बाईं वेंट्रिकुलर अतिवृद्धि की प्रेरण के लिए चूहों में न्यूनतम इनवेसिव अनुप्रस्थ महाधमनी कसना की तकनीक
Summary
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य कदम दर कदम चूहों में न्यूनतम इनवेसिव अनुप्रस्थ महाधमनी कसना (टीएसी) की तकनीक का वर्णन है. इंटुबैषेण और वेंटिलेशन जो सामांय रूप से इस्तेमाल किया मानक प्रक्रिया के लिए अनिवार्य कर रहे है के उंमूलन के द्वारा, ंयूनतम इनवेसिव टीएसी को ऑपरेटिव प्रक्रिया को सरल और जानवर पर डाल तनाव कम कर देता है ।
Abstract
अनुप्रस्थ महाधमनी कसना (टीएसी) चूहों में दबाव अधिभार-प्रेरित वाम वेंट्रिकुलर अतिवृद्धि (LVH) और दिल की विफलता के लिए अपनी प्रगति की प्रयोगात्मक जांच के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया शल्य तकनीक में से एक है । रिपोर्ट की जांच के बहुमत में, इस प्रक्रिया इंटुबैषेण और जानवर जो renders यह मांग और समय लेने वाली और पशु के लिए शल्य चिकित्सा बोझ को कहते है की वेंटिलेशन के साथ किया जाता है । इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य इंटुबैषेण और चूहों के वेंटिलेशन के बिना न्यूनतम इनवेसिव टीएसी की एक सरलीकृत तकनीक का वर्णन है. LVH उत्प्रेरण में कम मृत्यु दर और उच्च दक्षता प्राप्त करने के लिए तकनीक के महत्वपूर्ण कदम पर बल दिया जाता है ।
पुरुष C57BL/6 चूहों (10 सप्ताह पुरानी, 25-30 जी, एन = 60) ketamine और xylazine के एक मिश्रण के एक एकल intraperitoneal इंजेक्शन के साथ anesthetized थे. एक 3-4 मिमी ऊपरी आंशिक sternotomy, 6/0 रेशम सीवन के एक खंड के बाद एक सहज श्वास पशु में एक बंधाव सहायता की आंख के माध्यम से लड़ी पिरोया महाधमनी आर्क के तहत पारित किया गया था और एक कुंद 27-गेज सुई पर बंधे । अन्तर्वासना संचालित करने वाले पशुओं को ही शल्य तैयारी करनी पड़ी लेकिन बिना महाधमनी कसना पड़ा. LVH उत्प्रेरण में प्रक्रिया की प्रभावकारिता दिल में एक महत्वपूर्ण वृद्धि द्वारा अनुप्रमाणित है/शरीर के वजन अनुपात । यह अनुपात (n = 6-10 प्रत्येक समूह में और प्रत्येक समय बिंदु) सर्जरी के बाद 3, 7, 14 और 28 दिनों में प्राप्त की है । हमारी तकनीक का उपयोग कर, LVH टीएसी में मनाया जाता है अन्तर्वासना जानवरों की तुलना में 7 दिन से दिन के माध्यम से 28. ऑपरेटिव और देर से (28 दिनों में) मृत्युदर दोनों बहुत कम १.७% पर हैं ।
अंत में, चूहों में ंयूनतम इनवेसिव टीएसी को हमारी लागत प्रभावी तकनीक बहुत कम ऑपरेटिव और पोस्ट ऑपरेटिव नश्वरता वहन करती है और LVH उत्प्रेरण में अत्यधिक कुशल है । यह ऑपरेटिव प्रक्रिया को सरल और जानवर पर डाल तनाव कम कर देता है । यह इस प्रोटोकॉल में वर्णित महत्वपूर्ण चरणों का पालन करके आसानी से किया जा सकता है ।
Introduction
पिछले वर्षों में, दिल की विफलता का अध्ययन व्यवहार्य पशु मॉडल में आयोजित किया गया है1। दिल की विफलता के बड़े पशु मॉडल की तुलना में, छोटे जानवर मॉडल कई संभावित लाभ है । आवास और रखरखाव के कम लागत के अलावा, छोटे जानवर मॉडल और अधिक शोधकर्ताओं के लिए सुलभ है कम जटिल सुविधाओं की जरूरत के कारण2।
माउस हार्ट विफलता मॉडल चूहे मॉडल के रूप में एक ही लाभ के कई प्रदान करते हैं । कम आवास लागत के अलावा3, माउस मॉडल प्रासंगिक ट्रांसजेनिक और नॉकआउट (KO) उपभेदों की उपलब्धता से लाभ । कोशिका प्रकार की संभावना-विशिष्ट, inducible KO या ट्रांसजेनिक रणनीतियों माउस एक अमूल्य उपकरण को दिल की विफलता के रोगजनन अध्ययन करने के लिए और उपंयास चिकित्सकीय परहेजों की पहचान करने की कोशिश करने के लिए3।
हृदय विफलता के माउस मॉडलों के अलावा वर्तमान में4, अनुप्रस्थ महाधमनी कसना (टीएसी) जो पहले Rockman द्वारा वर्णित किया गया था5 दबाव अधिभार उत्पंन करने के लिए पसंदीदा मॉडल है-प्रेरित वाम वेंट्रिकुलर अतिवृद्धि (LVH)1 , 3. इस मॉडल का सबसे बड़ा लाभ LVH2के स्तरीकरण की अनुमति देने की क्षमता है, हालांकि टीएसी को जवाब में छोड़ दिया वेंट्रिकुलर remodeling अलग माउस उपभेदों के बीच चर रहा है । विशेष रूप से, C57BL/6 चूहों के बाद टीएसी को तेजी से LV फैलाव विकसित कि अन्य उपभेदों के साथ नहीं हो सकता है4,6,7.
टीएसी के साथ हासिल की उच्च रक्तचाप की अचानक शुरुआत 2 सप्ताह के भीतर एल. वी. मास में लगभग ५०% वृद्धि का कारण बनता है, तेजी से औषधीय या आणविक LVH के विकास संग्राहक में लक्ष्य की गतिविधियों की जांच करने के लिए अनुमति देता है4। टीएसी द्वारा गंभीर उच्च रक्तचाप की तीव्र प्रेरण वास्तव में प्रगतिशील छोड़ दिया वेंट्रिकुलर अतिवृद्धि और remodeling महाधमनी एक प्रकार का रोग या धमनी का उच्च रक्तचाप के नैदानिक सेटिंग में मनाया प्रतिलिपि नहीं है । फिर भी, इस मॉडल कई जांचकर्ताओं द्वारा प्रयोग किया जाता है की पहचान और दिल की विफलता में उपंयास चिकित्सीय लक्ष्यों को संशोधित4।
चूहों में टीएसी प्रदर्शन LVH और बाद में दिल की विफलता को प्रेरित करने के लिए इस्तेमाल किया अन्य तकनीकों के लिए आवश्यक से अधिक शल्य चिकित्सा विशेषज्ञता की आवश्यकता है2. अधिकांश लेखक intubating और जानवर2,8है, जो इस प्रक्रिया को और अधिक मांग और समय लेने वाली है और पशु के लिए शल्य चिकित्सा बोझ को कहते है हवादार द्वारा इस प्रक्रिया का प्रदर्शन । केवल कुछ जांचकर्ताओं सर्जिकल प्रक्रिया9,10,11के लिए संक्षिप्त संदर्भ के साथ अपने अध्ययन में ंयूनतम इनवेसिव टीएसी का इस्तेमाल किया है ।
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य कदम दर कदम एक सरलीकृत और उपयोगकर्ता के अनुकूल तकनीक का वर्णन है ंयूनतम इनवेसिव अनुप्रस्थ महाधमनी कसना चूहों में, प्रक्रिया के महत्वपूर्ण चरणों पर प्रकाश डाला । इन प्रमुख चरणों का पालन करके, एक आसानी से इस तकनीक का प्रदर्शन कर सकते हैं ।
Protocol
नर C57BL/6J चूहों (10 सप्ताह, 25-30g, n = 60) इस प्रोटोकॉल में उपयोग किया जाता है । पशु और उच्च शिक्षा और अनुसंधान के फ्रेंच कृषि मंत्रालय द्वारा तैयार दिशा निर्देशों के अनुपालन में मानवीय देखभाल प्राप्त करते हैं, और …
Representative Results
Discussion
इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य चूहों में न्यूनतम इनवेसिव अनुप्रस्थ महाधमनी कसना के लिए शल्य चिकित्सा तकनीक का एक कदम दर कदम चित्रण पेश करने के लिए है. चूहों में अनुप्रस्थ महाधमनी कसना का विस्तृत तकनीकी विव?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम आर टी के लिए स्विस हृदय फाउंडेशन के एक अनुदान (एन ° ३२०१६) द्वारा समर्थित किया गया था ।
Materials
| Surgical microscope | Olympus | SZX2-TR30 | |
| Razor | Rowenta | Nomad TN3650FO | |
| Sutures: | |||
| Polypropylene 7/0 | Ethicon | BV-1X | |
| Polypropylene 6/0 | BBraun | C0862061 | |
| Silk 6/0 ligature | FST | 18020-60 | |
| Polypropylene 4/0 | Ethicon | 8683 | |
| Polypropylene 5/0 | Ethicon | Z303 | |
| Drugs: | |||
| Ketamin | Merial | Imalgène 1000, LBM154AD | |
| Xylazine | Bayer | Rompun 2%, KP09PPC | |
| Buprenorphine | Ceva | Vetergesic, 072013 | |
| Instruments: | |||
| Bone nippers | Fine Surgical Tools | 16101-10 | |
| Ligation aid | Fine Surgical Tools | 18062-12 | |
| Tying forceps | Fine Surgical Tools | 18026-10 | |
| Needle holder Crile-Wood | Fine Surgical Tools | 12003-15 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11003-12 | |
| Microsurgery forceps | Fine Surgical Tools | 11002-12 | |
| Tissue forceps | Fine Surgical Tools | 11021-12 | |
| Microsurgery needle holder | Fine Surgical Tools | 12076-12 | |
| Microsurgery scissors | Fine Surgical Tools | 91501-09 | |
| Mayo scissors | Fine Surgical Tools | 14511-15 | |
| 11-blade knife | Fine Surgical Tools | 10011-00 | |
| RNA extraction and qPCR: | |||
| TriReagent | Euromedex | TR-118-200 | |
| Rneasy Mini kit | Qiagen | 74704 | |
| Qubit Fluorimetric RNA assay | Fisher Scientific | 10034622 | |
| RNA 6000 Nano kit | Agilent | 5067-1511 | |
| High Capacity cDNA kit | Fisher Scientific | 10400745 | |
| Taqman Master Mix | Fisher Scientific | 10157154 | |
| Taqman BNP primers | Fisher Scientific | Mm01255770_g1 | |
| Taqman ANP primers | Fisher Scientific | Mm01255747_g1 | |
| Taqman ACE primers | Fisher Scientific | Mm00802048_m1 | |
| Taqman Col1a1 primers | Fisher Scientific | Mm00801666_g1 | |
| Taqman TGFb primers | Fisher Scientific | Mm01178820_m1 | |
| Taqman Gapdh primers | Fisher Scientific | Mm99999915_g1 | |
| ABIPrism Thermocycler | Applied Biosystems | 7000 | |
| Software: | |||
| GraphPad Prism | GraphPad | Prism 7 | |
| Animal food | |||
| Complete diet for adult rats/mice | Safe | UB220610R |
References
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