעלי חיים עבור סרטן הלבלב האנושי4,5, עם יתרון נוסף העולות PanINs בתוך בחמשת החודשים הראשונים של החיים ולעיתים קרובות התקדמות PDAC בתוך יחיד בן4,5, ואילו סרטן הלבלב מתרחשת לעתים קרובות ביותר בבני 60-70 שנים של גיל.
מיצוי של הלבלב על ידי ניתוח של Ptf1acre / +; LSL-קראסG12D / + עכברים בגילאים שונים מאפשרת בדיקה היסטולוגית האורך מקיפה של התפתחות סרטן הלבלב, החל בשלבים המוקדמים הייתה דרך ההתקדמות PDAC3,4 , 5. קצירת הלבלב בגילאים הנעים מ-5 עד חמישה עשר חודשים יכול לשמש גם כדי להכין טישו תמציות לאפיין שינויים כלליים בחילוף החומרים4 הלבלב להתרחש במהלך המעבר בריא רקמה חולה 6,7.
מאמר זה מציג מדריך ויזואלי מלא של כל השלבים הדרושים לביצוע חילוץ הלבלב של העכבר, מספקת קווים מנחים עבור אחסון פוג’אלאדוצ’נוי זהאלאזי לצורך ניתוח נוסף. מדריך זה יהיה שווה ערך עבור יחידים ניסוי על מחלות אחרות הלבלב, לרבות סוג של סוכרת, צריכה להיות שימושית במיוחד סטודנטים, חוקרים חדשים למחקר מעורבים קציר של הלבלב העכבר באמצעות ניתוח פרופיל מטבולי או ניתוחים היסטולוגית.
Protocol
Representative Results
Discussion
משמעות לגבי שיטות קיימות
בעוד אחרים קטעי וידאו לא רשמי של העכבר והניתוחים קיימים, המאמר וידאו מספק לאיכות המקצועית הראשונה, עמית שנסקרו, הדגמה ויזואלית של כל השלבים מפורט הנדרש לחילוץ קצירת בלבלב עכבר על-ידי דיסקציה10 . הקל להיות איבר הראשי עבור פעילות חילוף החומרים…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MAK מודה תמיכה עבור עבודה זו של מכוני הבריאות הלאומיים / מכון הסרטן הלאומי מעניק מספר – 1R15CA152985-01A1. פרויקט זה נתמך גם על ידי מיאמי באוניברסיטה לתואר ראשון מחקר פרס התוכנית, אוניברסיטת מיאמי דוקטורט-הסמכה הזדמנויות למילגות, של אוניברסיטת מיאמי מלומדים קייטנה.
Materials
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
References
- Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).
- Jackson-Grusby, L. Modeling cancer in mice. Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).
- Heid, I., et al. Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer. Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).
- Hingorani, S. R., et al. Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse. Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).
- Shi, C., et al. KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin. Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).
- LaConti, J. J., et al. Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma. BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).
- Ludwig, M. R., et al. Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer. Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).
- Taylor, D. K., Mook, D. M. Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. A protocol for islet isolation from mouse pancreas. Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).
- Auer, H., et al. The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein. Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).
- Ma, J., Leung, L. S. Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics. Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).
- Ijichi, H., et al. Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression. Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).
- Abiatari, I., et al. Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer. J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).
- Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data. Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).
- Yadav, D., et al. Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection. Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).
