Évaluation de l’homéostasie des dopaminergiques chez les souris par l’utilisation de l’analyse de chromatographie liquide à haute performance et l’absorption de la Dopamine

Kathrine L. Jensen; Annika H. Runegaard; Pia Weikop; Ulrik Gether; Mattias Rickhag

doi:10.3791/56093

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Article de méthode

Évaluation de l’homéostasie des dopaminergiques chez les souris par l’utilisation de l’analyse de chromatographie liquide à haute performance et l’absorption de la Dopamine

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DOI :

10.3791/56093

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21 septembre 2017

Kathrine L. Jensen¹ , Annika H. Runegaard¹ , Pia Weikop² , Ulrik Gether¹ , Mattias Rickhag¹

¹Molecular Neuropharmacology and Genetics Laboratory, Lundbeck Foundation Center for Biomembranes in Nanomedicine, Department of Neuroscience and Pharmacology, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ²Laboratory of Neuropsychiatry, Psychiatric Center Copenhagen and Department of Neuroscience and Pharmacology, University of Copenhagen

Dans cet article

Résumé

Capture de la dopamine et de chromatographie liquide à haute performance représentent expérimentale des outils d’analyse pour étudier l’homéostasie de la dopamine chez les souris en évaluant la fonction de transporteur de la dopamine et les niveaux de dopamine dans le tissu du striatum, respectivement. Nous présentons des protocoles afin de mesurer la teneur en tissu dopamine et d’évaluer les fonctionnalités du transporteur de la dopamine.

Résumé

La dopamine (DA) est un neurotransmetteur modulatrice contrôlant l’activité motrice, les processus de récompense et les fonctions cognitives. Altération de la neurotransmission dopaminergique (DAergic) est fortement associée à plusieurs maladies associées au système nerveux central telles que la maladie de Parkinson, troubles de l’attention-hyperactivité et drogues toxicomanie¹^,² ^,³^,⁴. Délimitant les mécanismes des maladies impliquant le déséquilibre DA critique repose sur des modèles animaux pour imiter les aspects des maladies et des protocoles qui permettent d’évaluer des parties spécifiques de l’homéostasie de la DA sont donc importants de proposer des idées nouvelles et thérapeutique possible cibles pour ces maladies.

Nous présentons ici deux protocoles expérimentaux utiles que lorsqu’il est combiné fournissent un affichage fonctionnel du système DAergic chez la souris. Les paramètres biochimiques et fonctionnelles sur l’homéostasie DA sont obtenus au moyen d’évaluation des niveaux de DA et de dopamine transporter (DAT) fonctionnalité⁵. Lors d’enquêtes sur le système de DA, la possibilité de mesurer de manière fiable des taux endogènes de DA du cerveau adulte est essentielle. Par conséquent, nous présentons comment effectuer la chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) sur les tissus cérébraux de souris pour déterminer les niveaux de l’AA. Nous effectuons l’expérience sur le tissu du striatum dorsal (dStr) et le noyau accumbens (NAc), mais la méthode convient également pour d’autres zones du cerveau DA-innervés.

DAT est essentiel pour le recaptage de la DA dans la terminaison présynaptique, contrôlant ainsi l’activité spatiale et temporelle de l’AA publié. Connaître les niveaux et les fonctionnalités de DAT dans le striatum est d’une importance majeure lors de l’évaluation de l’homéostasie du DA. Ici, nous fournissons un protocole qui permet de déduire simultanément des informations sur les niveaux de surface et fonction à l’aide d’un test d’absorption de synaptosomes⁶ DA.

Les méthodes actuelles combinées avec des protocoles standard immunoblotting fournissent le chercheur avec des outils pertinents pour caractériser le système DAergic.

Introduction

La dopamine (DA) est un neurotransmetteur modulatrice critique pour comportement moteur, de récompense et de la fonction cognitive¹^,⁷^,⁸^,⁹. Les déséquilibres dans l’homéostasie de la DA sont impliqués dans plusieurs maladies neuropsychiatriques tels que le trouble d’hyperactivité avec déficit de l’attention, la toxicomanie, la dépression et la maladie de Parkinson,¹. DA est libéré du neurone présynaptique dans la fente synaptique, où il se lie à et active les récepteurs sur la membrane pre- et post-synaptiques, véhicul....