Beoordeling van Dictyostelium discoideum reactie op Acute mechanische stimulatie
Summary
Hier beschrijven we methoden voor de beoordeling van de cellulaire reactie op acute mechanische stimulatie. In de microscopie gebaseerde assay onderzoeken we lokalisatie van fluorescently-geëtiketteerden biosensoren na korte stimulatie met schuintrekken stroom. We testen ook activering van verschillende eiwitten van belang in reactie op acute mechanische stimulatie biochemically.
Abstract
Chemotaxis, of de migratie van een verloop van een chemoattractant, is het best te begrijpen wijze van gestuurde migratie. Studies met behulp van sociale amoeba Dictyostelium discoideum bleek dat een complex signaaltransductie netwerk van parallelle trajecten de respons op chemoattractants versterkt, en leidt tot vooringenomen actine polymerisatie en uitsteeksel van een pseudopod in de richting van een verloop. Moleculaire mechanismen rijden van andere soorten gestuurde migratie, bijvoorbeeld als gevolg van blootstelling aan het schuintrekken stroom of elektrische velden, zijn daarentegen niet bekend. Vele regulatoren van chemotaxis vertonen lokalisatie bij de regelafstand of de achterblijvende hoek van een cel, migreren, evenals tijdelijke wijzigingen worden weergegeven in de lokalisatie of activering na globale stimulatie met een chemoattractant. Om te begrijpen van de moleculaire mechanismen van andere soorten gestuurde migratie ontwikkelden we een methode waarmee onderzoek van cellulaire reactie op acute mechanische stimulatie op basis van korte (2-5 s) blootstelling aan stroom schuintrekken. Deze stimulatie kan geleverd worden in een kanaal terwijl imaging cellen uiten fluorescently-geëtiketteerden biosensoren te onderzoeken van de individuele cel gedrag. Bovendien kan celpopulatie worden gestimuleerd in een plaat, lysed, en immunoblotted met behulp van antilichamen die actieve versies van proteïnen van belang herkent. Door het combineren van beide tests, kan men een breed scala van moleculen geactiveerd door veranderingen in subcellular localisatie en/of fosforylatie onderzoeken. Using zulks werkwijze vastbesloten wij dat acute mechanische stimulatie activering van de Chemotactische signaal transductie en actine cytoskelet netwerken activeert. De mogelijkheid te onderzoeken van cellulaire reacties op acute mechanische stimulatie is belangrijk voor het begrijpen van de initiatiefnemende gebeurtenissen nodig zijn voor de beweeglijkheid van de stroom-geïnduceerde schuintrekken. Deze aanpak biedt een instrument voor de studie van de Chemotactische signaaltransductie netwerk zonder de storende invloed van de chemoattractant receptor.
Introduction
Migratie van eukaryotische cellen is bevooroordeeld door middel van diverse chemische en fysische signalen in het milieu, met inbegrip van gradiënten van oplosbare of substraat-gebonden chemoattractants, variabele stijfheid van de substraten, elektrische velden of schuintrekken stroom. Hoewel er al veel vooruitgang in ons begrip van de moleculaire mechanismen chemotaxis rijden, minder is gekend over andere soorten gestuurde migratie en hoe deze uiteenlopende signalen zijn geïntegreerd op cellulair niveau tot een uniforme trekkende reactie.
Regie migratie naar een toenemende concentratie van een chemoattractant omvat drie gedrags componenten: beweeglijkheid, directionele sensing en polariteit1. Motility verwijst naar willekeurige verkeer van cellen bereikt door pseudopod uitsteeksel. Directionele sensing is de mogelijkheid van een cel om de oorzaak van een chemoattractant worden opgespoord, die kan optreden zelfs in cellen geïmmobiliseerd. Polariteit verwijst naar de meer stabiele asymmetrische distributie van intracellulaire componenten tussen de leading en lagging rand van een cel, die tot verhoogde persistentie in beweging leidt.
Cellulaire reactie op een chemoattractant hangt af van de activiteit van vier conceptueel gedefinieerde regulerende netwerken: receptor / G eiwit, signaaltransductie, actine cytoskelet en polariteit1. Chemoattractant binding aan de G eiwit-gekoppelde receptor stuurt het signaal via heterotrimeric G eiwitten α en βγ op het stroomafwaarts signaaltransductie netwerk, dat het signaal directionele versterkt. Meerdere trajecten binnen het netwerk signaaltransductie handelen in parallel en worden meegenomen bij het actine cytoskelet netwerk aan bias actine polymerisatie, en daaruit voortvloeiende pseudopod uitsteeksel, in de richting van het verloop. Belangrijke regulatoren van chemotaxis behoren tot Ras GTPase, TorC2, phosphoinositide 3-kinase (PI3K) fosfatase en Tenzin homolog (PTEN) en guanylyl cyclase. Feedbackmechanismen binnen het netwerk signaaltransductie en tussen de signaaltransductie en actine cytoskelet netwerken verder versterken het antwoord. Ten slotte, het slecht gedefinieerde polariteit netwerk ontvangt input van het cytoskelet actine, en verder vooroordelen het signaaltransductie netwerk ter bevordering van permanente migratie in de richting van het verloop.
Veel van onze mechanistische begrip van chemotaxis werd mogelijk gemaakt door de ontwikkeling van fluorescently-tagged biosensoren voor verschillende onderdelen van de regulerende netwerken. Vele chemotaxis toezichthouders hebben een asymmetrische verdeling van de regelgevende molecuul zelf of haar activiteit. Bijvoorbeeld, biosensoren die herkent geactiveerd versies van kleine GTPases Ras en Rap1-Ras-bindende domeinen van Raf1 (hierna aangeduid als RBD hier) en RalGDS, respectievelijk – lokaliseren naar de voorrand van een chemotaxing cel2,3. Evenzo PI3K en haar product phosphatidylinositol (3,4,5)-trisphosphate (PIP3), erkend door een pleckstrin-homologie (PH) domein, Toon ook lokalisatie aan de voorzijde van een cel4,5. In tegenstelling, een 3-fosfatase-PTEN, die worden omgezet in PIP3 terug phosphatidylinositol (4,5)-difosfaat, lokaliseert aan de rand van de achterstand van de cel-6. Nog belangrijker is, is deze biosensoren wijzigen hun lokalisatie in reactie op de wereldwijde stimulatie met een chemoattractant. Leading edge markers, die cytosolische of op de toppen van de uitsteeksels in een cel rusten, relocalize naar de cortex, overwegende dat achtergebleven rand markeringen, die corticale lokalisatie en zijn afwezig vanaf de toppen van de uitsteeksels in een cel rusten, worden cytosolische na stimulatie. Analyse van biosensor distributie in reactie op de wereldwijde stimulatie met een chemoattractant minimaliseert de bijdrage van de motiliteit en polariteit, die vaak de opmerkingen verwarren. Globale of uniforme stimulatie van een celsuspensie met een chemoattractant wordt ook gebruikt als een instrument voor het beoordelen van wijzigingen voor de gehele bevolking in eiwit activering, vaak gedetecteerd door proteïne fosforylatie7,8,9 . Deze biochemische bepaling wordt voornamelijk gebruikt voor temporele informatie, terwijl microscopie wordt gebruikt om zowel temporele en ruimtelijke informatie verzamelen over het gedrag van verschillende onderdelen van de regulerende netwerken.
Het signaaltransductie netwerk omvat functies van een prikkelbaar systeem10,11. Reacties op supra-drempel Chemotactische stimuli zijn “all-or-none” en vuurvaste punten weergegeven. Reacties zijn ook stochastically geactiveerd en oscillerende gedrag kunnen tonen. Signaaltransductie gebeurtenissen zijn gelokaliseerd aan regio’s van de cortex die als golven12,13,14,15 verspreiden. Voorste, terug, markeringen worden gerekruteerd voor of distantiëren van, de actieve zones van het teeltmateriaal golven. Als gevolg van de achterstand van de actieve zone vuurvaste regio vernietigen de tegengesteld gerichte golven als ze elkaar ontmoeten. Het teeltmateriaal signaaltransductie golven ten grondslag liggen aan de cellulaire uitsteeksels die cel migratie10bemiddelen.
Veel van de bovengenoemde informatie over chemotaxis kwam van de studies op de sociale Amoebe Dictyostelium discoideum, hoewel soortgelijke regulerende mechanismen zijn ook van toepassing op de neutrofielen en andere zoogdieren cel typen16 . Dictyostelium is een reeds lang gevestigde modelorganisme dat een robuuste Chemotactische reactie tijdens hongersnood, heeft wanneer duizenden afzonderlijke cellen naar een aggregatie midden migreren, uiteindelijk de vorming van een meercellig fruiting body met sporen. Chemotaxis is ook essentieel in de fase van de eencellige groei van dit organisme voor het lokaliseren van bacteriële voedselbronnen. Belangrijker, is migratie van afzonderlijke Dictyostelium cellen opvallend vergelijkbaar met de migratie van zoogdieren neutrofielen of metastatische kankercellen, die allemaal zeer snelle Wortelpotigen-type migratie ondergaan. In feite, worden zowel de algemene topologie van de regulerende netwerken, evenals veel van de individuele signaaltransductie trajecten die betrokken zijn bij chemotaxis bewaard tussen Dictyostelium en zoogdieren leukocyten17. Bovendien andere cellen, zoals fibroblasten, receptor tyrosine kinases (RTK) gebruiken in plaats van GPCRs; RTKs kunnen echter voeden in soortgelijke netwerken.
In tegenstelling tot chemotaxis ontbreekt grondig inzicht in de signalering mechanismen die verschillende andere vervoerswijzen gestuurde migratie rijden. Ook naar cellen migreren in een chemoattractant verloop verscheidene studies hebben gemeld activering en/of de lokalisatie van typische voorrand markers, met inbegrip van actine polymerisatie, PIP3 en/of extracellulaire signaal-gereglementeerde kinase (ERK) 1/2, op de voorkant van cellen ondergaan regisseerde migratie in reactie op stroom of veranderingen in elektrische velden18,19,20,21schuintrekken. Echter, in deze studies continue blootstelling aan de prikkel ook resulteerde in cel migratie, bloot de vraag, bijvoorbeeld, de toonaangevende markers lokaliseren speciaal in reactie op een prikkel, of als ze gewoon lokaliseren op de voorrand vanwege toegenomen aantal pseudopods aan de voorzijde van een migreren cel.
We ontwikkeld testen die ons toelaten te observeren de reactie van cellen op acute mechanische perturbation geleverd als schuintrekken stroom zowel op het bevolkingsniveau en als afzonderlijke cellen22. Vergelijkbaar met de globale stimulatie met een chemoattractant, acute stimulation met schuintrekken stroom maakt de studie van een cellulaire reactie op een mechanische prikkel zonder de storende bijdrage van beweeglijkheid of polariteit. Deze biochemische en microscopische tests te combineren met genetische of farmacologische verstoringen ons toelaat om te leren over hoe mechanische stimuli worden waargenomen en verzonden. Bovendien biedt deze aanpak ook een nieuwe methode voor te tikken in het systeem stroomafwaarts van de chemoattractant receptor in het ontbreken van een chemoattractant, waardoor het isoleren van de netwerken van de signaal transductie en actine de cytoskelet van de receptor/G eiwit netwerk.
Met behulp van de technieken die hieronder we onlangs aangetoond dat acute shear stress leidt tot activatie van meerdere onderdelen van de Chemotactische signaal transductie en actine cytoskelet netwerken22. Door de acute mechanische stimulus toe te passen op verschillende tijdstippen, we laten zien dat ook aan chemoattractants, reactie op mechanische stimuli ook kenmerken van een prikkelbaar systeem vertoont, met inbegrip van het all-or-none gedrag van de reactie onder verzadigen van de voorwaarden en de aanwezigheid van een refractaire periode. Tot slot, door een combinatie van mechanische en chemische stimulatie we bleek dat de twee prikkels aandeel signaal transductie en actine cytoskelet netwerken, waardoor waarschijnlijk voor de integratie van meerdere stimuli bias cel migratie.
Protocol
Representative Results
Discussion
De hier beschreven methoden bieden een handige manier om te beoordelen van zowel de bevolking als afzonderlijke cel gedrag in antwoord als u wilt schuintrekken van stroom. Nog belangrijker is, terwijl eerdere studies geanalyseerd lokalisatie van leading en lagging rand markeringen tijdens de migratie, laat de huidige aanpak onderzoek van de onmiddellijke effecten door de stroom van de shear acuut toe te passen. Using zulks werkwijze wij aangetoond dat in feite de eerste reactie van cellen wilt schuintrekken stroom niet c…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd gesteund door de National Institutes of Health subsidie R35 GM118177 PND.
Materials
| Reagents | |||
| Dextrose | Fisher | D16-1 | Use to prepare HL-5 media and SM plates (steps 1.1, 1.2) |
| Proteose peptone | Fisher | DF0120-17-6 | Use to prepare HL-5 media (step 1.1) |
| Yeast extract | Fisher | 50-550-445 | Use to prepare HL-5 media and SM plates (steps 1.1, 1.2) |
| Na2HPO4·7H2O | Fisher | S373-500 | Use to prepare HL-5 media, and 10X Phosphate Buffer (steps 1.1, 1.3) |
| KH2PO4 | Fisher | P386-500 | Use to prepare HL-5 media, SM plates, and 10X Phosphate Buffer (steps 1.1-1.3) |
| Streptomycin (dihydrostreptomycin sulfate) | Fisher | ICN10040525 | Use to prepare HL-5 media (step 1.1) |
| Peptone (Bacto) | Fisher | DF0118-17-0 | Use to prepare SM plates (step 1.2) |
| K2HPO4 | Fisher | P288-100 | Use to prepare SM plates (step 1.2) |
| Agar | Fisher | BP1423-500 | Use to prepare SM plates (step 1.2) |
| MgSO4 | Fisher | M65-500 | Use to prepare DB Buffer (step 1.4) |
| CaCl2 | Fisher | C79-500 | Use to prepare DB Buffer (step 1.4) |
| Caffeine | Fisher | O1728-500 | Use to prepare caffeine (step 1.5) |
| cAMP (EMD Millipore Calbiochem Adenosine 3 ft.,5 ft.-cyclic Monophosphate, Sodium Salt) | Fisher | 11-680-1100MG | Use to prepare cAMP (step 1.6) |
| Folic acid | Sigma | F7876 | Use to prepare folic acid (step 1.7) |
| Tris base | Fisher | BP152-500 | Use to prepare 3X sample buffer (step 1.8) |
| Sodium dodecyl sulfate (SDS) | Fisher | BP166-500 | Use to prepare 3X sample buffer (step 1.8) |
| Glycerol | Fisher | G33-500 | Use to prepare 3X sample buffer (step 1.8) |
| Dithiothreitol (DTT) | Bio-Rad | 1610610 | Use to prepare 3X sample buffer (step 1.8) |
| Bromophenol blue | Bio-Rad | 1610404 | Use to prepare 3X sample buffer (step 1.8) |
| NaF | Fisher | S299-100 | Use to prepare sample buffer with protease and phosphatase inhibitors (step 1.8) |
| Na3VO4 | Fisher | 50-994-911 | Use to prepare sample buffer with protease and phosphatase inhibitors (step 1.8) |
| Sodium pyrophosphate decahydrate | Fisher | S390-500 | Use to prepare sample buffer with protease and phosphatase inhibitors (step 1.8) |
| Complete EDTA-free protease inhibitor cocktail (Roche) | Sigma | 11873580001 | Use to prepare sample buffer with protease and phosphatase inhibitors (step 1.8) |
| Latrunculin A | Enzo Life Sciences | BML-T119-0100 | Use to prepare Latrunculin A (step 1.9) |
| 4-15% Tris-HCl polyacrylamide gel | Bio-Rad | 3450029 | Use for immunoblotting (step 3.3) |
| Polyvinylidene fluoride membrane | Bio-Rad | 1620177 | Use for immunoblotting (step 3.3) |
| Phospho-PKC (pan) (zeta Thr410) (190D10) Rabbit antibody | Cell Signaling | 2060 | Primary antibody for use in immunoblotting (step 3.3) |
| Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP antibody | Cell Signaling | 4370 | Primary antibody for use in immunoblotting (step 3.3) |
| Rabbit IgG HRP Linked Whole Ab (from Donkey) | GE Healthcare | NA934-100UL | Secondary antibody for use in immunoblotting (step 3.3) |
| Enhanced chemiluminescence substrate (Clarity Western ECL Substrate) | Bio-Rad | 1705060 | Use for immunoblotting (step 3.3) |
| Stripping buffer (Restore Plus Western blot stripping buffer) | Pierce | PI46430 | Use for immunoblotting (step 3.3) |
| Coomassie Brilliant Blue | Fisher | PI20278 | Use for immunoblotting (step 3.3) |
| K. aerogenes strain (non-pathogenic) | Dicty Stock Center (dictybase.org) | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Materials and Equipment | |||
| Orbital shaker (model G-33, or a comparable alternative) | New Brunswick Scientific | Use to grow K. aerogenes (step 2.1.1), and to basalate and stimulate D. discoideum cells (step 3). The radius of gyration for this shaker is 9.5 mm. | |
| 10 cm Petri dish | Fisher | FB0875712 | Use to prepare SM plates (step 1.2) |
| Hemocytometer | Fisher | 02-671-51B | Use to count D. discoideum cells (step 2.1.2) |
| 35 mm dish (Corning Falcon Easy-Grip Tissue Culture Dish) | Fisher | 08-772A | Use to plate D. discoideumcells for mechanical stimulation followed by cell lysis (step 3.1.1) |
| Polystyrene cup (5 mL) | VWR | 13915-985 | Use to stimulate D. discoideum cell suspension with a chemoattractant (step 3.2.2) |
| Fluidic unit with pump (ibidi Pump System) | Ibidi | 10902 | Use to deliver mechanical stimulation to D. discoideum cells in a channel (steps 4.1, 4.2, and 5) |
| Slide with a channel (μ-Slide III 3in1 ibiTreat: #1.5 polymer coverslip, tissue culture treated, sterilized) | Ibidi | 80316 | Use to plate D. discoideum cells for mechanical stimulation delivered by a fluidic device (steps 4.1, 4.2, and 5) |
| 50 mL reservoirs (Ibidi Reservoir Holder for Fluidic Unit) | Ibidi | 10978 | Use to setup the fluidic device for delivering mechanical stimulation to D. discoideum cells in a channel (steps 4.1, 4.2, and 5) |
| Lines for the fluidic unit (Perfusion Set YELLOW-and-GREEN) | Ibidi | 10964 | Use to setup the fluidic device for delivering mechanical stimulation to D. discoideum cells in a channel (steps 4.1, 4.2, and 5). Note: the two lines can also be cut from the 1.6 mm tubing (catalog number 10842). |
| Line for the drain (1.6 mm ID tubing) | Ibidi | 10842 | Use to setup the fluidic device for delivering mechanical stimulation to D. discoideum cells in a channel (steps 4.1, 4.2, and 5). |
| Zeiss Observer.Z1 inverted microscope equipped with a 40X/1.3 oil objective and a 20X/0.3 air objective (or a comparable alternative) | Zeiss | Used to image D. discoideum cells with phase-contrast or fluorescence illumination (steps 4 and 5) | |
| UltraView spinning disk confocal microscope equipped with a 40×/1.25–0.75 oil objective (or a comparable alternative) | Perkin-Elmer | DM 16000 | An alternative used to image D. discoideum cells (step 4.1.4) |
| FemtoJet Microinjector (Eppendorf; model 5247, or a comparable alternative) with Eppendorf InjectMan | Eppendorf | 5252000021D and 5192000027 | Use to deliver mechanical stimulation to D. discoideum cells by a micropipette (step 4.3). Note: catalog number are for the newest version of the equipment (4i). |
| Micropipette (Femtotip; 1 μm outside diameter, 0.5 μm inside diameter ) | Eppendorf | 930000035 | Use to deliver mechanical stimulation to D. discoideum cells by a micropipette (step 4.3) |
| Microloader tips (Eppendorf Femtotips Microloader Tips for Femtojet Microinjector) | Eppendorf | 5242956.003 | Use to fill the micropipette (femtotip) with buffer (step 4.3.1) |
| 1-well chamber (Thermo Scientific Nunc Lab-Tek Chambered Coverglass) | Fisher | 12-565-472 | Use to plate D. discoideum cells for mechanical stimulation delivered by a micropipette (step 4.3.2) |
| 8-well chamber (Thermo Scientific Nunc Lab-Tek II Chambered Coverglass) | Fisher | 12-565-338 | Use to plate D. discoideum cells for mechanical stimulation delivered by bulk buffer addition (step 4.4.1) |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Software | |||
| Image Analysis Software (Fiji) | NIH | https://fiji.sc/ | Use to quantify response to mechanical stimulation (step 4.5) |
| Migration analysis software (Tracking Tool PRO) | Gradientech | http://gradientech.se/tracking-tool-pro/ | Use to quantify cell speed and persistence (step 5.4) |
References
- Swaney, K. F., Huang, C. H., Devreotes, P. N. Eukaryotic chemotaxis: a network of signaling pathways controls motility, directional sensing, and polarity. Annu Rev Biophys. 39, 265-289 (2010).
- Sasaki, A. T., Chun, C., Takeda, K., Firtel, R. A. Localized Ras signaling at the leading edge regulates PI3K, cell polarity, and directional cell movement. J Cell Biol. 167 (3), 505-518 (2004).
- Jeon, T. J., Lee, D. -. J., Merlot, S., Weeks, G., Firtel, R. A. Rap1 controls cell adhesion and cell motility through the regulation of myosin II. J Cell Biol. 176 (7), 1021-1033 (2007).
- Parent, C. A., Blacklock, B. J., Froehlich, W. M., Murphy, D. B., Devreotes, P. N. G Protein Signaling Events Are Activated at the Leading Edge of Chemotactic Cells. Cell. 95 (1), 81-91 (1998).
- Funamoto, S., Meili, R., Lee, S., Parry, L., Firtel, R. A. Spatial and Temporal Regulation of 3-Phosphoinositides by PI 3-Kinase and PTEN Mediates Chemotaxis. Cell. 109 (5), 611-623 (2002).
- Iijima, M., Devreotes, P. Tumor Suppressor PTEN Mediates Sensing of Chemoattractant Gradients. Cell. 109 (5), 599-610 (2002).
- Lim, C. J., Spiegelman, G. B., Weeks, G. RasC is required for optimal activation of adenylyl cyclase and Akt/PKB during aggregation. EMBO J. 20 (16), 4490-4499 (2001).
- Kamimura, Y., et al. PIP3-Independent Activation of TorC2 and PKB at the Cell’s Leading Edge Mediates Chemotaxis. Curr Biol. 18 (14), 1034-1043 (2008).
- Kortholt, A., King, J. S., Keizer-Gunnink, I., Harwood, A. J., Van Haastert, P. J. M. Phospholipase C Regulation of Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate-mediated Chemotaxis. Molecular Biology of the Cell. 18 (12), 4772-4779 (2007).
- Huang, C. H., Tang, M., Shi, C., Iglesias, P. A., Devreotes, P. N. An excitable signal integrator couples to an idling cytoskeletal oscillator to drive cell migration. Nat Cell Biol. 15 (11), 1307-1316 (2013).
- Nishikawa, M., Hörning, M., Ueda, M., Shibata, T. Excitable Signal Transduction Induces Both Spontaneous and Directional Cell Asymmetries in the Phosphatidylinositol Lipid Signaling System for Eukaryotic Chemotaxis. Biophys J. 106 (3), 723-734 (2014).
- Gerisch, G., et al. Mobile Actin Clusters and Traveling Waves in Cells Recovering from Actin Depolymerization. Biophys J. 87 (5), 3493-3503 (2004).
- Gerisch, G., Ecke, M., Wischnewski, D., Schroth-Diez, B. Different modes of state transitions determine pattern in the Phosphatidylinositide-Actin system. BMC Cell Biol. 12 (1), 42 (2011).
- Bretschneider, T., et al. The Three-Dimensional Dynamics of Actin Waves, a Model of Cytoskeletal Self-Organization. Biophys J. 96 (7), 2888-2900 (2009).
- Weiner, O. D., Marganski, W. A., Wu, L. F., Altschuler, S. J., Kirschner, M. W. An Actin-Based Wave Generator Organizes Cell Motility. PLOS Biol. 5 (9), e221 (2007).
- Devreotes, P., Horwitz, A. R. Signaling Networks that Regulate Cell Migration. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 7 (8), (2015).
- Artemenko, Y., Lampert, T. J., Devreotes, P. N. Moving towards a paradigm: common mechanisms of chemotactic signaling in Dictyostelium and mammalian leukocytes. Cell Mol Life Sci. 71 (19), 3711-3747 (2014).
- Dalous, J., et al. Reversal of cell polarity and actin-myosin cytoskeleton reorganization under mechanical and chemical stimulation. Biophys J. 94 (3), 1063-1074 (2008).
- Sato, M. J., et al. Switching direction in electric-signal-induced cell migration by cyclic guanosine monophosphate and phosphatidylinositol signaling. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (16), 6667-6672 (2009).
- Zhao, M., Pu, J., Forrester, J. V., McCaig, C. D. Membrane lipids, EGF receptors, and intracellular signals colocalize and are polarized in epithelial cells moving directionally in a physiological electric field. Faseb j. 16 (8), 857-859 (2002).
- Decave, E., et al. Shear flow-induced motility of Dictyostelium discoideum cells on solid substrate. J Cell Sci. 116 (Pt 21), 4331-4343 (2003).
- Artemenko, Y., Axiotakis, L., Borleis, J., Iglesias, P. A., Devreotes, P. N. Chemical and mechanical stimuli act on common signal transduction and cytoskeletal networks. Proc Natl Acad Sci U S A. 113 (47), E7500-E7509 (2016).
- Artemenko, Y., Swaney, K. F., Devreotes, P. N. Assessment of development and chemotaxis in Dictyostelium discoideum mutants. Methods Mol Biol. 769, 287-309 (2011).
- Gaudet, P., Pilcher, K. E., Fey, P., Chisholm, R. L. Transformation of Dictyostelium discoideum with plasmid DNA. Nat. Protocols. 2 (6), 1317-1324 (2007).
- Veltman, D. M., Lemieux, M. G., Knecht, D. A., Insall, R. H. PIP3-dependent macropinocytosis is incompatible with chemotaxis. J Cell Biol. 204 (4), 497-505 (2014).
- Cai, H., Huang, C. H., Devreotes, P. N., Iijima, M. Analysis of chemotaxis in Dictyostelium. Methods Mol Biol. 757, 451-468 (2012).
- Schindelin, J., et al. Fiji: an open-source platform for biological-image analysis. Nat Meth. 9 (7), 676-682 (2012).
- Brenner, M., Thoms, S. D. Caffeine blocks activation of cyclic AMP synthesis in Dictyostelium discoideum. Dev Biol. 101 (1), 136-146 (1984).
- Bretschneider, T., et al. Dynamic Actin Patterns and Arp2/3 Assembly at the Substrate-Attached Surface of Motile Cells. Curr Biol. 14 (1), 1-10 (2004).
- Swaney, K. F., Borleis, J., Iglesias, P. A., Devreotes, P. N. Novel protein Callipygian defines the back of migrating cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 112 (29), E3845-E3854 (2015).
- Meili, R., Ellsworth, C., Firtel, R. A. A novel Akt/PKB-related kinase is essential for morphogenesis in Dictyostelium. Curr Biol. 10 (12), 708-717 (2000).
- Westendorf, C., et al. Actin cytoskeleton of chemotactic amoebae operates close to the onset of oscillations. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (10), 3853-3858 (2013).
