Disseksjon av musen bukspyttkjertelen for histologiske analyse og metabolske profilering
Summary
Denne video artikkelen inneholder en detaljert demonstrasjon av prosedyrer må kunne fjerne bukspyttkjertelen fra mus ved disseksjon for histologiske analyse og metabolske profilering.
Abstract
Vi har vært å undersøke den bukspyttkjertelen bestemt transkripsjon faktor, 1a grobunn-recombinase; LOX-stopp-lox-Kristen rotte sarkomspesialitet, glysin til aspartic syre på 12 codon (Ptf1agrobunn / +; LSL-KrasG12D / +) mus belastning som modell av menneskelig bukspyttkjertelkreft. Målet med våre nåværende studier er å identifisere romanen metabolske biomarkers av bukspyttkjertelkreft progresjon. Vi har utført metabolske profilering av urin, avføring, blod, og bukspyttkjertelen vev ekstrakter, samt histologiske analyser av bukspyttkjertelen å iscenesette kreft progresjon. Musen bukspyttkjertelen er ikke et veldefinert solid organ som i mennesker, men er en diffusely distribuert mykt vev som ikke er lett identifisert av personer ukjent med musen innvendig anatomi eller enkeltpersoner som har liten eller ingen erfaring utfører musen orgel disseksjoner. Formålet med denne artikkelen er å gi en detaljert steg klokt visuell demonstrasjon lede nybegynnere i fjerning av musen bukspyttkjertelen ved disseksjon. Denne artikkelen bør være spesielt nyttig for studenter og etterforskere ny forskning som krever høsting av musen bukspyttkjertelen av disseksjon metabolske profilering eller histologiske analyser.
Introduction
Musen har dukket opp som en viktig dyr modell av menneskelig bukspyttkjertelkreft1,2. I Ptf1agrobunn / +; LSL-KrasG12D / + musemodell, Kristen rotte sarkomspesialitet (K-Ras) oncogene er aktivert i bukspyttkjertelen, resulterer i initiering av precancerous lesjoner i bukspyttkjertelen, kjent som bukspyttkjertelen intraepithelial neoplasias (PanINs), at fremgangen å bukspyttkjertelen ductal adenocarcinomas, ofte referert til som PDACs3. Mus modell systemet gir en av de beste tilgjengelige dyr modellene for menneskelig bukspyttkjertelkreft4,5, fordelen som PanINs oppstår i de første fem månedene av livet og ofte fremdriften til PDAC innenfor en enkelt år4,5, mens bukspyttkjertelkreft oppstår oftest hos mennesker 60-70 år.
Utvinning av bukspyttkjertelen av disseksjon fra Ptf1agrobunn / +; LSL-KrasG12D / + mus på ulike aldre gir detaljert langsgående histologiske undersøkelse av hudkreft i bukspyttkjertelen, alt fra de tidligste stadiene av PanIN gjennom progresjon til PDAC3,4 , 5. høsting bukspyttkjertelen i alder fra fem til femten måneder kan også brukes til å forberede vev ekstrakter som karakteriserer globale endringer i bukspyttkjertelen4 stoffskifte som oppstår under overgangen fra sunn til syke vev 6,7.
Denne artikkelen presenterer en komplett visuell guide av trinn kreves for å utføre en mus bukspyttkjertelen utvinning og gir retningslinjer for lagring av en bukspyttkjertelen for videre analyse. Denne guiden vil være like verdifulle for personer som utfører forskning på andre bukspyttkjertelen sykdommer, inkludert type I diabetes, og bør være spesielt nyttig for studenter og etterforskere ny forskning innvolvere høsting av musen bukspyttkjertelen ved hjelp disseksjon metabolske profilering eller histologiske analyser.
Protocol
Representative Results
Discussion
Betydning når det gjelder eksisterende metoder
Mens andre uformelle videoer av musen disseksjoner finnes, denne video artikkelen inneholder den første profesjonell kvaliteten, fagfellevurdert, visuell demonstrasjon av alle detaljerte trinn kreves for utvinning og høsting av musen bukspyttkjertelen av disseksjon10 . Med bukspyttkjertelen blir en viktigste organ for metabolsk aktivitet og insulin tillater produksjon, disseksjon og høsting av bukspyttkjertelen bevaring av fysi…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
MAK anerkjenner støtte for dette arbeidet fra National Institutes of Health National Cancer Institute støtte nummer – 1R15CA152985-01A1. Dette prosjektet har også blitt støttet av Miami universitetet Undergraduate Research Award programmet, Miami University doktorgrad-lavere mulighetene for stipendprogram og Miami University sommer Scholars Program.
Materials
| Glass Jar | Corning | 3140-150 | The glass jar used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| Lid of Glass Jar | Corning | 9985-150 | The glass jar lid used in the video has been discontinued. This is its replacement. |
| 15 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339650 | |
| Surgical Scissors | Fisher Scientific | 9201 | |
| Squeeze bottle | Fisher Scientific | 03-409-10DD | |
| 100% Ethanol | Fisher Scientific | 22-032-103 | |
| Formalin | Fisher Scientific | 245-684 | |
| Foam Boards | Therapak | 562908 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 200205SHN | |
| 1 mL 21G Syringes | BD Biosciences | 309624 | |
| 50 mL Falcon Tubes | Fisher Scientific | 339652 | |
| 2.0 mL Microcentrifuge Tubes | Fisher Scientific | 02-681-258 | |
| Surgical Pads | Fisher Scientific | S67011 | |
| T-Pins Length: 2" | Advance Store Products | X32T-05 | |
| Sterilizing Wipes | Professional Disposables International Inc. | Q85084 | |
| Sharps Container | Fisher Scientific | 14-827-122 | |
| Analytical Balance | Marshall Scientific | ME-AE200 | |
| 4L Dewar | Taylor-Wharton | 4LD | |
| Shallow Wide Mouth Dewar | Fisher Scientific | F3087-V | |
| Floating Microtube Rack | VWR | 60986-100 | |
| Cryogenic Vial 1.2 mL, Sterile | Fisher Scientific | 10-500-25 | |
| Isothesia (Isoflurane) | Henry Schein Animal Health | 050033 | |
| Liquid Nitrogen | Wright Brothers | NIT-60-XX | |
| Mouse Kras Strain | The Jackson Laboratory | OO8179 | |
| Mouse Cre Strain | MMRRC | OOO435-UNC |
References
- Fesinmeyer, M. D., Austin, M. A., Li, C. I., De Roos, A. J., Bowen, D. J. Differences in Survival by Histologic Type of Pancreatic Cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 14 (7), 1766-1773 (2005).
- Jackson-Grusby, L. Modeling cancer in mice. Oncogene. 21 (35), 5504-5514 (2002).
- Heid, I., et al. Early requirement of Rac1 in a mouse model of pancreatic cancer. Gastroenterology. 141 (2), 719-730 (2011).
- Hingorani, S. R., et al. Preinvasive and invasive ductal pancreatic cancer and its early detection in the mouse. Cancer cell. 4 (6), 437-450 (2003).
- Shi, C., et al. KRAS2 Mutations in Human Pancreatic Acinar-Ductal Metaplastic Lesions Are Limited to Those with PanIN Implications for the Human Pancreatic Cancer Cell of Origin. Mol Cancer Res. 7 (2), 230-236 (2009).
- LaConti, J. J., et al. Distinct serum metabolomics profiles associated with malignant progression in the KrasG12D mouse model of pancreatic ductal adenocarcinoma. BMC Genomics. 16 (1), 1-10 (2015).
- Ludwig, M. R., et al. Surveying the serologic proteome in a tissue-specific kras(G12D) knockin mouse model of pancreatic cancer. Proteomics. 16 (3), 516-531 (2016).
- Taylor, D. K., Mook, D. M. Isoflurane Waste Anesthetic Gas Concentrations Associated with the Open-Drop Method. J Am Assoc Lab Anim Sci. 48 (1), 61-64 (2009).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. J Pharmacol Pharmacother. 1 (2), 87-93 (2010).
- Li, D. S., Yuan, Y. H., Tu, H. J., Liang, Q. L., Dai, L. J. A protocol for islet isolation from mouse pancreas. Nature Protocols. 4 (11), 1649-1652 (2009).
- Auer, H., et al. The effects of frozen tissue storage conditions on the integrity of RNA and protein. Biotech Histochem. 89 (7), 518-528 (2014).
- Ma, J., Leung, L. S. Limbic System Participates in Mediating the Effects of General Anesthetics. Neuropsychopharmacology. 31, 1177-1192 (2006).
- Ijichi, H., et al. Aggressive pancreatic ductal adenocarcinoma in mice caused by pancreas-specific blockade of transforming growth factor-β signaling in cooperation with active Kras expression. Genes Dev. 20 (22), 3147-3160 (2006).
- Abiatari, I., et al. Moesin-dependent cytoskeleton remodelling is associated with an anaplastic phenotype of pancreatic cancer. J Cell Mol Med. 14 (5), 1166-1179 (2010).
- Goodpaster, A. M., Romick-Rosendale, L. E., Kennedy, M. A. a Statistical significance analysis of nuclear magnetic resonance-based metabonomics data. Analytical biochemistry. 401, 134-143 (2010).
- Yadav, D., et al. Idiopathic Tumefactive Chronic Pancreatitis: Clinical Profile, Histology, and Natural History After Resection. Clin Gastroenterol Hepatol. 1 (2), 129-135 (2003).
