Isolement des glandes mammaires de souris intacte, toute analyse d’Expression de la matrice extracellulaire et la morphologie de la glande

Christopher Thompson; Katherine Keck; Abigail Hielscher

doi:10.3791/56512

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Article de méthode

Isolement des glandes mammaires de souris intacte, toute analyse d’Expression de la matrice extracellulaire et la morphologie de la glande

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DOI :

10.3791/56512

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30 octobre 2017

Christopher Thompson¹ , Katherine Keck² , Abigail Hielscher²

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of Nebraska Medical Center, ²Department of Biomedical Sciences, GA-PCOM

Dans cet article

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour l’isolement des souris entière et intacte pour étudier l’expression de la matrice extracellulaire (ECM) et de la morphologie ductal des glandes mammaires. La souris #4 glandes abdominales ont été extraits des 8-10 semaines vieux nullipares les souris femelles, fixés dans du formol tamponné neutre, sectionnés et colorés par immunohistochimie pour protéines ECM.

Résumé

Cette procédure visait à récolter les #4 abdominale des glandes mammaires des femelles nullipares afin d’évaluer l’expression de l’ECM et architecture canalaire. Ici, une petite poche sous la peau a été créée à l’aide de ciseaux de Mayo, permettant une séparation des glandes dans le tissu sous-cutané de la péritoine sous-jacent. Visualisation des glandes ont été facilitée par l’utilisation de 3.5 loupes micro chirurgical x-R. La dépouille a été inversée et épinglé de retour permettant d’identifier les coussinets adipeux mammaires intacts. Chacune des glandes abdominales #4 a été carrément disséqué en faisant glisser la lame de bistouri Swann-Morton latéralement entre les glandes et la couche sous-cutanée. Immédiatement après la récolte, les glandes ont été placés dans 10 % de formol tamponné neutre pour le traitement des tissus ultérieures. L’excision de la glande entière est avantageuse car elle élimine principalement le risque d’exclure les tissus à l’échelle des interactions importantes entre les cellules épithéliales canalaires et autres populations cellulaires micro-environnementales qui pourraient manquer dans une biopsie partielle. Un inconvénient de la méthode est l’utilisation de coupes sériées de tissus fixés qui limite les analyses d’expression canalaire de la morphogénèse et la protéine à des endroits distincts au sein de la glande. Par conséquent, changements dans l’expression d’architecture et protéines canalaire en 3 dimensions (3D) n’est pas vérifiable. Dans l’ensemble, la technique est applicable aux études exigeant des glandes mammaires murins ensemble intacts pour les enquêtes en aval telles que le cancer morphogénèse ou du sein canalaire du développement.

Introduction

Le cancer du sein se caractérise par un degré important de tissu fibrose¹^,²^,³^,⁴. Dénommé l’ECM, cette entité non cellulaire se trouve à des degrés divers dans tous les tissus et se compose principalement d’un réseau complex de collagènes fibrillaires et non fibrillaire, élastine et de glycoprotéines en plus de diverses molécules de signalisation qui sont séquestré dans cette matrice. Dans des conditions homéostatiques, la déposition et la dégradation de l’ECM est étroitement contrôlée. ⁵ au cours de la tumorigenèse ma....