असामान्य संवेदी समारोह आंत में दर्द और कार्यात्मक और भड़काऊ आंत्र रोगों के अन्य लक्षणों में निहित है । एक पूर्व vivo चूहा colorectum तैयारी में बृहदांत्र afferent नसों की electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए एक प्रोटोकॉल यहां प्रस्तुत किया है ।
बृहदांत्र संवेदी नसों की शिथिलता कार्यात्मक और भड़काऊ आंत्र रोग और मधुमेह सहित कई आम स्थितियों, के pathophysiology में फंसाया गया है । यहां, हम चूहों में बृहदांत्र afferents के electrophysiological गुणों के इन विट्रो में लक्षण वर्णन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन । colorectum, बरकरार श्रोणि नाड़ीग्रंथि (स्नातकोत्तर) संलग्न के साथ, चूहे से हटा दिया जाता है; रिकॉर्डिंग चैंबर में carbogenated Krebs समाधान के साथ superfused; और मौखिक और गुदा में cannulated को तनाव के लिए अनुमति समाप्त होता है । एक ठीक तंत्रिका बंडल स्नातकोत्तर से निर्गत की पहचान की है, और multiunit afferent तंत्रिका गतिविधि एक चूषण इलेक्ट्रोड का उपयोग कर दर्ज की गई है । multiunit निर्वहन में कालोनी खंड के तनाव में वृद्धि हुई है । एक प्रमुख घटक विश्लेषण कम दहलीज, उच्च दहलीज, और व्यापक गतिशील रेंज afferent फाइबर अंतर करने के लिए आयोजित किया जाता है । बृहदांत्र afferents की रासायनिक संवेदनशीलता परीक्षण यौगिकों के स्नान या intraluminal प्रशासन के माध्यम से अध्ययन किया जा सकता है । इस प्रोटोकॉल इस तरह के चूहों और गिनी सूअरों के रूप में अन्य प्रजातियों, के लिए आवेदन के लिए संशोधित किया जा सकता है, और सामान्य में घटते बृहदांत्र के thoracolumbar/hypogastric और lumbosacral/श्रोणि afferents के electrophysiological गुणों में अंतर का अध्ययन करने के लिए और रोग की स्थिति ।
जठरांत्र संबंधी मार्ग (GIT) बाह्य afferent नसों के साथ बड़े पैमाने पर innervated है कि पेट से केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के लिए संवेदी संकेत देते है और है कि आंत मस्तिष्क संपर्क करने के लिए योगदान । इन बाह्य afferents की बदल उत्तेजित, साथ ही afferent आदानों के बदल केंद्रीय प्रसंस्करण, आंत में दर्द और कार्यात्मक और भड़काऊ आंत्र रोगों सहित1, सैनिक शर्तों के अन्य लक्षणों पर निर्भर करता है । colorectum से संवेदी जानकारी मुख्य रूप से thoracolumbar/hypogastric और lumbosacral/श्रोणि नसों (PN)2के माध्यम से अवगत करा दिया है । कुतर रोग मॉडलों में इन प्राथमिक afferent तंतुओं के electrophysiological गुणों का अध्ययन करने में रुचि बढ़ी है । हालांकि, विवो में electrophysiological में कालोनी afferents की रिकॉर्डिंग एक तकनीकी चुनौती है और काफी शल्य चिकित्सा कौशल की आवश्यकता है । इसके अलावा, hemodynamic परिवर्तन, ऊतक आंदोलन, और निश्चेतक भी vivo मेंउत्तेजनाओं का परीक्षण करने के लिए तंत्रिका गतिविधि और संवेदनशीलता को प्रभावित कर सकते हैं । इसलिए, हाल के वर्षों में, अध्ययन की बढ़ती संख्या इन विट्रो (पूर्व vivo) विभिंन प्रजातियों के चूहों, चूहों, गिनी सूअरों, और मनुष्यों सहित की तैयारी में कार्यरत है, में संवेदी transduction के तंत्र की जांच करने के लिए बृहदांत्र afferents और रोग की स्थिति में बदल उत्तेजित । 3 , 4 , 5 , ६ , 7 , 8
पूर्व vivo बृहदांत्र तैयारी के दो प्रकार के मुख्य रूप से रिपोर्ट किया गया है: “फ्लैट-पत्र” तैयारी5,9,10 और “ट्यूब” तैयारी3,4। “समतल-पत्रक” murine colorectum तैयारी के लिए एक वीडियो प्रोटोकॉल पहले11प्रकाशित किया गया है । इस प्रोटोकॉल में, माउस colorectum, PN के साथ) या काठ का splanchnic नसों (LSN) संलग्न, काटा जाता है और एक ऊतक चैंबर में superfused । colorectum खुला longitudinally कटौती है, और तंत्रिका बंडल एक रिकॉर्डिंग आयल तेल से भरा डिब्बे में विस्तारित है । तंत्रिका गतिविधि एक monopolar प्लेटिनम-इरिडियम इलेक्ट्रोड का उपयोग कर दर्ज की गई है । प्रोटोकॉल निष्पक्ष बिजली उत्तेजना का उपयोग करके व्यक्तिगत afferent फाइबर के ग्रहणशील क्षेत्रों की पहचान के लिए अनुमति देता है । यह रासायनिक उत्तेजनाओं के आवेदन के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अलग यांत्रिक उत्तेजना मानदंड (जैसे, फोकल श्लैष्मिक जांच और circumferential खिंचाव) के आवेदन, afferent तंत्रिका अंत करने के लिए स्थानीयकृत । क्योंकि तंत्रिका ऊतक चैंबर से एक अलग चैंबर के लिए बढ़ाया जाना चाहिए, यह संलग्न तंत्रिका अपेक्षाकृत लंबे समय रखने के लिए महत्वपूर्ण है; नसों के सफल विच्छेदन इस पद्धति के लिए नए उन लोगों के लिए एक चुनौती बन गया है । हाल ही में, Nullens एट अल के लिए एक वीडियो प्रोटोकॉल प्रकाशित इन विट्रो murine jejunal और कालोनी खंडों12में mesenteric afferents की रिकॉर्डिंग । इस “ट्यूब” तैयारी में, संलग्न अन्त्रपेशी के साथ आंत खंड बरकरार रखा है, इस प्रकार वर्गीकृत तनाव के लिए अनुमति और अंतर और अतिरिक्त-विभिंन रसायनों के चमकदार प्रशासन । चूंकि अन्त्रपेशी तंत्रिका एक चूषण इलेक्ट्रोड, जो ऊतक के करीब तैनात किया जा सकता का उपयोग कर दर्ज की गई है, afferent गतिविधि भले ही अन्त्रपेशी तंत्रिका अपेक्षाकृत कम है दर्ज किया जा सकता है । हालांकि, अन्त्रपेशी तंत्रिका मिश्रित आबादी के होते हैं वागल और रीढ़ की हड्डी afferent फाइबर कि आना jejunum या thoracolumbar hypogastric. Lumbosacral श्रोणि afferents आना को colorectum, जिससे इस प्रोटोकाल में भेदभाव नहीं किया जा सकता । यहां, हम एक बरकरार स्नातकोत्तर के साथ “ट्यूब” colorectum तैयारी का उपयोग चूहे colon afferents की electrophysiological रिकॉर्डिंग के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । इस विधि काठ का splanchnic (hypogastric) और lumbosacral श्रोणि afferents के कार्यात्मक गुणों के लक्षण वर्णन के लिए अनुमति दे सकता है ।
यहाँ बताया गया प्रायोगिक प्रोटोकॉल शंघाई Jiaotong यूनिवर्सिटी स्कूल ऑफ मेडिसिन (# SYXK2013-0050) की एनिमल एथिकल कमेटी द्वारा अनुमोदित किया गया है. & #160; बरकरार colorectum और तंत्रिका के साथ नाड़ीग्रंथि का विच्छेदन ट्रंक ए?…
यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल एक अपेक्षाकृत सरल प्रायोगिक पद्धति है जिससे चूहों की कालोनी afferents के electrophysiological गुणों का आकलन किया जा सके. प्रोटोकॉल (ऊतक विच्छेदन से तंत्रिका रिकॉर्डिंग स्थापित करने के लिए) आमतौर…
The authors have nothing to disclose.
इस प्रोटोकॉल को राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन ऑफ चाइना (#31171066, #81270464) और चीन-जर्मन विज्ञान केंद्र (GZ919) से अनुसंधान अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था ।
Sodium Pentobarbital | Shanghai Westang Bio-Tech | B558 | |
Capsaicin | Sigma | M2028 | |
Electrode puller | MicroData Instrument Inc | PMP107 | |
Neurolog System (Bioamplifier) | Digitimer, Ltd | Neurolog System | |
A/D converter | Cambridge Electronic Design | Micro1401 | |
Data processing software | Cambridge Electronic Design | Spike2 version 6 | |
Silver wire | World Precision Instruments | EP12 | |
Glass tubes | World Precision Instruments | 1B150-4 | |
Electrode holder | World Precision Instruments | MEH3SBW | |
Heating bath | Grant | GR150 | |
Dissecting microscope | Leica | Zoom2000 | |
Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIII-BS | |
Cigarette lighter | any | NA | |
Surgical tools | World Precision Instruments | NA | |
Insect pins | home-made from 0.1 mm stainless steel wire | NA | |
Three way manipulator | World Precision Instruments | KITF-R | |
Rats | Any | NA | Any strain/sex can be used. |