基于芯片的三维细胞培养，在灌注微生物反应器
Summary
我们描述了一个在微型生物反应器培养细胞的三维芯片为基础的平台。一个芯片上可以容纳10百万。无菌，封闭的循环回路中流体流动，氧张力等方面的准确界定条件下，可以培养细胞。
Abstract
我们已经开发了一个基于芯片的细胞培养系统细胞的立体种植。该芯片通常是从非生物降解的聚合物，如聚碳酸酯或聚甲基丙烯酸甲酯微注塑，微热压印或微热成型生产。但是，它也可以制造可生物降解的聚合物。其外形尺寸为0.7 1 × 20 × 20 × 0.7毫米（高x宽x长）。所使用的芯片的主要特点是高达1156立方米的微容器（CF -芯片）的网格，每个大小120-300 × 300 × 300μ（高x宽x长）或圆形凹槽直径为300μ和深度300μ（R -芯片）。支架可容纳10百万。细胞在三维配置。对于一个最佳的营养和天然气供应，该芯片是插在生物反应器外壳。生物反应器是一个封闭的无菌循环回路，在最简单的配置，是additionaly滚筒泵和气体供应的一个中型水库组成部分。生物反应器，可以运行在灌注，灌流，甚至混合操作模式。我们已经成功地培养了几个星期的时期细胞系以及原代细胞。对于大鼠原发性肝癌细胞中，我们可以显示保存2周以上的器官功能。对于肝癌细胞株中，我们可以显示没有或只有轻微表示在标准的单层培养的肝特异性基因的诱导。该系统也可能是有用的干细胞培养制度以来第一个干细胞系分化实验是大有前途的。
Protocol
Discussion
我们已经制定了一个积极灌注的微型生物反应器培养细胞的三维芯片为基础的的平台。该芯片可制造从非生物降解性以及可生物降解聚合物微注塑成型，热压以及微热成型技术3。根据实验设计，在聚合物表面，可以修改紫外线照射 4 。肝细胞系以及原代大鼠肝细胞可以成功地种植这些设备，可以通过一些肝特异基因表达分析以及一些肝脏5,6特定蛋白质的分析显示。
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们想感谢Mechthild Herschbach和安科Dech优秀的技术援助。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cells | Other | ATCC | HB-8065 | |
| Collagen I from rat tail | Reagent | Roche Diagnostics | 11 179 179 001 | |
| PARIS kit | Reagent | Ambion Inc. | AM1921 | |
| Syto16 | Reagent | Invitrogen | S7578 | |
| anti cytokeratin 18 | Antibody | Abcam plc | ab668 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/100 in PBS |
| Anti E-cadherin | Antibody | Abcam plc | ab1416 | Primary Ab, Mouse monoclonal, used 1/50 in PBS. |
| Goat anti-albumin | Reagent | Bethyl Laboratories | E80-129 | Primary Ab, goat anti-human Albumin, used 1/200 in PBS |
| Rabbit anti-mouse IgG1 | Antibody | Invitrogen | A11059 | Secondary Ab, Alexa Flour 488 conjugated, used 1/100 in PBS + 0.5 % BSA |
| Cy3 anti-goat IgG | Reagent | Jackson ImmunoResearch Lab | 705-165-003 | Cy3 AffiniPure donkey a-goat IgG Ab, used 1/700 in PBS + 0.5% BSA |
References
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