Le murin déficients en Choline, additionné d’éthionine (CDE) alimentation modèle d’atteinte hépatique chronique

Jully Gogoi-Tiwari; Julia Köhn-Gaone; Corey Giles; Dirk Schmidt-Arras; Francis D. Gratte; Caryn L. Elsegood; Geoffrey W. McCaughan; Grant A. Ramm; John K. Olynyk; Janina E.E. Tirnitz-Parker

doi:10.3791/56138

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Article de méthode

Le murin déficients en Choline, additionné d’éthionine (CDE) alimentation modèle d’atteinte hépatique chronique

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DOI :

10.3791/56138

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21 octobre 2017

Jully Gogoi-Tiwari¹ , Julia Köhn-Gaone¹ , Corey Giles² , Dirk Schmidt-Arras³ , Francis D. Gratte¹^,⁴ , Caryn L. Elsegood¹ , Geoffrey W. McCaughan⁵^,⁶^,⁷ , Grant A. Ramm⁸^,⁹ , John K. Olynyk¹⁰^,¹¹ , Janina E.E. Tirnitz-Parker¹^,¹²

¹School of Biomedical Sciences & Curtin Health Innovation Research Institute, Curtin University, ²School of Public Health & Curtin Health Innovation Research Institute, Curtin University, ³Institute of Biochemistry, Christian-Albrechts-University, ⁴School of Veterinary and Life Sciences, Murdoch University, ⁵Centenary Institute of Cancer Medicine and Cell Biology, The University of Sydney, ⁶Royal Prince Alfred Hospital, ⁷A.W. Morrow Gastroenterology and Liver Centre, ⁸QIMR Berghofer Medical Research Institute, ⁹Faculty of Medicine and Biomedical Sciences, The University of Queensland, ¹⁰Fiona Stanley and Fremantle Hospitals, ¹¹School of Medical and Health Sciences, Edith Cowan University, ¹²School of Medicine and Pharmacology, University of Western Australia

Dans cet article

Résumé

Nous décrivons ici une méthode commune pour induire des lésions chroniques du foie chez les souris en se nourrissant d’un régime alimentaire (CDE) déficients en choline et additionné d’éthionine. Nous démontrons la surveillance de la santé, perfusion hépatique, d’isolement et de préservation. Une durée de six semaines peut informer d’atteinte hépatique, pathohistology, fibrose, inflammation et les réponses des cellules progénitrices du foie.

Résumé

Maladies chroniques du foie, comme l’hépatite virale, maladie alcoolique du foie ou stéatose hépatique non alcoolique, sont caractérisent par l’inflammation continuelle, une destruction progressive et la régénération des cellules du parenchyme hépatique, foie prolifération et la fibrose. La phase terminale de chaque maladie chronique du foie est la cirrhose, un facteur de risque majeur pour le développement du carcinome hépatocellulaire. Afin d’étudier les processus régissant la progression, l’établissement et initiation de la maladie, plusieurs modèles animaux sont utilisés dans les laboratoires. Nous décrivons ici un cours de six semaines de temps du déficients en choline et additionné d’éthionine (CDE) souris modèle, qui consiste à nourrir six - semaine vieilles souris C57BL/6J mâles avec déficients en choline chow et 0,15 % DL-éthionine-complété en eau potable. Surveillance de la santé animale et une courbe de perte de poids de corps typiques sont expliqués. Le protocole montre l’examen brut d’une collection de traités CDE foie et le sang par ponction cardiaque pour des analyses ultérieures de sérum. Ensuite, la technique de perfusion hépatique et la perception des différents lobes hépatiques pour évaluations standards sont les quotes-parts indiquées, y compris l’histologie du foie par l’hématoxyline et éosine ou Sirius rouge salissures, détection par immunofluorescence des populations de cellules hépatiques ainsi que du transcriptome de profilage du microenvironnement du foie. Ce modèle de souris convient pour étudiant inflammatoires, fibrogène et cellules hépatiques dynamique induite par une maladie hépatique chronique et peut être utilisée pour tester les agents thérapeutiques potentiels qui peuvent moduler ces processus.

Introduction

Le foie est le plus grand organe glandulaire métabolique du corps et a de nombreuses fonctions complexes. Les rôles principaux pour le foie comprennent la digestion, métabolisme, détoxification, stockage d’éléments nutritifs essentiels, la production de composants de protéine de plasma sanguin et immunité médiée par des macrophages résidents ou des cellules de Kupffer. Le foie a une grande capacité à se régénérer même si jusqu'à 70-90 % de sa masse totale est perdue. En cas d’atteinte hépatique aiguë, comme vu après une hépatectomie partielle ou acetaminophen l’empoisonnement, les hépatocytes sains restants se multiplient pour réparer les dégâts dans un processus hautement coordonnée¹. Toutefois, lorsque les hépatocytes sont chroniquement blessés due à une infection virale à long terme, alcoolisée ou non alcoolisées stéatose hépatique, le microenvironnement inflammatoire déclenche l’activation des cellules étoilées hépatiques fibrose-conduite et les prolifération de cellules progénitrices du foie (LPCs) susceptibles de se différencier en cholangiocytes ou hépatocytes²^,³^,⁴^,⁵. L’origine précise, sort de la différenciation des suppléments de retard, leur contribution à la régénération du foie et hepatocarcinogenesis ont été des sujets de débats intenses et très probablement dépendent de la gravité des blessures et le contexte². L’ordre des événements précoces associées à régénération est aussi controversée, avec quelques chercheurs indiquant que l’activation des cellules étoilées hépatique et le remodelage de la matrice est essentielle pour la production d’un favorable de LPC niche⁶, tandis que d’autres rapport que l’expansion LPC et la réaction dite de canaux sont nécessaires pour déclencheur FIBROGÉNÈSE⁷. Il existe de nombreux modèles animaux pour l’étude des aspects spécifiques des blessures et la régénération, dans une tentative pour comprendre tous les facteurs sous-jacents qui régulent la progression de la maladie et en fin de compte développer de nouvelles stratégies de traitement pour les patients⁸.

Le modèle alimentaire déficients en choline et additionné d’éthionine (CDE) a été initialement développé pour l’usage chez les rats et par la suite modifié pour l’induction des lésions hépatiques chroniques dans souris⁹^,¹⁰. Une carence alimentaire de choline résulte en Assemblée avec facultés affaiblies et la sécrétion des lipoprotéines de basse densité très. Combiné avec le hépatocancérogène DL-éthionine, ce régime conduit à l’excès de gras hépatique, de chargement continue inflammation, fibrose périportale, réponse de la LPC et à long terme à hepatocellular carcinoma développement¹¹^,¹². Cependant, ce qui est important, souches de souris différentes pièce modèles distinctifs de fibrogène et du LPC inflammatoires, réponse dynamique¹³. Ce protocole décrit la souche de souris induction chez les souris C57BL/6J, les plus couramment utilisés consanguinitée atteinte hépatique chronique.

Dans la recherche d’une maladie hépatique chronique, analyses typiques incluent les évaluations histologiques de l’hématoxyline et éosine ainsi que la coloration rouge Sirius pour visualiser les dépôts de collagène, immunohistochimiques ou détection par immunofluorescence des populations de cellules hépatiques, et analyses transcriptomiques du microenvironnement du foie qui orchestre les changements cellulaires induites au complexe facteur de croissance et cytokines réseaux¹⁴^,¹⁵^,¹⁶^,¹⁷ ^, ¹⁸.