Bitkisel Tıbbın Hazırlanması: Er-Xian Kaynatma ve Er-Xian içeren Serum<emIn vivo</emVe<em> In vitro</em> Deneyler
Summary
Burada, erüe, ekstraksiyon, filtrasyon ve konsantrasyon olmak üzere dört basamakta bir er-xian ekstraksiyonunun (EXD) hazırlanması ve hazırlanmış bir EXD içeren serumun sıçanlara uygulanmasını gösteriyoruz. Bu yöntemler, geleneksel Çin ilaçları gibi bitkisel dekompozisyonların in vivo ve in vitro çalışması için geçerlidir.
Abstract
Klinik ortamda alternatif bir ilaç olan geleneksel bitki tıbbı, son yıllarda artan bir ilgi görmüştür. Vücutta teslim edilmeden önce, aktif çiğneme maddelerini çiğ otlardan ayırmak için ek bir ekstraksiyon prosedürü yaygın olarak gereklidir. Su dekompozisyonu, klinik ortamda halen yaygın olarak kullanılan klasik bir ekstraksiyon prosedürüdür. Burada, deneysel araştırmalara bitki özütleri uygulamak için er-xian kaynatma işlemi (EXD) için ayrıntılı bir protokol önermekteyiz. Hayvana uygun doz hesaplamanın yanı sıra EXD'nin dört ana aşamasını açıklar: ıslatma, su dekompozisyonu, filtrasyon ve konsantrasyon. Buna ek olarak, serum içeren EXD, in vitro doğrulama aracı olarak farelere verilir. Burada sıçanlar oral yoldan üç gün süreyle EXD ile tedavi edildi. Daha sonra kan numuneleri toplandı, inaktive edildi, santrifüj edildi ve filtrelendi. Kültür ortamı ile seyreltilmiş serum, v'de hücreleri veya dokuları tedavi etmek için kullanılabilirItro. Örneğin, EXD, hem in vivo hem de in vitro çalışmalarda uygulanmış ve EXD'nin osteojenezi arttırdığını göstermiştir. Bu protokol bitkisel ilaçların hazırlanması ve uygulanması için referans olarak kullanılabilir.
Introduction
Çalışmaya ve geleneksel bitkisel tıbbın uygulanmasına olan ilgi günümüzde artmaktadır. Kimyasal maddelerin kesin olduğu modern ilaçların aksine bitkisel formüllerin bilinmeyen bazı bileşenleri vardır ve aktif bileşiklerinin verilmesini sağlamak için ekstraksiyon işlemleri gerektirir. Çoğu araştırma, bütün ot veya bitkisel formülün temsilcisi olarak iyi bilinen bir yapıya sahip küçük bir bileşik seçmeye çalışsa da, ne farmakolojik etkinlikler ne de mekanizmalar eşdeğer 1 , 2 olarak kabul edilemez. Parmak izi kompleks bitkisel formüllerin bileşenlerini analiz etmeyi sağlarken, bazı bileşenler hala net bir şekilde analiz edilmediğinden, çalışma 3 için tüm özütleri birleştirirken bir meydan okumaya neden olur. Çok sayıda bileşenin / ekstraktların etkileşimleri, bitkisel ilaçların terapötik etkilerine aracılık eder. Bu avantajı korumak için, geleneksel ekstrakt form-dekoctİyon hala klinikte yaygın olarak kullanılmaktadır. Ekstrakt prosedürü, terapötik etkinlik üzerinde büyük bir etkiye sahip olduğu için, özellikle in vivo çalışmalar için 4 , 5 için geleneksel su sıkılmasının standart bir protokolü gereklidir.
Öte yandan, farmakolojik mekanizmaları araştırırken, in vitro veya ex vivo çalışmalar sırasında bitkisel açma maddelerinin uygulanması da bir mücadeledir. İlaç içeren serumun konsepti ilk kez Tashino tarafından 1988'de 6 önerildi. O zamandan beri, artan sayıda araştırmacı onu bitkisel ilaç 7 , 8 , 9'a uyguladı. İlaç içeren serumun metodu, serumun belli bileşenlerinin etkisi gibi bazı kısıtlamalara sahip olmakla birlikte, fizyolojik koşulları yakından taklit eden bir yöntem olarak kabul edilmektedir.
<p class="Jove_content"> Er-xian kaynatma menopoz semptomlarını hafifletmek için 1950'lerin başında geliştirildi 10,11,12,13. Ayrıca aplastik anemi 14 , menopoz osteoporozu 15 , 16 , 17 , prematür over yetmezliği 18 , meme kanseri 19 , yumurtalık kanseri 20 ve ertelenmiş ergenlik 21'in tedavisinde de uygulanmıştır. Burada, er-xian ekstraksiyonunun (EXD) ve ilacı içeren serumun hazırlanması için ayrıntılı protokoller sunuyoruz. Buna ek olarak, fare menopoz osteoporotik modellerine EXD ve EXD içeren serumun uygulanmasını açıklıyoruz.Bir EXD, 9 gr Curculigo orchioides Gaertn , Herbaa Epimedii'den oluşur </eM>, Radix Morindae Officinalis ve Radix Angelicae Sinensis ve her biri yetişkin hasta başına günde 6 g Cortex Phellodendri ve Rhizoma Anemarrhenae . Bir fare için eşdeğer doz, aşağıdaki denklem 22'ye dayanılarak 0.1418 EXD / kg / gün'dür: dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . DA ve dB, sırasıyla insan ve fare vücut ağırlığı başına doz (mg / kg) anlamına gelir. Dozun mg / kg olarak, EXD / kg sayısı ile değiştirilir. RA ve RB sırasıyla vücut yüzey alanı (m 2 ) / vücut ağırlığı (kg) ile orantılı insan vücut faktörünü ve fare gövde faktörünü temsil eder) 2/3 (Bkz. Tablo 1 ). WA ve WB sırasıyla insan ve fare vücut ağırlığını (kg) gösterir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Son yıllarda binlerce yıldır Doğu dünyasında klinik ortamda uygulanan alternatif tıp türlerinden biri olan bitkisel ilaçlara daha fazla önem verilmektedir. Modern tıbbın "tezgahdan tezgah" deseninden farklı olarak, geleneksel bitkisel tıbbın ilk önce kendi mekanizmalarını açıklamak için "tezgah yatağı" örneğini gerektirir. Bunu, tezgah aşamasında yapılan doğrulama ve yeni optimize edilmiş ilaçların geliştirilmesi için işleme takip edilebilir. Şu ana kadar, bütün …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81573992) tarafından desteklenmiştir. Dil düzenleme yardımı için Emily K. Lo ve Kathleen DiNapoli'ye teşekkür ediyoruz.
Materials
| Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), and Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) | 160922 | EXD components |
| Filter paper | GElifesciences | 99-103-952 | Filter EXD decoction before concentration |
| Imprinting Control Region (ICR) mice | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | In vivo study |
| Sprague Dawley rats | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | EXD-containing serum preparation |
| Syringe filter | Millipore | SLGP033RB | 0.22 µm |
| gavage needles (10 ml) | Shanghai BO Ge trade sales department | 59104274 | Adminstration of EXD |
| Ketamine (80 mg/kg) | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | Anesthesia |
| Xylazine (10 mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anesthesia |
| Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco (DMEM) culture medium | Gibco | 12800-116 | DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides |
| Streptomycin | Sigma | 1277 | 100 µg / ml |
| Penicillin | Sigma | 4687 | 100 µg / ml |
References
- Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes. J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).
- Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T. The role of the seven crude drug components in the sleep-promoting effect of Yokukansan. J Ethnopharmacol. 177, 19-27 (2016).
- Kim, J. H., Doh, E. J., Lee, G. Evaluation of Medicinal Categorization of Atractylodes japonica Koidz. by Using Internal Transcribed Spacer Sequencing Analysis and HPLC Fingerprinting Combined with Statistical Tools. Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 2926819 (2016).
- Sheridan, H., et al. The potential of metabolic fingerprinting as a tool for the modernisation of TCM preparations. J Ethnopharmacol. 140 (3), 482-491 (2012).
- Planas, G. M., Kucacute, J. Contraceptive Properties of Stevia rebaudiana. Science. 162 (3857), 1007 (1968).
- Tashino, S. “Serum pharmacology” and “serum pharmaceutical chemistry”: from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood. Ther Drug Monit Res. 5, 54-64 (1988).
- Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha-induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway. Exp Ther Med. 8 (3), 998-1004 (2014).
- Fu, L., et al. Ex Vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum. Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 7380439 (2016).
- Chen, X., et al. Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine. Chin J Integr Med. 20 (6), 450-455 (2014).
- Sze, S. C., et al. A novel mechanism: Erxian Decoction, a Chinese medicine formula, for relieving menopausal syndrome. J Ethnopharmacol. 123 (1), 27-33 (2009).
- Sze, S. C., et al. Effects of Erxian decoction, a Chinese medicinal formulation, on serum lipid profile in a rat model of menopause. Chin Med. 6, 40 (2011).
- Zhong, L. L., et al. A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women. Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).
- Wang, S. W., et al. Steroidogenic effect of Erxian decoction for relieving menopause via the p-Akt/PKB pathway in vitro and in vivo. J Ethnopharmacol. , (2016).
- Lin, L., Wu, S., Tang, J. [Clinical observation and experimental study of the treatment of aplastic anemia by warming and tonifying the spleen and kidney]. Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 10 (5), 272-274 (1990).
- Nian, H., et al. Antiosteoporotic activity of Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in ovariectomized rats. J Ethnopharmacol. 108 (1), 96-102 (2006).
- Qin, L., et al. Antiosteoporotic chemical constituents from Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula. J Ethnopharmacol. 118 (2), 271-279 (2008).
- Xue, L., et al. A HNMR-based metabonomics study of postmenopausal osteoporosis and intervention effects of Er-Xian Decoction in ovariectomized rats. Int J Mol Sci. 12 (11), 7635-7651 (2011).
- Lu, X. N., Xu, X. R., Lin, L. J. [Clinical observation of bushen er’xian decoction in treating premature ovarian failure]. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 28 (7), 594-596 (2008).
- Yu, X., et al. Anti-angiogenic activity of Erxian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in zebrafish. Biol Pharm Bull. 35 (12), 2119-2127 (2012).
- Chu, E. S., et al. An in vitro and in vivo investigation of the antimetastatic effects of a Chinese medicinal decoction, erxian decoction, on human ovarian cancer models. Integr Cancer Ther. 12 (4), 336-346 (2013).
- Zhu, Z., Li, L., Jin, X., Fang, J., Zhang, D. Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, intervening early in hypothalamic-pituitary axis of male rats with delayed puberty. Pharmacogn Mag. 10 (40), 517-521 (2014).
- Miao, M. S. . Experimental animals and technology. 1997, 145 (1997).
- Soleimani, M., Nadri, S. A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow. Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).
- Lu, S., Huang, J., Wang, J., et al. Er-Xian Decoction Stimulates Osteoblastic Differentiation of Bone Mesenchymal Stem Cells in Ovariectomized Mice and Its Gene Profile Analysis. Stem Cells International. 2016, 4079210 (2016).
- Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).
- Wu, C., et al. Simultaneous determination of seven flavonoids in dog plasma by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to a bioequivalence study of bioactive components in Herba Epimedii and Er-Xian Decoction. J Pharm Biomed Anal. 54 (1), 186-191 (2011).
- Hu, Y. M., et al. Identification of the major chemical constituents and their metabolites in rat plasma and various organs after oral administration of effective Erxian Decoction (EXD) fraction by liquid chromatography-mass spectrometry. Biomed Chromatogr. 24 (5), 479-489 (2010).
- Xue, L., et al. Effects and interaction of icariin, curculigoside, and berberine in er-xian decoction, a traditional chinese medicinal formula, on osteoclastic bone resorption. Evid Based Complement Alternat Med. , (2012).
- Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human. J Basic Clin Pharm. 7 (2), 27-31 (2016).
- Xu, X., et al. Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats. Int J Clin Exp Med. 8 (2), 1768-1779 (2015).
- Li, Z., Wang, J. On the methods for Chinese herbs serum pharmcology. Zhong Guo Zhong Yi Yao Xing Xi Za Zhi. 9 (2), 5-6 (2002).
- Jiang, Y. R., et al. Effect of chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors’ expression in endothelial cells. Chin J Integr Med. 18 (1), 30-33 (2012).
- Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. [Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway]. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).
- Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells]. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).
- Li, Y. K. [Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology]. Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).
- Zhang, L., et al. [A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study]. Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).
- Zhang, D. [Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology]. Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).
