Här presenterar vi förberedelsen av ett er-xian-avkok (EXD) i fyra steg, blötläggning, avkok, filtrering och koncentration – och demonstrera administrering av ett preparerat EXD-innehållande serum till råttor. Dessa metoder är tillämpliga på in vivo och in vitro- studier av växtbaserade dekoktioner, såsom traditionella kinesiska läkemedel.
Traditionell örtmedicin, ett alternativt läkemedel i klinisk miljö, har fått ökad uppmärksamhet de senaste åren. Före leverans till kroppen krävs en extra extraktionsprocedur för att frigöra de aktiva beståndsdelarna från råa örter. Vattendekok är ett klassiskt extraktionsförfarande som fortfarande används i stor utsträckning i de kliniska inställningarna. Här föreslår vi ett detaljerat protokoll för er-xian-avkok (EXD) för att applicera växtbaserade dekoktioner till experimentella studier. Beräkningen av en djuranpassad dos beskrivs, liksom de fyra huvudstegen i EXD: blötläggning, vattendekoktion, filtrering och koncentration. Dessutom introduceras seruminnehållande EXD till råttor som ett medel för in vitro validering. Här administrerades råttor EXD under tre dagar. Blodprover uppsamlades sedan, inaktiverades, centrifugerades och filtrerades. Serumet, utspätt med odlingsmediet, kan användas för att behandla celler eller vävnader i vItro. Exempelvis applicerades EXD på både in vivo och in vitro studier och visade att EXD förbättrar osteogenes. Detta protokoll kan användas som referens för beredning och användning av växtbaserade läkemedel.
Intresset för studier och tillämpning av traditionell växtbaserad medicin växer för närvarande. I motsats till moderna läkemedel, där kemiska ingredienser är bestämda, har örtformler vissa okända ingredienser och kräver extraktionsprocesser för att möjliggöra leverans av deras aktiva föreningar. Även om många studier försöker välja en liten förening med en välkänd struktur som representant för hela ört- eller örtformeln, kan varken farmakologiska effekter eller mekanismer betraktas som ekvivalenta 1 , 2 . Medan fingeravtryck gör det möjligt att analysera beståndsdelarna i komplexa örtformler analyseras vissa beståndsdelar fortfarande inte tydligt, vilket leder till en utmaning när man kombinerar alla extrakt för studie 3 . Samspelet mellan många beståndsdelar / extrakt förmedlar de terapeutiska effekterna av växtbaserade läkemedel. För att behålla denna fördel, den traditionella extrakt form-decoctJon-används fortfarande ofta i kliniken. Eftersom extraktförfarandet har stor inverkan på den terapeutiska effekten är ett standardprotokoll av traditionellt vattenavkok nödvändigt, särskilt för in vivo- studierna 4 , 5 .
Å andra sidan, när man undersöker farmakologiska mekanismer, är administreringen av växtbaserade dekoktioner under in vitro eller ex vivo studier också en utmaning. Konceptet av ett läkemedelsinnehållande serum föreslogs först av Tashino 1988 5 . Sedan dess har ökande antal forskare tillämpat det på växtbaserade läkemedel 7 , 8 , 9 . Även om metoden för läkemedelsinnehållande serum har vissa begränsningar, såsom påverkan av vissa komponenter i serumet, anses det fortfarande vara en metod som nära efterliknar fysiologiska förhållanden.
<p class="Jove_content"> Det-xian-avkoket utvecklades i början av 1950-talet för att lindra menopausala symptom 10 , 11 , 12 , 13 . Det har också applicerats på behandling av aplastisk anemi 14 , menopausal osteoporos 15 , 16 , 17 , för tidigt ovariefel 18 , bröstcancer 19 , ovariecancer 20 och fördröjd pubertet 21 . Här presenterar vi detaljerade protokoll för beredning av både er-xian-avkoket (EXD) och dess läkemedelsinnehållande serum. Dessutom beskriver vi tillämpningen av EXD och EXD-innehållande serum till murina menopausala osteoporotiska modeller.En EXD består av 9 g av Curculigo orchioides Gaertn , Herbaa Epimedii </eM> Radix Morindae Officinalis och Radix Angelicae Sinensis och 6 g av Cortex Phellodendri och Rhizoma Anemarrhenae per vuxen patient per dag. Den ekvivalenta dosen för en mus är 0,1418 EXD / kg / dag baserat på följande ekvation 22 : dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . DA och dB avser dosen per kroppsvikt (mg / kg) hos människa respektive mus. Dosen i mg / kg ersätts med antalet EXD / kg. RA och RB representerar den mänskliga kroppsfaktorn respektive muskroppsfaktorn som är proportionella mot kroppsytan (m 2 ) / kroppsvikt (kg)) 2/3 (se tabell 1 ). WA och WB indikerar kroppsvikt (kg) av människa respektive mus.
Under senare år har mer uppmärksamhet ägnats åt växtbaserade läkemedel, en typ av alternativ medicin som har tillämpats i kliniska miljöer i östvärlden i tusentals år. Olika från "bänk till säng" -mönster av modern medicin kräver traditionell örtmedicin först "bänk till bänk" för att förklara deras mekanismer. Detta kan följas av validering utförd vid bänktalet och bearbetning för utveckling av nyoptimerade droger. Hittills finns det flera utvinningsmetoder som har rapporter…
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av National Natural Science Foundation of China (81573992). Vi tackar Emily K. Lo och Kathleen DiNapoli för deras språkredigeringshjälp.
Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), and Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) | 160922 | EXD components |
Filter paper | GElifesciences | 99-103-952 | Filter EXD decoction before concentration |
Imprinting Control Region (ICR) mice | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | In vivo study |
Sprague Dawley rats | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | EXD-containing serum preparation |
Syringe filter | Millipore | SLGP033RB | 0.22 µm |
gavage needles (10 ml) | Shanghai BO Ge trade sales department | 59104274 | Adminstration of EXD |
Ketamine (80 mg/kg) | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | Anesthesia |
Xylazine (10 mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anesthesia |
Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco (DMEM) culture medium | Gibco | 12800-116 | DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides |
Streptomycin | Sigma | 1277 | 100 µg / ml |
Penicillin | Sigma | 4687 | 100 µg / ml |