Évaluation des voies urinaires Junction Obstruction défauts par Injection de colorant de bleu de méthylène

Résumé

Injection de colorant de bleu de méthylène dans le bassinet facilite l’évaluation des voies urinaires junction obstruction défauts au cours du développement embryonnaire des voies urinaires chez la souris. Ici, un protocole pour l’injection de colorant de bleu de méthylène dans le bassinet est décrite.

Résumé

Défauts d’obstruction des voies urinaires junction sont des anomalies congénitales induisant une hydronéphrose et hydroureter. Murine urinaires junction obstruction défauts peuvent être évaluées grâce au suivi des flux de colorant de bleu de méthylène au sein du système urinaire. Colorant de bleu de méthylène est injecté dans le bassinet des reins embryonnaires périnatales et flux de colorant est contrôlée depuis le bassinet du rein par le biais de l’uretère et dans la lumière de la vessie après l’application de la pression hydrostatique. Accumulation de colorant se manifesteront dans la lumière de la vessie du tractus urinaire normal périnatale, mais sera limitée entre le bassinet et le point final d’un uretère anormale, obstruction des voies urinaires en cas. Cette méthode facilite la confirmation des obstructions de jonction des voies urinaires et la visualisation de l’hydronéphrose et hydroureter. Ce manuscrit décrit un protocole pour l’injection de colorant de bleu de méthylène dans le bassinet pour confirmer les obstructions de jonction des voies urinaires.

Introduction

Le système urinaire se compose d’une paire de reins et uretères et une commune la vessie et l’urètre. La fonction principale du système urinaire est de maintenir l’homéostasie de l’organisme de gestion de l’équilibre de l’eau et d’électrolytes du sang. Les reins filtrent le sang pour contrôle électrolyte concentrations et équilibre acido-basique et produisent de l’urine pour excréter les excès d’eau et des déchets, y compris des solutés et métabolites. Urine est ensuite transporté par le biais de l’uretère du bassinet du rein à la bladderin de manière unidirectionnelle, où elle est stockée et finalement éliminé par l' urètre¹.

Protocole

souris (Wnt5a flox / souris flox (Wnt5a ^tm1.1Tpy) et Dll1Cre ligne, modèle de souris UVJO) ⁷ étaient gérés selon les directives des NIH pour le soin et l’utilisation des animaux de laboratoire et a étudié sous un protocole approuvé par le Comité de l’emploi et de la NCI-Frederick animalier.

1. préparation de Solution de colorant bleu de méthylène

1. mesurer la poudre de bleu de méthylène de 0,1 g.
2. Dissoudre le bleu de méthylène dans 10 mL de soluté physiologique ou 1 x en solution saline tamponnée au phosphate (PBS) complètement vortexer.
3. Filtrer la ....

Résultats

Les reins et le système urinaire inférieur sont trouvent dorsal à la plupart des autres organes internes comme le foie et les intestins. Après avoir retiré ces autres organes internes, une paire de reins et uretères et la vessie unique sont visibles (Figure 1 a). Après dissection réussie, le colorant injecté dans le bassinet coulera du rein dans la vessie par l’uretère. Le bassinet est l’entonnoir dilatée partie proximale de l’uretère du rein. Par conséquent,.......

Discussion

Les reins de souris sont fonctionnelles en commençant à E16.5 et un test d’injection de colorant est théoriquement possible à partir de ce point dans le temps. Toutefois, le rein est trop petit pour être injectés avec la solution de colorant et phénotypes comme hydronéphrose et hydroureter ne sont pas clairement respectées puisque ces phénotypes sont un effet secondaire de l’urine accumulée dues au transport de l’urine anormale. Ces phénotypes, des obstructions telles que UPJO ou UVJO, sont visibles à E18.5 par distendu .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Bleu de méthylène	Sigma-Aldrich	M9140
Quality Biological Inc. SALINE NORMALE - 500ML	Fisherscientific	50-983-204
Seringue jetable de 3 mL avec embout BD Luer-Lok	BD	309657
Filtres pour seringues Acrodisc avec membrane Supor	Pall corporation	4614
Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets ; 27G x 3/4" 12"  ;	EXELINT	26709
Ciseaux opératoires délicats	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-6702
Micro pince à dissection	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5135
Pince à épiler Dumont ; Modèle #5	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5045
BD Aiguilles PrecisionGlide 30 G x 1/2	BD	305106

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