Echocardiographic 시험 쥐에서 자주 사용 됩니다. 비싼 고해상도 초음파 장치가이 목적을 위해 개발 되었습니다. 이 프로토콜에서는 심장 형태를 결정 하는 조직학 형태학 분석 함께 저렴 한 echocardiographic 절차를 설명 합니다.
유전자 변형된 마우스 모델의 증가 최근 몇 년 동안에서 가능한 되고있다. 또한, 약리 연구에서 쥐의 수는 높다. 이 마우스 모델의 phenotypic 특성에는 심장 기능과 형태학의 검사를 필요합니다. 심장 초음파 및 자기 공명 영상 (MRI)은 심장 기능과 마우스 형태학 특성을 일반적으로 사용 되 접근법입니다. Echocardiographic 및 MRI 장비 전문 사용 작은 설치류에 비싼 하 고 전용된 공간이 필요 합니다. 이 프로토콜 15 MHz 인간의 혈관 프로브 임상 echocardiographic 시스템을 사용 하 여 마우스에 심장 측정을 설명 합니다. 측정은 마 취 성인 쥐에 수행 됩니다. 적어도 3 개의 이미지 시퀀스는 기록 하 고 parasternal 짧은 축 보기에서 M 모드에서 각 동물에 대 한 분석. 나중에, 심장 조직학 검사 수행 및 cardiomyocyte 직경 hematoxylin에 결정 됩니다-오신-또는 밀 세균 agglutinin (WGA)-파라핀 섹션 스테인드. 배 밀도 Pecam-1 immunostaining 후 결정된 morphometrically입니다. 프로토콜 약리 연구에 성공적으로 적용 하 고 다른 유전 동물 모델의 왼쪽된 앞쪽 내림차순 관상 동맥 (영구 결 찰 하 여 실험적인 심근 경색 후에 뿐만 아니라 초기 조건 되었습니다. 젊은이)입니다. 우리의 경험에서는, echocardiographic 조사 마 취 동물에 제한 되 고 적어도 무게 성인 쥐에 가능 25 g.
유전자 변형된 마우스 모델의 큰 다양 한 사용할 수 있습니다, 하 고 약리 연구에서 쥐의 수는 높은1,2. 심장 초음파 및 MRI은 심장 기능과 형태학이 마우스 모델3의 phenotypic 특성 일반적으로 사용 되 접근법입니다. 제시 프로토콜의 목적은 심장 기능과 성인 쥐에 형태 분석입니다. 그것은 echocardiographic, 조직학, 결합 및 immunohistochemical 측정. Echocardiographic 시험 쥐4,5,6,7,,89,10,11에서 널리 이용 된다 12. Pachon 외. 11 식별 205 연구 2012과 2015 사이의 순환, 순환 연구, 미국의 저널의 생리-심 혼과 순환 상 생리학, 및 심장 혈관 연구 에 게시 동물에 echocardiographic 검사를 사용합니다.
심장 초음파는 심장 고기 유전자 변형된 쥐5,6,13,,1415,16, 를 식별 하는 데 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22, 또한 만성 과부하 유발 비 대, 심근 허 혈, 및 쥐 (12에서 검토) 심장 근육 병 증 모델에서 심장 기능 분석으로. 향상 된 심장 초음파 장비에 대 한 수는 왼쪽 심 실 (LV) 수축 기 및 diastolic 차원, 조직 도플러 영상, 심근 대비 진단법, 그리고 라스베가스 지역 기능과 관상 예비 의 평가의 표준 측정 12. 이상적으로, echocardiographic 시험 수축 기능, 자율 반사 제어에 마 취의 부정적인 영향을 피하기 위해 의식 쥐에서 수행 해야 하 고 심장 속도11. 그럼에도 불구 하 고,이 방법은 동물; 훈련 요구에 의해 제한 됩니다. 안정적인; 체온 유지에 어려움 운동 유물; 스트레스; 매우 높은 심장 주파수; 그리고 동물의 많은 수는 조사 하는 경우에 특히 실험을 수행 하기 위해 두 개 이상의 조사에 대 한 요구 사항. 흥미롭게도, 최근 연구 보고 훈련 하 고 훈련 되지 않는 동물19에 echocardiographic 매개 변수에서 차이가. 우리는 마 취 쥐에 echocardiographic 측정을 수행합니다. 다른 마 취 프로토콜 아래에 설명 될 것 이다.
비록 표준 해상도 심장 초음파 (> 10 MHz)은 측정 LV 수축 기 및 diastolic 크기와 성인 쥐에 심장 기능에 충분 한, 메서드를 기본 구조 현상의 설명에 제한 됩니다. 따라서, 우리가 결합 조직학을 vivo에서 측정 및 측정, 예를 들어 cardiomyocyte 직경 및 배 밀도를 immunohistological 분석. 동일한 유형의 다른 조직학 및 immunohistological 조사, 확산의 결정, apoptosis, 경색 크기 측정, 섬유 증, 및 특정 마커 식의 검사를 수행할 수 있습니다. 조직 처리 하지만이 프로토콜의 대상이 되지 않습니다. 조직학 분석 비보에 echocardiographic 시험의 기본 구조 변경에 대 한 추가적인 통찰력을 제공합니다. 추가 단계에서 우리는 분자와 울트라 구조 조사와이 측정을 완료할 수 있습니다. 조직학 분석 echocardiographic 시험 완료 뿐만 아니라 또한 불가결 될 때 심장 초음파의 해상도 충분 하지 않습니다. 이것은 유전자 변형된 생쥐 배아 치명적인23,24의 모델의 경우 특히.
다른 방법은 심장 구조와 쥐, 심장 초음파, 등 대비 강화 된 MRI, 마이크로 CT, PET 스캔 기능을 평가 하기 위해 개발 되었습니다. 비용 효율성과 단순함, 심장 초음파는 마우스11기능 분석에 대 한 가장 널리 사용 되 기술입니다. 마음과 쥐에서 심장 박동, 주파수 변환기의 높은 주파수의 작은 크기 때문에 일반적으로, > 10 MHz 해야 사용할 수 있지만 성공적인 측정 8 또는 9 MHz 변환?…
The authors have nothing to disclose.
작품 “미래 위한 투자” LABEX SIGNALIFE 프로그램 (참조 ANR-11-LABX-0028-01) (국립 연구 기관, ANR) 프랑스 정부에 의해 지원 되었다 하 고 공화국을 교부 금에 의해 협회에서 D. W. 부 la Recherche 쉬르 르 암, Fondation 드 프랑스, 고 암 Inserm 계획입니다. D. B.와 A. V. 받은 장학 Fondation 부 라 검색 Médicale에서에서와 니스의 도시에서 각각. 필립스에 의해 제공 되는 echocardiograph와 변환기를 친절 하 게 했다. 우리가 그들의 숙련 된 기술 지원에 대 한 A. Borderie, S. Destree, M. Cutajar Bossert, A. Landouar, A. Martres, A. Biancardini, 및 S. M. 바그너 감사합니다.
Wheat germ agglutinin (WGA) conjugated tetramethylrhodamine | Life Technologies, Molecular Probes | W849 | |
Biotinylated Goat Anti-Rabbit IgG Antibody | Vectorlabs | BA-1000 | |
Avidin/Biotin Blocking Kit | Vectorlabs | SP-2001 | |
VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (Peroxidase, Standard) | Vectorlabs | PK-6100 | |
VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI | Vectorlabs | H-1200 | |
SIGMAFAST 3,3'-Diaminobenzidine tablets | Sigma | D4168 | |
Hydrogen peroxide solution | Sigma | H1009 | |
Anti-Pecam-1 (CD31) antibody | Abcam | ab28364 | |
Ultrasound transmission gel, Gel Aquasonic 100 | Parker | ||
Linear ultrasound probe, L15-7io | Philips Healthcare | ||
Echocardiograph, IE33 xMATRIX | Philips Healthcare | ||
Microscope, Leica DMi8 | Leica | ||
Fluorescence Filterset DAPI | Leica | 11525304 | |
Filterset TxR | Leica | 11525310 | |
Digital Camera, SPOT RT3 Color Slider | Spot Imaging | ||
Imaging Software, SPOT 5.2 Advanced and Basic Software | Spot Imaging | ||
Imaging Computer | Dell | ||
Fine Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
Large Scissors | Fine Science Tools | 14501-14 | |
Scalpel blades | Fine Science Tools | 10023-00 | |
Graefe Forceps | Fine Science Tools | 11650-10 | |
Rodent shaver | Harvard Apparatus | 34-0243 | |
cassettes for paraffin embedding | Sakura | 4155F | |
neutral buffered Formalin | Sakura | 8727 | |
Xylene | Sakura | 8733 | |
Paraffine TEK III | Sakura | 4511 | |
automated embedding apparatus, Tissue-Tek VIP | Sakura | 6032 | |
paraffin-embedding station Tissue-Tek TEC 5 | Sakura | 5229 | |
microtome blades,Accu-Edge S35 | Sakura | 4685 | |
microscopy slides, Tissue-Tek | Sakura | 9533 | |
cover slips, Tissue-Tek | Sakura | 9582 | |
Mounting medium Tissue-Tek | Sakura | 1408 | |
slide boxes | Sakura | 3958 | |
eosine solution | Sakura | 8703 | |
hematoxyline solution | Sakura | 8711 | |
microtome, RM2125RT | Leica | 720-1880 (VWR) | |
water bath, Leica HI1210 | Leica | 720-0113(VWR) | |
Ethanol | VWR | ACRO444220050 | |
15 ml tubes | VWR | 734-0451 | |
staining glass dish | VWR | MARI4220004 | |
staining jars | VWR | MARI4200005 | |
Incubator | Binder | 9010-0012 | |
DAB and urea hydrogen peroxide tablets, SIGMAFAST 3,3′-Diaminobenzidine tablets | Sigma | D4293 | |
PBS (10X) | Thermo Fisher Scientific | 70011044 |