약초의 준비 : Er-Xian의 달임과 Er-Xian 함유 세럼<em> In Vivo</em> 및<em> 체외에서</em> 실험
Summary
여기에서는 4 가지 단계 (담금질, 달인, 여과 및 농축)의 erxian decoction (EXD) 준비 과정을 제시하고 준비된 EXD 함유 혈청을 쥐에게 투여하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 생약과 생체 외 연구에 적용 할 수 있습니다.
Abstract
임상 약제로 사용되는 대체 의학 인 한약은 최근 몇 년 동안 주목을 받아 왔습니다. 인체에 전달하기 전에 원료 약초에서 활성 성분을 방출하기 위해 일반적으로 추가 추출 절차가 필요합니다. 수분 섭취는 여전히 임상 환경에서 광범위하게 사용되는 고전적인 추출 과정입니다. 여기에서는 실험적 연구에 약초 즙을 적용하기 위해 erxian decoction (EXD)에 대한 상세한 프로토콜을 제안합니다. EXD의 4 가지 주요 단계 (수적, 수분 섭취, 여과 및 농축)뿐만 아니라 동물에 적합한 용량의 계산이 기술되어있다. 또한, 혈청 함유 EXD는 생체 외 검증을위한 수단으로 쥐에게 도입됩니다. 여기에 쥐에게 EXD를 3 일간 경구 투여 하였다. 혈액 샘플을 채취하고, 불 활성화시키고, 원심 분리하고, 여과시켰다. 배양 배지로 희석 된 혈청은 세포 또는 조직 을 vitro. 예를 들어, EXD는 in vivo 및 in vitro 연구에 모두 적용되었으며 EXD가 골 형성을 향상시키는 것으로 나타났습니다. 이 프로토콜은 약초의 제조 및 응용에 대한 참고 자료로 사용할 수 있습니다.
Introduction
전통적인 약초의 연구와 응용에 대한 관심이 현재 커지고 있습니다. 화학 성분이 확실한 현대 의약품과는 달리, 허브 성분에는 미지 성분이 포함되어 있으며 활성 성분을 전달할 수 있도록 추출 과정이 필요합니다. 많은 연구가 잘 알려진 구조를 가진 하나의 작은 화합물을 전체 약초 또는 허브 공식의 대표자로 선택하려고 시도하지만 약리학 적 효능이나 메커니즘은 동등한 것으로 간주 될 수 없다. 핑거 프린팅 (fingerprinting)은 복잡한 허브 수식의 구성 성분을 분석 할 수 있지만, 일부 성분은 아직 명확하게 분석되지 않아 연구 3에서 모든 추출물을 결합 할 때 어려움을 겪습니다. 수많은 성분 / 추출물의 상호 작용은 약초의 치료 효과를 중재합니다. 이러한 장점을 유지하기 위해 전통적인 추출물 형태이온은 여전히 클리닉에서 널리 사용됩니다. 추출 과정은 치료 효능에 큰 영향을 미치기 때문에, 특히 생체 내 연구 4,5 에서 전통적 물 추출법의 표준 프로토콜이 필요합니다.
반면에, 약리학 적 기작을 탐색 할 때, 생체 외 또는 생체 외 연구 중에 약초를 처치하는 것은 도전 과제입니다. 약물 함유 혈청의 개념은 1988 년 Tashino에 의해 처음 제안되었다. 그 이후로 점점 많은 연구자들이 한약 7 , 8 , 9 에 그것을 적용 해왔다. 약물 함유 혈청의 방법은 혈청의 특정 성분의 영향과 같은 몇 가지 제한이 있지만, 여전히 생리 학적 조건을 밀접하게 모방하는 방법으로 간주됩니다.
<p class="jove_content"> er-xian 달임은 갱년기 증상 10 , 11 , 12 , 13 을 완화하기 위해 1950 년대 초에 개발되었습니다. 또한 재생 불량성 빈혈 14 , 폐경기 골다공증 15 , 16 , 17 , 조기 난소 부전 18 , 유방암 19 , 난소 암 20 및 사춘기 지연 21에도 적용 되었습니다. 여기, 우리는 에르 – 시안 (erxian) 추출 (EXD)과 그 약물 함유 혈청의 제조를위한 상세한 프로토콜을 제시합니다. 또한 폐경기 골다공증 모델에 EXD 및 EXD를 함유 한 혈청을 적용하는 방법을 설명합니다.EXD는 Curculigo orchioides Gaertn , Herba Epimedii </eRadix Morindae Officinalis , Radix Angelicae Sinensis , Cortex Phellodendri 및 Rhizoma Anemarrhenae 각각 6 g을 하루에 성인 1 인당 투여한다. 마우스의 등가 선량은 다음 식 22 에 따라 0.1418 EXD / kg / day입니다. dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . dA와 dB는 각각 사람과 마우스의 체중 당 투여 량 (mg / kg)을 의미합니다. 용량 (mg / kg)은 EXD / kg의 수로 대체됩니다. RA와 RB는 각각 신체 표면적 (m 2 ) / 체중 (kg) 2/3 ( 표 1 참조)에 비례하는 인간 신체 계수와 마우스 몸 계수를 나타냅니다. WA 및 WB는 각각 사람 및 마우스의 체중 (kg)을 나타낸다.
Protocol
이 프로토콜은 상하이 한의대의 동물 관리 지침을 따르며 동물 실험 상하이 동물 윤리위원회의 승인을 받았습니다. 1. 프로토콜 I : EXD 준비 계산 EXD를 6 주령의 ICR (female Imprinting Control Region) 마우스 (0.02 kg / mouse) 10 마리의 치료 그룹에 12 주 동안 주 5 회 투여하십시오. 참고 : 총 1.702 EXD가 필요합니다. EXD는 개별 증분으로 측정되기 때문에 실제?…
Representative Results
EXX가 OVX 마우스의 골밀도에 미치는 영향 요추 척수 절편의 Hematoxylin과 eosin (H & E) 염색은 OVX 군 ( 그림 1A , 왼쪽 패널)과 비교하여 생체 내 EXD 치료 후 증가 된 골소주 ( 그림 1A , 오른쪽 패널)를 보여줍니다. 그림 1B 는 OVX 마우스 ( 그림 1B , 왼쪽 패널)와 EXX 치료 12 주 ( <st…
Discussion
최근 몇 년 동안 동부 지역의 임상 환경에서 수천 년 동안 적용 되어온 대체 의학의 한 유형 인 한약에 많은 관심이 쏟아졌습니다. 전통적인 약초 의학은 현대 의학의 "벤치에서 침대로"패턴과는 달리 처음에는 "bed to bench"패턴을 통해 자신의 메커니즘을 설명해야합니다. 이것은 벤치 단계에서 수행 된 검증과 새로 최적화 된 약물의 개발을위한 처리에 이어 수행 될 수 있습니다. 지?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 중국 국립 자연 과학 재단 (81573992)의 지원을 받았다. 그들의 언어 편집 지원에 대해 Emily K. Lo와 Kathleen DiNapoli에게 감사드립니다.
Materials
| Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), and Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) | 160922 | EXD components |
| Filter paper | GElifesciences | 99-103-952 | Filter EXD decoction before concentration |
| Imprinting Control Region (ICR) mice | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | In vivo study |
| Sprague Dawley rats | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | EXD-containing serum preparation |
| Syringe filter | Millipore | SLGP033RB | 0.22 µm |
| gavage needles (10 ml) | Shanghai BO Ge trade sales department | 59104274 | Adminstration of EXD |
| Ketamine (80 mg/kg) | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | Anesthesia |
| Xylazine (10 mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anesthesia |
| Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco (DMEM) culture medium | Gibco | 12800-116 | DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides |
| Streptomycin | Sigma | 1277 | 100 µg / ml |
| Penicillin | Sigma | 4687 | 100 µg / ml |
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Citer Cet Article
Liu, S., Sun, Y., Li, J., Dong, J., Bian, Q. Preparation of Herbal Medicine: Er-Xian Decoction and Er-Xian-containing Serum for In Vivo and In Vitro Experiments. J. Vis. Exp. (123), e55654, doi:10.3791/55654 (2017).