Cet article illustre un modèle murin pour étudier le développement de l’hyperplasie myointimal (MH) après une lésion aortique ballon.
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Article de méthode
Blessure axée sur le ballon pour provoquer l’hyperplasie Myointimal dans l’aorte abdominale de souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
L’utilisation de modèles animaux est essentielle pour une meilleure compréhension de la MH, une des principales causes de la sténose artérielle. Dans cet article, nous démontrons un modèle murin de ballon dénudation, qui est comparable aux modèles de lésion du navire établies dans les grands animaux. Le modèle de dénudation aorte avec des cathéters à ballonnet imite le contexte clinique et conduit à des changements physiologiques et pathobiological comparables. En bref, après avoir effectué une incision horizontale dans l' aorte abdominalis, un cathéter à ballonnet sera inséré dans le vaisseau, gonflé et introduit marqués. Gonflage du ballonnet conduira à des blessures de l’intima et une surdistension du navire. Après avoir retiré le cathéter, l’incision aortique sera fermée avec des points de suture unique. Le modèle présenté dans cet article est reproductible, facile à réaliser et peut être établie de manière rapide et fiable. Il est particulièrement approprié pour l’évaluation de coûteux agents thérapeutiques expérimentales, qui peuvent être appliqués de façon économique. À l’aide de différentes souches de souris knock-out, l’impact de différents gènes du développement MH peut être évaluée.
Introduction
La sténose artérielle dans les artères coronaires et périphériques a un effet important sur la morbidité et la mortalité des patients1. Un mécanisme pathologique sous-jacent est l’hyperplasie myointima (MH), qui se caractérise par une augmentation de la prolifération, la migration et la synthèse des protéines de la matrice extracellulaire du muscle lisse vasculaire des cellules (SMC)2. SMC se trouvent dans la couche de support du navire et de migrer lors de la stimulation à la surface de la lumière. Signaux stimulants incluent les facteurs de croissance, cytokines, contact cellule-cellule, lipides, les composants de la m....
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Protocole
Animaux a reçu tous les soins en conformité avec le Guide pour les principes des animaux de laboratoire, préparé par l’Institut des ressources animales de laboratoire et publié par le National Institutes of Health. Tous les protocoles d’animaux ont été approuvées par l’autorité locale responsable ('' Amt für Gesundheit und Verbraucherschutz, (Bureau pour la santé et la Protection des consommateurs) de Hansestadt Hamburg'').
1. préparation du cathéter
Remarque : Reportez-vous à la Table des matières pour plus d’informations concernant le cathéter.
- Prenons cathéter de la titulaire de cath....
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Résultats
Dénudation du ballon est un modèle approprié pour étudier le développement du MH chez la souris. Les animaux se remettre bien de la chirurgie et montrent une post-opération excellente condition physique. Nous avons créé ce modèle en 50 souris ayant moins de 3 % la mortalité due à l’intervention chirurgicale. Figures 1 b -C montrent les principales étapes chirurgicales. Après une incision de la peau le long de la linea alba, identifie.......
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Discussion
Cet article illustre un modèle murin pour étudier le développement de l’hyperplasie myointimal et permet l’exploration des processus pathologiques sous-jacent et les essais de nouveaux médicaments ou les options thérapeutiques.
L’étape la plus critique dans le présent protocole est la dénudation de l’aorte. Une attention particulière devrait être accordée au cours de cette étape car dénudation excessive conduira à la formation de l’anévrisme et la défaillance de modèle. En revanche, si la dénu.......
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
Les auteurs remercient Christiane Pahrmann pour son aide technique.
D.W. a été soutenu par la Foundation de Kade Max. T.D. a reçu des subventions de la Fondation de Kröner Else (2012_EKES.04) et la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DE2133/2-1_. S. S. a reçu des subventions de recherche de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG ; SCHR992/3-1, SCHR992/4-1).
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 10-0 Suture Ethilon | Ethicon | 2814G | |
| 3 mL Seringue | BD Medical | 309658 | |
| 37 % HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | |
| Suture prolène 5-0 | Ethicon | EH7229H | |
| Suture prolène 6-0 | Ethicon | 8706H | |
| Fuchsin acide | Sigma-Aldrich | F8129-25G | Coloration trichrome Solution |
| de récupération d’antigène | Dako | S1699 | |
| Azophloxin | Waldeck | 1B-103 | Coloration trichrome |
| Bepanthen Pommade pour les yeux et le nez | Bayer | 1578675 | Pommade pour les yeux |
| Betadine Solution de bétadine | Betadine Purdue Pharma | NDC :67618-152 | |
| C57BL/6J | Charles River | Numéro de stock 000664 | |
| Pince applicatrice | Fine Science Tools | 18056-14 | MÂCHOIRE DIMS : 4 x 0,75 mm LONGUEUR : 13 mm |
| Collagène 3 | abcam ab7778 | Anticorps | |
| DAPI | Thermo Fischer | D1306 | |
| Âne anti-Chèvre IgG AF555 | Invitrogen | A21432 | Anticorps secondaire |
| Âne anti-Lapin IgG AF488 | Invitrogen | A21206 | Anticorps secondaire |
| Âne anti-Lapin IgG AF488 | Invitrogen | A11055 | Secondaire anticorps |
| Âne anti-Lapin IgG AF555 | Invitrogen | A31572 | Anticorps secondaire |
| Éthanol 70 % | Th. Geyer | 2270 | |
| Éthanol 96 % | Th. Geyer | 2295 | |
| Éthanol absolu | Th. Geyer | 2246 | |
| FAP | abcam | ab28246 | anticorps |
| fine | Outils | scientifiques fins11251-20 | |
| Pince standard | Outils de science fine | 11023-10 | |
| Acide acétique glacial | Sigma-Aldrich | 537020 | |
| Tondeuse à cheveux | WAHL | 8786-451A ARCO SE | |
| Héparine | Rotexmedica | PZN 3862340 | 25.000 I.E./mL |
| Kit de cautérisation haute température | Bovie | 18010-00 | |
| Image-iT FX Signal Enhancer | Invitrogen | I36933 | Solution de blocage |
| Vert clair SF | Waldeck | 1B-211 | Coloration trichrome |
| Pince microchirurgicale | Fine Science Tools | 18055-04 | Micro-Serrefine - 4mm |
| MINI TREK Cathéter de dilatation coronaire 1,20 mm x 6 mm / Échange rapide | Abbott | 1012268-06U | |
| Hydrate de molybdatophosphorique | Merck | 1.00532.0100 | Coloration trichrome |
| NaCl 0,9 % | B.Braun | PZN 06063042 N° d’art. : 3570160 | |
| Porte-aiguille | Fine Science Tools | 12075-14 | |
| Novaminsulfon | Ratiopharm | PZN 03530402 | Metamizole |
| Orange G | Waldeck | 1B-221 | Coloration trichrome |
| Paraffine | Leica biosystems | REF 39602004 | |
| PBS pH 7,4 | Gibco | 10010023 | |
| PFA 4 % | Microscopie électronique Sciences | #157135S | |
| Ponceau S solution Serva | Electrophorèse | 33427 | Coloration trichrome |
| Diluant d’anticorps primaire | Dako | S3022 | |
| Prolong Gold Solution de montage | Thermo Fischer | P36930 | Solution de montage pour lames colorées par immunofluorescence |
| Pointe fine remplaçable | Bovie | H101 | |
| Resorcin-Fuchsin Weigert | Waldeck | 2E-30 | Coloration trichrome |
| Rimadyl | Pfizer | 400684.00.00 | Carprofène |
| Ciseaux | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| Ciseaux Vannas-style | Fine Science Tools | 15000-03 | |
| Diluant d’anticorps secondaire | Dako | S0809 | |
| Adhésif à action rapide MINIS 3x1g | UHU | 45370 | Porte-lames en cyanoacrylate |
| Ted Pella | 21057 | ||
| SM22 | abcam | ab10135 | Anticorps |
| SMA | abcam | ab21027 | |
| Boîte de coloration des | Ted Pella | 21075 | |
| Microscope chirurgical | Leica | M651 | |
| Tabotamp fibrillaire | Ethicon | 431962 | Hémostat résorbable |
| Transpore Surgical Tape | 3M | 1527-1 | |
| U-100 Seringue à insuline | BD Medical | 324825 | |
| Dilatateur de vaisseau | Fine Science Tools | 18603-14 | |
| Vitro-Clud | Langenbrinck | 04-0001 | |
| Weigerts fer hématoxyline Kit | Merck | 1.15973.0002 | Coloration trichrome |
| Xylène | Th. Geyer | 3410 |
Références
- Kochanek, K. D., Xu, J., Murphy, S. L., Minino, A. M., Kung, H. C. Deaths: final data for 2009. Natl Vital Stat Rep. 60 (3), 1-116 (2011).
- Austin, G. E., Ratliff, N. B., Hollman, J., Tabei, S., Phillips, D. F. Intimal prol....
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Réimpressions et autorisations
