Evaluación defectos de obstrucción urinaria cruce por la inyección de tinte de azul de metileno
Summary
Inyección de colorante azul de metileno en la pelvis renal facilita la evaluación de los defectos de obstrucción urinaria cruce durante el desarrollo embrionario las vías urinarias del ratón. Aquí, se describe un protocolo para la inyección de colorante azul de metileno en la pelvis renal.
Abstract
Defectos de la obstrucción urinaria cruce son anomalías congénitas inducción de hidronefrosis e Hidrouréter. Defectos de obstrucción urinaria murino cruce pueden evaluarse mediante el seguimiento flujo de tinte de azul de metileno dentro del sistema urinario. Se inyecta azul de metileno en la pelvis renal de riñones embrionarios perinatales y flujo del tinte es monitoreado desde la pelvis renal del riñón por el uréter y en el lumen de la vejiga después de aplicar presión hidrostática. Acumulación de tinte será evidente en el lumen de la vejiga del tracto urinario perinatal normal, pero será limitada entre la pelvis renal y el punto final de un uréter anormal, si se producen obstrucciones del tracto urinario. Este método facilita la confirmación de obstrucción de vías urinarias cruce y visualización del hydronephrosis y del hydroureter. Este manuscrito describe un protocolo para la inyección de tinte de azul de metileno en la pelvis renal para confirmar obstrucciones de cruce de las vías urinarias.
Introduction
El sistema urinario consiste en un par de riñones y uréteres comunes vejiga y uretra. La función principal del sistema urinario es mantener la homeostasis del cuerpo al administrar el equilibrio de agua y electrolitos de la sangre. Los riñones filtran la sangre para control las concentraciones de electrolitos y equilibrio acido-base y producen orina para excretar el exceso de agua y residuos incluidos los solutos y metabolitos. Orina es transportada a través del uréter de la pelvis renal del riñón a la bladderin una manera unidireccional donde se almacenan y finalmente eliminado a través de la uretra1.
Los uréteres son tubos rectos que se origina en el conducto nephric. Después de la brotación del conducto nephric en el día embrionario 10.5 (E10.5) en el ratón, el tallo del uréter se alarga y distingue a una estructura de varias capas llamada urotelio que es impermeable entre ratón E12.5 y E16.5. Las células mesenquimales que rodea el tallo del uréter también se diferencian en tres capas que consiste de internas células del estroma, células de grosor intermedio del músculo liso y fibroblastos adventitial externos. Se propagan las ondas peristálticas ureterales iniciando en la pelvis renal a través de la capa de músculo liso de la pared del uréter a la vejiga para el transporte de orina2,3, que se produce a partir de E16.5 en el ratón1.
Anomalías congénitas del riñón y vías urinarias (CAKUT) se encuentran entre las enfermedades genéticas más frecuentes, presentes en aproximadamente el 1% de fetos humanos1,4y compuesto de una variedad de fenotipos como hidronefrosis e Hidrouréter. La acumulación anormal de orina en el riñón y del uréter produce hydronephrotic del riñón e Hidrouréter formación. Una causa de hidronefrosis o Hidrouréter formación es una obstrucción de las vías urinarias. Obstrucción de la UUP (UPJO) es causada por el flujo de orina aberrantes debido a una obstrucción entre el uréter proximal y la pelvis renal, dando por resultado hydronephrosis y estrechamiento proximal Hidrouréter con forma angular o persistente plegable5, 6. Además, la inserción ectópica del uréter distal en la pared de la vejiga o el tracto reproductivo se denomina obstrucción ureterovesical (UVJO). UVJO también puede inducir la hidronefrosis y hydromegaureter de7,de formación8. Un defecto de unión (UVJ) ureterovesical adicional es el reflujo vesicoureteral (RVU). VUR se caracteriza por flujo retrógrado de orina desde la vejiga hacia el riñón en UVJ. En comparación con UVJO, perinatales embriones con RVU no claramente muestran un riñón hydronephrotic dilatado o Hidrouréter severa fenotipo9.
En el ratón de laboratorio, flujo de orina puede ser examinado por la inyección de un colorante, como azul de metileno, en la pelvis renal9. La solución de azul de injectedmethylene traza la trayectoria de la orina desde la pelvis renal a través del uréter y la vejiga. La hidronefrosis puede ser reconocida por una expansión del tinte en el riñón. UPJO puede ser detectado como una obstrucción del flujo del tinte en el uréter proximal con pelvis renal dilatada5. Cualquier dilatación del uréter indicada un diámetro ensanchado muestra un ejemplo de Hidrouréter. Finalmente, acumulación de tinte en la pared de la vejiga o en el sitio del tracto reproductivo indica UVJO con riñón hydronephrotic distendido y dilatado hydromegaureter7,10. Para detectar el RVU, la solución de tinte se inyecta en la vejiga y el posterior flujo retrógrado es monitoreado en el riñón9.
Aquí, se presenta un protocolo para la inyección de tinte de azul de metileno en la pelvis renal de un embrión perinatal. Este protocolo permite el rastreo de flujo de la orina desde la pelvis renal a través del uréter y la vejiga y verifica posibles obstrucciones de cruce vías urinarias tales como UPJO o UVJO.
Protocol
Representative Results
Discussion
Riñones de ratón son funcionales a partir de las E16.5 y una prueba de inyección de tinte es teóricamente posible a partir de este momento. Sin embargo, el riñón es demasiado pequeño para ser inyectada con la solución de tinte y fenotipos como hidronefrosis Hidrouréter no se observan claramente puesto que estos fenotipos son un efecto secundario de orina acumulado debido al transporte anormal de la orina. Estos fenotipos, de los obstáculos como UPJO o UVJO, son evidentes en E18.5 por distensión de los riñones…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradezco a Dr. Alan O. Perantoni (NIH/NCI/CDOBLE) para apoyar la presentación de este manuscrito. También agradezco el Dr. Michael Hall (NIH/NCI/CDOBLE) y Nirmala Sharma (NIH/NCI/CDOBLE) para la edición de este manuscrito. Agradezco a Lai Thang (SAIC) para su cría de ratón excelente. Este trabajo fue apoyado por los institutos nacionales de salud, Instituto Nacional del cáncer y centro de investigación del cáncer.
Materials
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE – 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
| Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
References
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