Dissociated माउस cortical न्यूरॉन संस्कृति की तैयारी
Summary
इस वीडियो देर से भ्रूण और जल्दी प्रसव के बाद माउस प्रांतस्था से neuronal संस्कृतियों पैदा करने के लिए एक प्रक्रिया से पता चलता है. इन संस्कृतियों immunocytochemistry, जैव रसायन, इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी, कैल्शियम और सोडियम इमेजिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और ट्रांसजेनिक जानवर है कि एक प्रसव के बाद घातक जीन उत्परिवर्तन ले neuronal विकास का अध्ययन करने के लिए एक मंच प्रदान.
Abstract
इस वीडियो देर से भ्रूण और जल्दी प्रसव के बाद माउस मस्तिष्क से cortical neuronal संस्कृतियों पैदा करने के लिए इस प्रक्रिया के माध्यम से आपको मार्गदर्शन करेगा. इन संस्कृतियों immunocytochemistry, जैव रसायन, इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी, इमेजिंग कैल्शियम और सोडियम, प्रोटीन और / या शाही सेना अलगाव सहित आवेदनों की एक किस्म के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इन संस्कृतियों को भी ट्रांसजेनिक जानवर है कि एक देर से भ्रूण या प्रसवोत्तर घातक जीन उत्परिवर्तन ले neuronal विकास का अध्ययन करने के लिए एक मंच प्रदान करते हैं. प्रक्रिया अपेक्षाकृत सीधे आगे है, टिशू कल्चर तकनीक में कुछ अनुभव की आवश्यकता है और ले नहीं होना चाहिए अगर आप ठीक ढंग से तैयार कर रहे हैं अब से दो से तीन घंटे. फाइबर thalamo cortical पथ से cortical छिलका की सावधानी से जुदाई अवांछित गैर neuronal कोशिकाओं की संख्या कम हो जाएगा. वृद्धि के लिए neuronal कोशिकाओं की पैदावार cortical ऊतक के टुकड़े एंजाइम ऊष्मायन कदम के बाद धीरे triturate. यह आवश्यक है के रूप में यह कोशिकाओं और समय से पहले neuronal सेल मृत्यु अनावश्यक चोट से बचाता है. चूंकि इन संस्कृतियों glia फीडर कोशिकाओं के अभाव में रखा जाता है, वे भी बढ़ती न्यूरॉन्स में समृद्ध संस्कृतियों में से एक जोड़ा लाभ प्रदान करते हैं.
Protocol
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 5-Fluoro-2′-deoxyuridine | Sigma | F0503 | ||
| Sodium Chloride | Sigma | S9625 | ||
| Vibraslicer | Campden Instruments Ltd. | |||
| Potassim Chloride | Sigma | P4504 | ||
| Sodium Phosphate Dibasic | Sigma | S0876 | ||
| Potassium Phosphate Monobasic | Sigma | P5379 | ||
| Hepes | Sigma | H3375 | ||
| D (+)-Glucose | Sigma | G8270 | ||
| Sucrose | Sigma | S0389 | ||
| Poly-D-Lysine | Sigma | P7280 | ||
| B27 Supplement | Invitrogen (Gibco) | 17504-044 | ||
| Neurobasal Media (NBM) | Invirtogen (Gibco) | 21103-049 | ||
| 2-Amino-5-phosphonopentanoic acid | Sigma | A5282 | ||
| Bovine Albumin | Sigma | A7030 | ||
| Trypsin Inhibitor | Sigma | T9253 | ||
| Sodium Hydroxide, 1N solution | Fisher | SS266-1 | ||
| L-Cysteine | Sigma | C7755 | ||
| Bacto Agar | Difco | 0140-01 | ||
| Papain | Worthington | LS 03126 | ||
| Sterile 0.2 µm Syringe Filter | Fisher | DDA02025S0 | ||
| Glass Coverslips, No1, Ø12mm | Bellco Glass Inc. | 1943-00012 | ||
| Minimum Essential Media (MEM) | Invitrogen (Gibco) | 11090-081 | with Earle’s salts without L-glutamine, needed for growing non-neuronal cultures | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen (Gibco) | 15070-063 | for non-neuronal culture | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen (Gibco) | 16140-071 | needed for non-neuronal cultures | |
| Nunclon “Triple Flask” Tissue Culture Bottle | Fisher | 12-565-25 | Use for non-neuronal cultures. these flasks are very convenient when producing “conditioned Neurobasal Media/B27”, but any other tissue culture flasks or dishes can be used instead. | |
| Glass bottom “Imaging dishes” | MatTek Corp. | P35G-1.5-10-C | Glass bottomed, Ø35mm culture dishes ideal for Calcium or Sodium Imaging when using an inverted imaging setup. But expensive! |
