Trans-tympaniske Drug Delivery til behandling af ototoksicitet
Summary
Vi præsenterer en teknik til lokaliserede administration af narkotika gennem ruten trans-tympaniske ind i cochlea. Medicinafgivelse gennem denne rute ville ikke forstyrre anti-cancer effekt af de kemoterapeutiske stoffer såsom cisplatin.
Abstract
Systemisk administration af beskyttende agenter til behandling af narkotika-induceret ototoksicitet er begrænset af den mulighed, at disse beskyttende stoffer kan forstyrre den kemoterapeutiske effekten af de primære lægemidler. Dette gælder især for stof cisplatin, hvis anticancer handlinger er svækket af antioxidanter, som giver tilstrækkelig beskyttelse mod tab af hørelse. Andre aktuelle eller potentielle otoprotective agenter kunne udgøre et lignende problem, hvis administreres systemisk. Anvendelse af forskellige biologiske stoffer eller beskyttende agenter direkte til cochlea ville give mulighed for høje niveauer af disse stoffer lokalt med begrænsede systemiske bivirkninger. I denne rapport viser vi en trans-tympaniske metode til levering af forskellige lægemidler eller biologiske reagenser til cochlea, som bør øge grundlæggende videnskabsforskning i cochlea og give en enkel måde at brugen af otoprotective agenter i klinikkerne. Denne rapport beskriver en metode til trans-tympaniske medicinafgivelse og giver eksempler på, hvordan denne teknik har været anvendt med succes i forsøgsdyr til at behandle cisplatin ototoksicitet.
Introduction
Den perifere auditive system er udsøgt følsomme medicin såsom cisplatin og aminoglykosid antibiotika. Cisplatin er en himmelvidt anvendte kemoterapeutiske agent for behandling af en lang række solide tumorer, såsom æggestokkene, testikelkræft og hoved og hals kræft. Ototoksicitet oplevet med brug af dette stof er dosis-begrænsning og ret almindelig, påvirker 75-100% af patienterne behandlet1. Andre stoffer, såsom carboplatin og oxaliplatin, er dukket op som alternativer til cisplatin2,3,4,5, men deres anvendelighed er begrænset til nogle kræftformer.
Tidlige studier har vist den kritiske rolle af reaktive ilt arter (ROS) i mægle ototoksicitet produceret af cisplatin og aminoglykosider. Efterfølgende undersøgelser viste, at NOX3 isoform af NADPH oxidase er den primære kilde til ROS i øresneglen, og aktiveres af cisplatin6,7. Generation af ROS kompromiser øget antioxidant buffer kapaciteten af celler, fører til lipid fedtstoffer af cellulære membraner8. Derudover øger cisplatin produktionen af hydroxylradikaler, som genererer højtoksiske aldehyd 4-hydroxynonenal (4-HNE), en initiativtager til celle død9,10. Baseret på disse resultater, er blevet undersøgt flere antioxidanter til behandling af cisplatin ototoksicitet. Disse omfatter N-acetyl cystein (NAC), sodium thiosulfate (STS), amifostine og D-methionin. En stor bekymring for antioxidant terapi er dog at disse antioxidanter kan reducere cisplatin kemoterapeutiske effekt når det administreres systemisk11 gennem interaktion af cisplatin med thiol grupper i antioxidant molekyler.
I lyset af disse problemer med antioxidant terapi var målet med denne undersøgelse at undersøge de trans-tympaniske rute levere antioxidanter og andre stoffer til cochlea at reducere tab af hørelse. Trans-tympaniske rute stof og korte indblanding (si) RNA, beskrives nedenfor, vises særligt lovende.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ruten trans-tympaniske administration tillader lokaliserede leveringen af narkotika og andre agenter til cochlea, der ellers kunne producere betydelige systemiske bivirkninger hvis administreres systemisk. Denne metode af drug administration giver mulighed for hurtig adgang til lægemidler til stedet, handling ved betydeligt højere doser, end der ville opnås gennem den systemiske rute. Resultaterne præsenteres her og offentliggjort tidligere viste at trans-tympaniske administration af [R] – N – phenyl isoprop…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Det arbejde, der er beskrevet i denne artikel blev støttet af en NCI RO1 CA166907, NIDCD RO1-DC 002396 og RO3 DC011621.
Materials
| Ketathesia (100 mg/ml) 10 ml | Henry Schein | 56344 | Controlled substance |
| AnaSed Injection/Xylazine (20 mg/ml) 20 ml | Henry Schein | 33197 | |
| 2.5 mm disposable ear specula | Welch Allyn | 52432 | |
| Surgical Scope | Zeiss | ||
| 29 G X 1/2 insulin syringe | Fisher Scientific | 14-841-32 | Can be purchased through other vendors |
| cis-Diammineplatinum(II) dichloride | Sigma Aldrich | P4394 | TOXIC – wear proper PPE |
| Harvard 50-7103 Homeothermic Blanket Control Unit | Harvard Apparatus | Series 863 | |
| Excel International 21 G X 3/4 butterfly needle | Fisher | 14-840-34 | Can be purchased through other vendors |
| BSP Single Speed Syringe Pump | Brain Tree Sci, Inc | BSP-99 | |
| Pulse Sound Measurement System | Bruel & Kjaer | Pulse 13 software | |
| High-Frequency Module | Bruel & Kjaer | 3560C | |
| 1/8″ Pressure-field Microphone —-Type 4138 | Bruel & Kjaer | bp2030 | |
| High Frequency Transducer | Intelligent Hearing System | M014600 | |
| Opti-Amp Power Transmitter | Intelligent Hearing System | M013010P | |
| SmartEP ABR System | Intelligent Hearing System | M011110 | |
| Disposable Subdermal EEG Electrodes | CareFusion | 019-409700 | |
| 16% Formaldehyde, Methanol-free | Fisher Scientific | 28908 | TOXIC – wear proper PPE |
| 7 mL Borosilicate Glass Scintillation Vial | Fisher Scientific | 03-337-26 | Can be purchased through other vendors |
| EDTA | Fisher Scientific | BP118-500 | Can be purchased through other vendors |
| Sucrose | Fisher Scientific | S5-500 | Can be purchased through other vendors |
| Tissue Plus OCT Compound | Fisher Scientific | 4585 | |
| CryoMolds (15 mm x 15 mm x 5mm) | Fisher Scientific | 22-363-553 | Can be purchased through other vendors |
| Microscope Slides (25mm x 75mm) | MidSci | 1354W | Can be purchased through other vendors |
| Coverslips (22 x 22 x 1) | Fisher Scientific | 12-542-B | Can be purchased through other vendors |
| Poly-L-Lysine Solution (0.01%) | EMD Millipore | A-005-C | Can be purchased through other vendors |
| HM525 NX Cryostat | Thermo Fischer Scientific | 956640 | |
| MX35 Premier Disposable Low-Profile Microtome Blades | Thermo Fischer Scientific | 3052835 | |
| Wheaton™ Glass 20-Slide Staining Dish with Removable Rack | Fisher Scientific | 08-812 | |
| Super Pap Pen Liquid Blocker | Ted Pella, Inc. | 22309 | |
| Normal Donkey Serum | Jackson Immuno Research | 017-000-121 | Can be purchased through other vendors |
| TritonX-100 | Acros | 21568 | Can be purchased through other vendors |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Can be purchased through other vendors |
| Phospho-Stat1 (Ser727) antibody | Cell Signaling | 9177 | |
| VR1 Antibody (C-15) | Santa Cruz | sc-12503 | |
| DyLight 488 Donkey anti Rabbit | Jackson Immuno Research | 711-485-152 | Discontinued |
| DyLight 488 Donkey anti Goat | Jackson Immuno Research | 705-485-003 | Discontinued |
| Rhodamine (TRTIC) Donkey anti Rabbit | Jackson Immuno Research | 711-025-152 | Discontinued |
| ProLong® Diamond Antifade Mountant w/ DAPI | Thermo Fisher | P36971 | |
| (−)-N6-(2-Phenylisopropyl)adenosine | Sigma Aldrich | P4532 | |
| 8-Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine | Sigma Aldrich | C101 | |
| siRNA pSTAT1 | Qiagen | Custome Made | Kaur et al. 201120 |
| siRNA NOX3 | Qiagen | Custome Made | Kaur et al. 201120 |
| Scrambled Negative Control siRNA | Qiagen | 1022076 | Kaur et al. 201120 |
References
- McKeage, M. J. Comparative adverse effect profiles of platinum drugs. Drug Saf. 13 (4), 228-244 (1995).
- Boulikas, T., Vougiouka, M. Cisplatin and platinum drugs at the molecular level. Oncol Rep. 10 (6), 1663-1682 (2003).
- Fouladi, M., et al. Phase II study of oxaliplatin in children with recurrent or refractory medulloblastoma, supratentorial primitive neuroectodermal tumors, and atypical teratoid rhabdoid tumors: a pediatric brain tumor consortium study. Cancer. 107 (9), 2291-2297 (2006).
- Pasetto, L. M., D’Andrea, M. R., Rossi, E., Monfardini, S. Oxaliplatin-related neurotoxicity: how and why. Crit Rev Oncol Hematol. 59 (2), 159-168 (2006).
- Ardizzoni, A., et al. Cisplatin- versus carboplatin-based chemotherapy in first-line treatment of advanced non-small-cell lung cancer: an individual patient data meta-analysis. J Natl Cancer Inst. 99 (11), 847-857 (2007).
- Banfi, B., Malgrange, B., Knisz, J., Steger, K., Dubois-Dauphin, M., Krause, K. H. NOX3, a superoxide-generating NADPH oxidase of the inner ear. J Biol Chem. 279 (44), 46065-46072 (2004).
- Mukherjea, D., Whitworth, C. A., Nandish, S., Dunaway, G. A., Rybak, L. P., Ramkumar, V. Expression of the kidney injury molecule 1 in the rat cochlea and induction by cisplatin. Neurosciences. 139 (2), 733-740 (2006).
- Rybak, L. P., Husain, K., Morris, C., Whitworth, C., Somani, S. Effect of protective agents against cisplatin ototoxicity. Am J Otol. 21 (4), 513-520 (2000).
- Lee, J. E., et al. Role of reactive radicals in degeneration of the auditory system of mice following cisplatin treatment. Acta Otolaryngol. 124 (10), 1131-1135 (2004).
- Lee, J. E., et al. Mechanisms of apoptosis induced by cisplatin in marginal cells in mouse stria vascularis. ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec. 66 (3), 111-118 (2004).
- Lawenda, B. D., Kelly, K. M., Ladas, E. J., Sagar, S. M., Vickers, A., Blumberg, J. B. Should supplemental antioxidant administration be avoided during chemotherapy and radiation therapy. J Natl Cancer Inst. 100 (11), 773-783 (2008).
- Akil, O., Oursler, A. E., Fan, K., Lustig, L. R. Mouse auditory brainstem response testing. Bio Protoc. 6 (6), 1768 (2016).
- Montgomery, S. C., Cox, B. C. Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea. J. Vis. Exp. (107), e53561 (2016).
- Whitlon, D. S., Szakaly, R., Greiner, M. A. Cryoembedding and sectioning of cochleas for immunocytochemistry and in situ hybridization. Brain Res Brain Res Protoc. 6 (3), 159-166 (2001).
- Londos, C., Cooper, D. M., Wolff, J. Subclasses of external adenosine receptors. Proc Natl Acad Sci. 77 (5), 2551-2554 (1980).
- Lohse, M. J., Klotz, K. N., Lindenborn-Fotinos, J., Reddington, M., Schwabe, U., Olsson, R. A. 8-Cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine (DPCPX)–a selective high affinity antagonist radioligand for A1 adenosine receptors. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 336 (2), 204-210 (1987).
- Rybak, L. P., Whitworth, C., Scott, V., Weberg, A. D., Bhardwaj, B. Rat as a potential model for hearing loss in biotinidase deficiency. Ann Otol Rhinol Laryngol. 100 (4), 294-300 (1991).
- Mukherjea, D., et al. NOX3 NADPH oxidase couples transient receptor potential vanilloid 1 to signal transducer and activator of transcription 1-mediated inflammation and hearing loss. Antioxid Redox Signal. 14 (6), 999-1010 (2011).
- Kaur, T., et al. Adenosine A1 receptor protects against cisplatin ototoxicity by suppressing the NOX3/STAT1 inflammatory pathway in the cochlea. J Neurosci. 36 (14), 3962-3977 (2016).
- Kaur, T., Mukherjea, D., Sheehan, K., Jajoo, S., Rybak, L. P., Ramkumar, V. Short interfering RNA against STAT1 attenuates cisplatin-induced ototoxicity in the rat by suppressing inflammation. Cell Death Dis. 2 (180), (2011).
