Method Article

Blessure axée sur le ballon pour provoquer l’hyperplasie Myointimal dans l’aorte abdominale de souris

DOI:

10.3791/56477

⸱

February 7th, 2018

 ,  ,  ,  , 
1Transplant and Stem Cell Immunobiology Lab, University Heart Center, 2Department of Surgery, Transplant and Stem Cell Immunobiology Lab, University of California San Francisco (UCSF), 3Cardiovascular Research Center (CVRC) and DZHK German Center for Cardiovascular Research, 4Cardiovascular Surgery, University Heart Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cet article illustre un modèle murin pour étudier le développement de l’hyperplasie myointimal (MH) après une lésion aortique ballon.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

L’utilisation de modèles animaux est essentielle pour une meilleure compréhension de la MH, une des principales causes de la sténose artérielle. Dans cet article, nous démontrons un modèle murin de ballon dénudation, qui est comparable aux modèles de lésion du navire établies dans les grands animaux. Le modèle de dénudation aorte avec des cathéters à ballonnet imite le contexte clinique et conduit à des changements physiologiques et pathobiological comparables. En bref, après avoir effectué une incision horizontale dans l' aorte abdominalis, un cathéter à ballonnet sera inséré dans le vaisseau, gonflé et introduit marqués. Gonflage du ballonnet conduira à des blessures de l’intima et une surdistension du navire. Après avoir retiré le cathéter, l’incision aortique sera fermée avec des points de suture unique. Le modèle présenté dans cet article est reproductible, facile à réaliser et peut être établie de manière rapide et fiable. Il est particulièrement approprié pour l’évaluation de coûteux agents thérapeutiques expérimentales, qui peuvent être appliqués de façon économique. À l’aide de différentes souches de souris knock-out, l’impact de différents gènes du développement MH peut être évaluée.

Introduction

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La sténose artérielle dans les artères coronaires et périphériques a un effet important sur la morbidité et la mortalité des patients1. Un mécanisme pathologique sous-jacent est l’hyperplasie myointima (MH), qui se caractérise par une augmentation de la prolifération, la migration et la synthèse des protéines de la matrice extracellulaire du muscle lisse vasculaire des cellules (SMC)2. SMC se trouvent dans la couche de support du navire et de migrer lors de la stimulation à la surface de la lumière. Signaux stimulants incluent les facteurs de croissance, cytokines, contact cellule-cellule, lipides, les composants de la m....

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Protocol

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Animaux a reçu tous les soins en conformité avec le Guide pour les principes des animaux de laboratoire, préparé par l’Institut des ressources animales de laboratoire et publié par le National Institutes of Health. Tous les protocoles d’animaux ont été approuvées par l’autorité locale responsable ('' Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, (Bureau pour la santé et la Protection des consommateurs) de Hansestadt Hamburg'').

1. préparation du cathéter

Remarque : Reportez-vous à la Table des matières pour plus d’informations concernant le cathéter.

  1. Prenons cathéter de la titulaire de cath....

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Results

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Dénudation du ballon est un modèle approprié pour étudier le développement du MH chez la souris. Les animaux se remettre bien de la chirurgie et montrent une post-opération excellente condition physique. Nous avons créé ce modèle en 50 souris ayant moins de 3 % la mortalité due à l’intervention chirurgicale. Figures 1 b -C montrent les principales étapes chirurgicales. Après une incision de la peau le long de la linea alba, identifie.......

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Discussion

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Cet article illustre un modèle murin pour étudier le développement de l’hyperplasie myointimal et permet l’exploration des processus pathologiques sous-jacent et les essais de nouveaux médicaments ou les options thérapeutiques.

L’étape la plus critique dans le présent protocole est la dénudation de l’aorte. Une attention particulière devrait être accordée au cours de cette étape car dénudation excessive conduira à la formation de l’anévrisme et la défaillance de modèle. En revanche, si la dénu.......

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Disclosures

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Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Acknowledgements

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Les auteurs remercient Christiane Pahrmann pour son aide technique.

D.W. a été soutenu par la Foundation de Kade Max. T.D. a reçu des subventions de la Fondation de Kröner Else (2012_EKES.04) et la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1_. S. S. a reçu des subventions de recherche de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG ; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
10-0 Suture EthilonEthicon2814G
3 mL SeringueBD Medical309658
37 % HClSigma-AldrichH1758
Suture prolène 5-0EthiconEH7229H
Suture prolène 6-0Ethicon8706H
Fuchsin acideSigma-AldrichF8129-25GColoration trichrome Solution
de récupération d’antigèneDakoS1699
AzophloxinWaldeck1B-103Coloration trichrome
Bepanthen Pommade pour les yeux et le nezBayer1578675Pommade pour les yeux
Betadine Solution de bétadineBetadine Purdue PharmaNDC :67618-152
C57BL/6JCharles RiverNuméro de stock 000664
Pince applicatriceFine Science Tools18056-14MÂCHOIRE DIMS : 4 x 0,75 mm LONGUEUR : 13 mm
Collagène 3abcam ab7778Anticorps
DAPIThermo FischerD1306
Âne anti-Chèvre IgG AF555InvitrogenA21432Anticorps secondaire
Âne anti-Lapin IgG AF488InvitrogenA21206Anticorps secondaire
Âne anti-Lapin IgG AF488InvitrogenA11055Secondaire anticorps
Âne anti-Lapin IgG AF555InvitrogenA31572Anticorps secondaire
Éthanol 70 %Th. Geyer2270
Éthanol 96 %Th. Geyer2295
Éthanol absoluTh. Geyer2246
FAPabcamab28246anticorps
fineOutilsscientifiques fins11251-20
Pince standardOutils de science fine11023-10
Acide acétique glacialSigma-Aldrich537020
Tondeuse à cheveuxWAHL8786-451A ARCO SE
HéparineRotexmedicaPZN 386234025.000 I.E./mL
Kit de cautérisation haute températureBovie18010-00
Image-iT FX Signal EnhancerInvitrogenI36933Solution de blocage
Vert clair SFWaldeck1B-211Coloration trichrome
Pince microchirurgicaleFine Science Tools18055-04Micro-Serrefine - 4mm
MINI TREK Cathéter de dilatation coronaire 1,20 mm x 6 mm / Échange rapideAbbott1012268-06U
Hydrate de molybdatophosphoriqueMerck1.00532.0100Coloration trichrome
NaCl 0,9 %B.BraunPZN 06063042 N° d’art. : 3570160
Porte-aiguilleFine Science Tools12075-14
NovaminsulfonRatiopharmPZN 03530402Metamizole
Orange GWaldeck1B-221Coloration trichrome
ParaffineLeica biosystemsREF 39602004
PBS pH 7,4Gibco10010023
PFA 4 %Microscopie électronique Sciences#157135S
Ponceau S solution ServaElectrophorèse33427Coloration trichrome
Diluant d’anticorps primaireDakoS3022
Prolong Gold Solution de montageThermo FischerP36930Solution de montage pour lames colorées par immunofluorescence
Pointe fine remplaçableBovieH101
Resorcin-Fuchsin WeigertWaldeck2E-30Coloration trichrome
RimadylPfizer400684.00.00Carprofène
CiseauxFine Science Tools14028-10
Ciseaux Vannas-styleFine Science Tools15000-03
Diluant d’anticorps secondaireDakoS0809
Adhésif à action rapide MINIS 3x1gUHU45370Porte-lames en cyanoacrylate
Ted Pella21057
SM22abcamab10135Anticorps
SMAabcamab21027
Boîte de coloration desTed Pella21075
Microscope chirurgicalLeicaM651
Tabotamp fibrillaireEthicon431962Hémostat résorbable
Transpore Surgical Tape3M1527-1
U-100 Seringue à insulineBD Medical324825
Dilatateur de vaisseauFine Science Tools18603-14
Vitro-CludLangenbrinck04-0001
Weigerts fer hématoxyline KitMerck1.15973.0002Coloration trichrome
XylèneTh. Geyer3410
Pince à anticorps

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).
  2. Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. Intimal prol....

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Myointimal HyperplasiaBalloon DenudationMouse Abdominal AortaVessel Injury ModelAortic Balloon InjuryHistological StainingMasson s TrichromeSM22 MarkerHeparin SolutionSurgical Sutures

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