Acides gras saturés induit la mort des cellules macrophages associées aux céramides

Résumé

Nous illustrons une méthode directe pour calculer des macrophages de souris primaires des cellules de la moelle osseuse et une méthode simple pour préparer l’acide gras BSA conjugués. Ensuite, nous démontrons que les acides gras saturés peut induire la mort des cellules macrophages, et la mort de ces cellules est corrélée positivement avec accumulation cellulaire de niveaux de céramide.

Résumé

Les macrophages expriment très épidermique d’acide gras-protéine et protéine acide gras adipeuse. Ils ont activement l’absorption saturés et des acides gras insaturés, qui pourrait jouer un rôle essentiel dans la régulation de leurs fonctions immunitaires. De nombreuses études ont montré que les divers acides gras, saturés ou insaturé, mai possèdent différents impacts sur la croissance cellulaire et la fonction. Toutefois, les approches utilisées pour la préparation de l’acide gras varient, qui peut conduire à des résultats non physiologiques. Albumine sérique, un support naturel pour les acides gras dans le sang périphérique chez les mammifères, est recommandé pour former un complexe avec le sel de sodium des acides gras conjugué pour étudier la fonction acide gras dans les cellules de mammifères, ce qui minimise la toxicité du savon d’acide gras. Ainsi, un simple, relativement rapide, chauffage et sonification méthode est développé et présenté ici pour formation conjuguée de l’acide gras BSA. Les auteurs décrivent un protocole à l’aide d’acides gras saturés, notamment les acides stéarique pour induire la mort cellulaire sévère dans les macrophages de la moelle osseuse provenant de souris. Par ailleurs, nous démontrent que la mort cellulaire d’induite par l’acide gras saturé est corrélée positivement avec des niveaux de céramide cellulaires accumulés. Cette méthode peut être appliquée pour les études de l’impact des acides gras sur les autres cellules de mammifères.

Introduction

Les acides gras jouent un rôle essentiel dans le métabolisme énergétique et dans la synthèse des phospholipides membranaires dans différents types de cellules. Les acides gras ont une faible solubilité dans l’eau. Une préparation appropriée de l’acide gras est d’une importance cruciale pour étudier les fonctions biologiques des acides gras dans les cellules de mammifères. Lorsque les acides gras sont préparés avec de l’éthanol, beaucoup d’acides gras peuvent montrer leur effet toxique savon (détergent) sur la membrane cellulaire, même à des concentrations relativement faibles¹. Un transporteur naturel, important pour les acides gras libres dans....

Protocole

le protocole a été approuvé par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) de l’Université de Louisville.

1. Macrophages dérivés la moelle osseuse de souris (BMDMs)

1. euthanasier une souris de type sauvage âgés de 6 à 8 semaines, en bonne santé à l’aide de CO ₂. Épinglez-le vers le bas pour un panneau de mousse et vaporiser avec l’éthanol à 70 % jusqu'à ce qu’il est trempé. Enlever les os de tibia/fémur avec pinces et ciseaux. Mettez-les dans un plat de Pétri avec 5 mL 1 x solution saline tamponnée au phosphate (PBS). Effectuez toutes les procédures dans des conditions stériles.
2. Découpé les deux ....

Résultats

L’obésité augmente les concentrations en acides gras libres dans le sérum. Comme les phagocytes professionnels, macrophages prennent activement des acides gras pour maintenir l’homéostasie de l’hôte. Au cours de ces processus, surchargée de lipides peuvent provoquer la mort des cellules macrophages. À cette fin, nous avons cultivé BMDMs in vitro avec des niveaux d’acides gras alimentaires et la mort des cellules macrophages mesurée à l’aide de coloration de cytométrie en flux obè.......

Discussion

La bonne préparation de solution d’acide gras est d’une importance critique pour étudier la fonction biologique des acides gras. La neutralisation de l’acide gras augmente sa solubilité dans une solution aqueuse. Toutefois, les sels de sodium des acides gras, en particulier les acides gras saturés, sont encore de faible solubilité dans l’eau ou PBS que nous avons observé. Une méthode consiste à utiliser l’éthanol à 95-100 % pour aider à dissoudre les acides gras¹. En utilisant cette méthode, on pe.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Bain à ultrasons CPX  ;	Bransonic	Modèle 2800
Palmitate de sodium (PA)	Nu-Chek Prep, Inc.	S-1109	M.W. 278
Stéarate de sodium (SA)	Nu-Chek Prep, Inc.	S-1111	M.W. 306
Albumine sérique bovine (BSA), sans acides gras	Fisher Scientific	9048-46-8
Facteur de stimulation des colonies de macrophages de souris (mM-CSF)  ;	Technologie de signalisation cellulaire,  ; Inc.	5228
RPMI 1640	VWR International	71002-878
Annexine V, conjugué Alexa Fluor 488	Fisher Scientific	A13201
7-AAD	BD Biosciences	559925
Anticorps monoclonal anti-céramide (IgM de souris)	Sigma	C8104-50TST	Clone : MID 15B4
Anticorps IgM anti-souris de chèvre, & micro-chaîne, FITC conjugué	Sigma	AP128F
Tampon de fixation	Biolegend	420801
Tampon de perméabilisation	Ebioscience	4307693
Tampon de lyse des globules rouges  ;	Sigma	11814389001
Tampon de liaison Annexine V	BD Biosciences	556454
cellules L929	ATCC	CCL-1
Corning  ; Lève-cellule  ;	Fisher Scientific	07-200-364
Remarque : M.W. est pour le poids moléculaire.