На основе шар травмы побудить Myointimal гиперплазии в мыши брюшной аорты
Summary
Эта статья демонстрирует мышиных модель для изучения развития myointimal гиперплазия (MH) после травмы аорты шар.
Abstract
Использование животных моделей имеет важное значение для лучшего понимания MH, одной из основных причин для артерий стеноза. В этой статье мы демонстрируем мышиных шар денудации модель, которая сопоставима с установленным судно травмы модели в крупных животных. Аорта денудации модель с Баллонные катетеры имитирует клинических условиях и приводит к сопоставимым pathobiological и физиологических изменений. Кратко после выполнения горизонтальный разрез в аорте abdominalis, баллонный катетер будет вставлен в судно, завышены и представил retrogradely. Инфляция шара приведет к интимы травмы и растяжением судна. После удаления катетера, аортальный разрез будет закрыт с одной швами. Модель, показанные в этой статье, воспроизводимость, легко выполнить и могут быть созданы быстро и надежно. Это особенно подходит для оценки дорогих экспериментальной терапевтических агентов, которые могут быть применены экономичным образом. С помощью различных штаммов нокаут мышь, можно оценить влияние различных генов на MH развития.
Introduction
Артерий стеноза коронарных и периферических артерий имеет большое влияние на заболеваемость и смертность больных1. Один основной патологический механизм является myointima гиперплазия (MH), который характеризуется повышенной распространения, миграции и синтез белков внеклеточного матрикса от сосудистой гладкомышечные клетки (SMC)2. SMC расположены в слое СМИ судна и мигрируют на стимуляции поверхности просвета. Стимулирующее сигналы включают факторы роста, цитокины, контакт ячеек, липиды, компоненты внеклеточного матрикса и механических ножниц и растягивать силы3,4,5,6. Травм стенок сосудов, патологических или ятрогенные, вызывают повреждения клеток гладких мышц и эндотелиальных клеток и стимулировать воспалительной реакции и таким образом привести к MH7.
Различные животные модели в настоящее время доступны для изучения артериальной травмы и myointima гиперплазия. Крупные животные, как свиньи или собаки имеют преимущество обмена аналогичного артерии и коронарной анатомии с людьми и особенно хорошо подходят для исследования расследует ангиопластики методы, процедуры и устройства8. Однако свинья модели имеют недостаток выше thrombogenicity9,10, в то время как собаки только имеют мягкий ответ на травмы судно11. Кроме того все большие животные модели требуют специального жилья, оборудование и персонал, которые связаны с высокими затратами и не всегда доступны в учебном заведении. Малые животные модели включают крыс и мышей. По сравнению с крыс, мышей имеют преимущества более низкой стоимости и существование различных выбить модели. Модель, описанную в этом видео может сочетаться с ароЕ / мышей кормили с западной диеты тесно имитировать клинических условиях ангиопластика сосудов атеросклеротические12. Предыдущие модели индуцированной сосудистых повреждений через провод травмы13, жидкости усыхания14, Весна15или травмы манжеты16. Поскольку характер травмы значительно влияют на развитие и Конституции MH, с использованием баллонного катетера побудить травмы судно является лучшим способом имитировать клинических условиях.
В этой статье мы опишем новый метод побудить MH с баллонного катетера в мышах. Использование баллонного катетера (1,2 мм x 6 мм) с RX-порт (рис. 1A) позволяет соскоб интимы слоя и в то же время, индукции растяжением судна. Оба эти фактора являются важными триггеров для развития MH. Время наблюдения для этой модели составляет 28 дней17.
Protocol
Representative Results
Discussion
Эта статья демонстрирует мышиных модель для изучения развития myointimal гиперплазия и позволяет изучение основных патологических процессов и испытаний новых лекарств или терапевтические возможности.
Наиболее важным этапом в этот протокол является денудации аорты. Особое…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы благодарят Christiane Pahrmann за ее технической помощи.
D.W. был поддержан фондом Kade Max. T.D. получили гранты от еще Kröner фонд (2012_EKES.04) и Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1_. S. S. получил гранты на исследования от Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).
Materials
| 10-0 Ethilon suture | Ethicon | 2814G | |
| 3 mL Syringe | BD Medical | 309658 | |
| 37% HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| 5-0 prolene suture | Ethicon | EH7229H | |
| 6-0 prolene suture | Ethicon | 8706H | |
| Acid Fuchsin | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Trichrome staining |
| Antigen retrieval solution | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Trichrome staining |
| Bepanthen Eye and Nose ointment | Bayer | 1578675 | Eye ointment |
| Betadine Solution | Betadine Purdue Pharma | NDC:67618-152 | |
| C57BL/6J | Charles River | Stock number 000664 | |
| Clamp applicator | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| Collagen 3 | abcam | ab7778 | Antibody |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| Donkey anti-Goat IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Secondary antibody |
| Donkey anti-Rabbit IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Secondary antibody |
| Ethanol 70% | Th. Geyer | 2270 | |
| Ethanol 96% | Th. Geyer | 2295 | |
| Ethanol absolute | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | Antibody |
| Forceps fine | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| Forceps standard | Fine Science Tools | 11023-10 | |
| Glacial Acetic Acid | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| Hair clipper | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Heparin | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
| High temperature cautery kit | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Blocking solution |
| Light Green SF | Waldeck | 1B-211 | Trichrome staining |
| Microsurgical clamp | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine – 4mm |
| MINI TREK Coronary Dilatation Catheter 1.20 mm x 6 mm / Rapid-Exchange | Abbott | 1012268-06U | |
| Molybdatophosphoric acid hydrate | Merck | 1.00532.0100 | Trichrome staining |
| NaCl 0,9% | B.Braun | PZN 06063042 Art. Nr.: 3570160 | |
| Needle holder | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Trichrome staining |
| Paraffin | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4% | Electron Microscopy Sciences | #157135S | |
| Ponceau S solution | Serva Electrophoresis | 33427 | Trichrome staining |
| Primary antibody diluent | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Mounting solution | Thermo Fischer | P36930 | Mounting solution for immunofluorescence stained slides |
| Replaceable Fine Tip | Bovie | H101 | |
| Resorcin-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Trichrome staining |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofen |
| Scissors | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Scissors Vannas-style | Fine Science Tools | 15000-03 | |
| Secondary antibody diluent | Dako | S0809 | |
| Fast acting Adhesive MINIS 3x1g | UHU | 45370 | Cyanoacrylate |
| Slide Rack | Ted Pella | 21057 | |
| SM22 | abcam | ab10135 | Antibody |
| SMA | abcam | ab21027 | Antibody |
| Staining dish | Ted Pella | 21075 | |
| Surgical microscope | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrillar | Ethicon | 431962 | Absorbable hemostat |
| Transpore Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| U-100 Insulin syringe | BD Medical | 324825 | |
| Vessel Dilator | Fine Science Tools | 18603-14 | |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Weigerts iron hematoxylin Kit | Merck | 1.15973.0002 | Trichrome staining |
| Xylene | Th. Geyer | 3410 |
References
- Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).
- Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. Intimal proliferation of smooth muscle cells as an explanation for recurrent coronary artery stenosis after percutaneous transluminal coronary angioplasty. J Am Coll Cardiol. 6 (2), 369-375 (1985).
- Greenwald, S. E., Berry, C. L. Improving vascular grafts: the importance of mechanical and haemodynamic properties. J Pathol. 190 (3), 292-299 (2000).
- Majesky, M. W., Schwartz, S. M. Smooth muscle diversity in arterial wound repair. Toxicol Pathol. 18 (4 Pt 1), 554-559 (1990).
- Owens, G. K. Regulation of differentiation of vascular smooth muscle cells. Physiol Rev. 75 (3), 487-517 (1995).
- Owens, G. K., Kumar, M. S., Wamhoff, B. R. Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease. Physiol Rev. 84 (3), 767-801 (2004).
- Kleemann, R., Zadelaar, S., Kooistra, T. Cytokines and atherosclerosis: a comprehensive review of studies in mice. Cardiovasc Res. 79 (3), 360-376 (2008).
- Karas, S. P., et al. Coronary intimal proliferation after balloon injury and stenting in swine: an animal model of restenosis. J Am Coll Cardiol. 20 (2), 467-474 (1992).
- Ip, J. H., et al. The role of platelets, thrombin and hyperplasia in restenosis after coronary angioplasty. J Am Coll Cardiol. 17 (6 Suppl B), 77B-88B (1991).
- Mason, R. G., Read, M. S. Some species differences in fibrinolysis and blood coagulation. J Biomed Mater Res. 5 (1), 121-128 (1971).
- Lafont, A., Faxon, D. Why do animal models of post-angioplasty restenosis sometimes poorly predict the outcome of clinical trials?. Cardiovasc Res. 39 (1), 50-59 (1998).
- Matter, C. M., et al. Increased balloon-induced inflammation, proliferation, and neointima formation in apolipoprotein E (ApoE) knockout mice. Stroke. 37 (10), 2625-2632 (2006).
- Lindner, V., Fingerle, J., Reidy, M. A. Mouse model of arterial injury. Circ Res. 73 (5), 792-796 (1993).
- Simon, D. I., et al. Decreased neointimal formation in Mac-1(-/-) mice reveals a role for inflammation in vascular repair after angioplasty. J Clin Invest. 105 (3), 293-300 (2000).
- Sata, M., et al. A mouse model of vascular injury that induces rapid onset of medial cell apoptosis followed by reproducible neointimal hyperplasia. J Mol Cell Cardiol. 32 (11), 2097-2104 (2000).
- Moroi, M., et al. Interaction of genetic deficiency of endothelial nitric oxide, gender, and pregnancy in vascular response to injury in mice. J Clin Invest. 101 (6), 1225-1232 (1998).
- Painter, T. A. Myointimal hyperplasia: pathogenesis and implications. 2. Animal injury models and mechanical factors. Artif Organs. 15 (2), 103-118 (1991).
- Stubbendorff, M., et al. Inducing myointimal hyperplasia versus atherosclerosis in mice: an introduction of two valid models. J Vis Exp. (87), e51459 (2014).
- Deuse, T., et al. Dichloroacetate prevents restenosis in preclinical animal models of vessel injury. Nature. 509 (7502), 641-644 (2014).
