जीर्ण जिगर की चोट के Murine Choline-कमी, Ethionine पूरक (CDE) आहार मॉडल
Summary
यहाँ हम एक choline की कमी और ethionine पूरक (CDE) आहार के खिलाने के द्वारा चूहों में जीर्ण जिगर की चोट पैदा करने के लिए एक आम विधि का वर्णन. हम स्वास्थ्य निगरानी, जिगर छिड़काव, अलगाव, और संरक्षण का प्रदर्शन । छह सप्ताह के एक समय पाठ्यक्रम जिगर की चोट, pathohistology, फाइब्रोसिस, भड़काऊ, और जिगर जनक सेल प्रतिक्रियाओं के बारे में सूचित कर सकते हैं ।
Abstract
क्रोनिक यकृत रोग, जैसे वायरल हेपेटाइटिस, शराबी जिगर की बीमारी, या गैर शराबी फैटी लीवर रोग, नित्य सूजन, प्रगतिशील विनाश और यकृत पैरेन्काइमा, जिगर जनक सेल के उत्थान की विशेषता है प्रसार, और फाइब्रोसिस । हर पुरानी जिगर की बीमारी के अंत चरण सिरोसिस, hepatocellular कार्सिनोमा के विकास के लिए एक प्रमुख जोखिम कारक है । रोग दीक्षा, स्थापना, और प्रगति को विनियमित प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए, कई जानवरों के मॉडल प्रयोगशालाओं में उपयोग किया जाता है । यहां हम एक छह choline की कमी और ethionine-पूरक (CDE) माउस मॉडल है, जो छह सप्ताह पुराने पुरुष C57BL/6J की कमी चाउ और ०.१५% डीएल-choline-पूरक पीने के पानी के साथ चूहों के एक सप्ताह के समय पाठ्यक्रम का वर्णन । पशु स्वास्थ्य की निगरानी और एक ठेठ शरीर वजन घटाने वक्र समझाया जाता है । प्रोटोकॉल बाद सीरम विश्लेषण के लिए हृदय पंचर द्वारा एक CDE-इलाज जिगर और रक्त संग्रह की सकल परीक्षा को दर्शाता है । अगला, जिगर छिड़काव तकनीक और मानक मूल्यांकन के लिए अलग यकृत पालियों के संग्रह में दिखाया गया है, जिगर प्रोटोकॉल आकलन सहित hematoxylin और eosin या सिरियस लाल दाग, यकृत कोशिका आबादी का पता लगाने के immunofluorescent साथ ही लिवर microenvironment की transcriptome profile भी की । इस माउस मॉडल पुरानी जिगर की बीमारी के माध्यम से प्रेरित भड़काऊ, fibrogenic, और जिगर जनक सेल गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है और इन प्रक्रियाओं संग्राहक हो सकता है कि संभावित चिकित्सीय एजेंटों का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
Introduction
जिगर शरीर का सबसे बड़ा ग्रंथियों चयापचय अंग है और कई जटिल कार्य किया है । जिगर के लिए मुख्य भूमिकाओं पाचन, चयापचय, detoxification, आवश्यक पोषक तत्वों का भंडारण, रक्त प्लाज्मा प्रोटीन घटकों के उत्पादन में शामिल हैं, और प्रतिरक्षा निवासी मैक्रोफेज या Kupffer कोशिकाओं के माध्यम से मध्यस्थता । जिगर एक महान को पुनर्जीवित करने की क्षमता है भले ही अपने कुल द्रव्यमान का 70-90% खो दिया है । तीव्र जिगर की चोट की स्थिति में, जैसे एक आंशिक hepatectomy या एसिटामिनोफेन विषाक्तता के बाद देखा, शेष स्वस्थ हेपैटोसाइट्स पैदा एक उच्च समंवित प्रक्रिया में क्षति की मरंमत करने के लिए1। हालांकि, जब हेपैटोसाइट्स लंबी अवधि के वायरल संक्रमण, शराबी या गैर शराबी फैटी लीवर रोग के कारण लंबे समय से घायल हैं, भड़काऊ microenvironment फाइब्रोसिस-ड्राइविंग यकृत stellate कोशिकाओं के सक्रियण से चलाता है और या तो cholangiocytes या हेपैटोसाइट्स2,3,4,5में अंतर करने की क्षमता के साथ जिगर जनक कोशिकाओं (LPCs) के प्रसार । सटीक मूल, LPCs के भेदभाव भाग्य, जिगर पुनर्जनन के लिए उनके योगदान, और hepatocarcinogenesis गहन बहस का विषय रहा है और सबसे अधिक संभावना चोट गंभीरता और संदर्भ2पर निर्भर करते हैं । जल्दी पुनर्जनन के आदेश से जुड़े घटनाओं भी विवादास्पद रूप से चर्चा की है, कुछ जांचकर्ताओं ने कहा कि यकृत stellate सेल सक्रियकरण और मैट्रिक्स remodeling एक LPC की पीढ़ी के लिए आवश्यक है आला6एहसान, जबकि अंय रिपोर्ट है कि LPC विस्तार और तथाकथित Ductular प्रतिक्रिया fibrogenesis7ट्रिगर करने के लिए आवश्यक हैं । वहां कई जानवरों के लिए चोट और पुनर्जनन के विशिष्ट पहलुओं का अध्ययन करने के लिए, एक के लिए सभी अंतर्निहित कारकों है कि रोग की प्रगति को विनियमित समझने की कोशिश में और अंत में रोगियों के लिए नए उपचार रणनीतियों8विकसित करने के लिए मॉडल हैं ।
choline की कमी और ethionine पूरक (CDE) आहार मॉडल मूल रूप से चूहों में उपयोग के लिए विकसित किया गया था और चूहों में जीर्ण जिगर की चोट प्रेरण के लिए बाद में संशोधित9,10. बिगड़ा विधानसभा और बहुत कम घनत्व लिपो के स्राव में choline परिणामों की आहार की कमी. hepatocarcinogen डीएल-ethionine के साथ संयुक्त, इस आहार अत्यधिक यकृत वसा लदान की ओर जाता है, सतत सूजन, periportal फाइब्रोसिस, LPC प्रतिक्रिया और दीर्घकालिक hepatocellular कार्सिनोमा विकास के लिए11,12 . हालांकि, महत्वपूर्ण बात, अलग माउस उपभेदों भड़काऊ, fibrogenic और LPC प्रतिक्रिया गतिशीलता13के विशिष्ट पैटर्न का प्रदर्शन । इस प्रोटोकॉल C57BL/6J चूहों में जीर्ण जिगर की चोट प्रेरण का वर्णन करता है, सबसे अधिक इस्तेमाल किया नस्ल माउस तनाव ।
जीर्ण यकृत रोग अनुसंधान में, ठेठ विश्लेषण hematoxylin और eosin के रूप में अच्छी तरह के रूप में सिरियस लाल धुंधला करने के लिए कोलेजन जमाव, immunohistochemical, या यकृत कोशिका आबादी का पता लगाने immunofluorescent कल्पना द्वारा ऊतकीय आकलन शामिल हैं, और transcriptomic विश्लेषण जिगर microenvironment कि जटिल वृद्धि कारक और cytokine नेटवर्क के माध्यम से प्रेरित सेलुलर परिवर्तन आर्केस्ट्रा का उद्घोष14,15,16,17 , 18.
Protocol
1. पशु प्रयोग
इस जांच में वर्णित सभी पशु अध्ययनों को Curtin विश्वविद्यालय पशु आचार समिति (अनुमोदन संख्या: AEC_2014_28) के प्रारंभ से पहले अनुमोदित किया गया था । प्रयोगों और जानवरों की देखभाल और उपयोग क…
Representative Results
Discussion
जीर्ण जिगर की बीमारी अक्सर सबसे स्पर्शोन्मुख जा रहा रोगियों के साथ एक मूक रोग है और यह दुनिया भर में रुग्णता और मृत्यु के लिए प्रमुख योगदानकर्ताओं में से एक है । क्रोनिक शराबखोरी और हेपेटाइटिस सी वायर?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के लिए ऑस्ट्रेलिया के राष्ट्रीय स्वास्थ्य और चिकित्सा अनुसंधान परिषद (NHMRC) (APP1042370, APP1061332, APP1087125) से अनुदान का समर्थन किया था । लेखक तकनीकी सहायता के लिए Curtin स्वास्थ्य नवाचार अनुसंधान संस्थान के कर्मचारियों का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं ।
Materials
| Six-week-old male C57BL/6J mice | Animal Resource Centre of Western Australia, Murdoch, WA, Australia | N/A | |
| 10 Kg Steam Cut Wheaten Chaff | Specialty Feeds, Glen Forrest, WA, Australia | N/A | |
| Water for irrigation 1000ml bottle (Baxter) | Surgical House, Perth, WA, Australia | AHF7114A | |
| Choline- deficient diet, modified (pellets) | MP Biomedicals Australasia Pty Limited, WA, Australia 02960210 | ||
| DL-Ethionine | Sigma-Aldrich, Castle Hill, NSW, Australia | E5139-25G | |
| Ketamil injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
| Ilum Xylazil-20 injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
| 27G x 1/2", Regular Wall Needle | Terumo Australia Pty Limited, NSW, Australia | NN-2713R | |
| Syringes Terumo 1ml and 10ml | Terumo Australia Pty Limited, Macquarie Park, NSW, Australia | 1018242, 1018037 | |
| Tissue-Tek OCT compound | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 25608-930 | |
| Neutral buffered formalin | Amber Scientific, Midvale, WA, Australia | NBF-2.5L | |
| Ethanol absolute anaLaR normalpur | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 20821.33 | |
| Superfrost Plus slides | Grale Scientific Pty Limited, Ringwood, VIC, Australia | SF41296SP | |
| Dako Protein Block, serum-free | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | X090930-2 | |
| Dako antibody diluent | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | s0809 | |
| rat anti-CD45 | eBioscience, San Diego, California, USA | m0701 | 1/200 dilution |
| rabbit anti-panCK | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | Z0622 | 1/300 dilution |
| Goat anti-rabbit (Alexa Fluor 488) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11008 | 1/500 dilution |
| Goat anti-rat IgG (Alexa Fluor 594) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11007 | 1/500 dilution |
| ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | P36935 | |
| Picrosirius Red Stain Kit | Polysciences Inc., Warrington, PA, USA | ab150681 | |
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